膽固醇24S-羥化酶基因rs754203多態性與阿爾茨海默病發病風險的Meta分析

胡平 馮國昌 張華強

(青島市疾病預防控制中心 青島市預防醫學研究院，山東 青島 266000)

阿爾茨海默病(AD)是一種伴有認知、行為和功能失常的進行性的神經變性疾病，是老年癡呆的一種最常見的形式〔1〕。AD致殘率和死亡率高，已成為繼心血管病、腦血管病和癌癥之后威脅老年人健康的第四大殺手〔2〕。研究表明，高膽固醇代謝是AD的一個風險因素。膽固醇24S-羥化酶(CYP46A1)基因是細胞色素P450家族成員，是一個與脂代謝關系密切的基因〔3〕。該基因的產物CYP46酶，是顱內膽固醇轉化為24S-羥化膽固醇過程中的限速酶〔4〕。因此，CYP46A1基因可能涉及AD的發病機制。

目前關于CYP46A1基因第二個內含子rs754203多態性與AD關系的研究比較受關注，但研究結果并不完全一致。本研究搜集了較為全面的文獻，對相關病例對照研究(RCT)進行Meta分析，定量評價CYP46A1基因rs754203多態性基因與AD發病風險的相關性。

1 資料與方法

1.1檢索策略 計算機檢索PubMed、中國知網、萬方數據庫及維普數據庫，搜集有關CYP46A1基因rs754203多態性與AD發病風險相關性的RCT，檢索時限為建庫至2017年12月。檢索采用主題詞和自由詞結合的方式進行。檢索語種限定為中文和英文。中文檢索詞包括膽固醇24S-羥化酶、CYP46A1、rs754203、基因多態性、阿爾茨海默病；英文檢索詞包括：cholesterol 24S-hydroxylase、CYP46A1、rs754203、polymorphism、Alzheimer′s disease。

1.2文獻篩選

1.2.1納入標準 ①公開發表的關于CYP46A1基因rs754203多態性與AD的RCT；②文獻中可直接查到或可以間接推算確切的基因型頻數；③診斷標準明確，采用美國國立神經病學及語言障礙和腦卒中研究所——老年癡呆及相關學會(NINCDS-ADRDA)標準、精神疾病診斷和統計手冊(DSM-Ⅳ)、修訂版精神疾病診斷和統計手冊(DSM-Ⅲ-R)、阿爾茨海默病聯合登記協作組織(CERAD)標準；④納入研究的樣本數據明確且可靠；⑤對同一人群或重復文獻的報道選擇文獻質量較高的一篇。

1.2.2剔除標準 ①綜述、會議摘要類文獻；②未涉及CYP46A1基因rs754203多態性基因頻率的研究；③無法獲取有效數據的文獻；④重復發表文獻。

1.3文獻篩選與資料提取 由2位研究者根據納入與排除標準獨立篩選文獻、提取資料，如遇分歧則由第三方協助裁定。資料提取內容：第一作者的姓名，發表年限，研究人群的種族和國家，病例組及對照組的基本信息(包括性別分布、平均年齡、診斷標準、基因型及基因分布、樣本量)，對照組的基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡(HWE)法則。

1.4統計分析 應用STATA11.0軟件。①對各納入研究中對照組基因型分布進行Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗，計算各組的χ2值，以P<0.05為檢驗水準。②通過計算 3種基因型〔等位基因模型(C vs T)、顯性模型(CC+CT vs TT)、隱性模型(CC vs CT+TT)〕獲得合并比值比(OR)值及其 95%可信區間(CI)，用以評估CYP46A1基因rs754203多態性和AD發病風險之間的關聯強度，并結合人群種族情況進行亞組分析。③用I2統計量檢驗法評估不同研究間異質性，對于異質性可以忽略的情況(I2值<50%)，采用固定效應模型進行統計量的合并；否則采用隨機效應模型。④應用剔除法進行敏感性分析，對剩余研究重新合并效應量，觀察結果的穩定性。⑤繪制漏斗圖評估發表偏倚。

2 結 果

2.1文獻檢索情況 文獻檢索流程見圖1，最終納入22篇文獻〔5～26〕26組數據進行Meta分析。納入文獻研究對象包括病例組4 956例，對照組4 994例，其中8組數據是關于中國人的研究，16組數據是關于高加索人的研究，剩余的2組中1組是非裔美國人，另1組研究人群的種族不明。見表1。

圖1 文獻篩選流程及結果

2.2Meta分析結果

2.2.1等位基因模型(C vs T) 異質性檢驗I2=54.5%，故采用隨機效應模型進行分析，Meta分析結果顯示:在等位基因模型下，CYP46A1基因rs754203多態性與AD的發病無明顯相關性〔OR= 0.976，95%CI(0.884～1.077)〕。去除對照組基因型不符合HWE的4個研究〔9,10,12,22〕后，結果也無統計學意義〔OR=0.984，95%CI(0.886～1.092)〕。基于人群種族進行亞組分析的結果與整體分析結果一致〔中國人：OR=0.912，95%CI(0.678～1.225)；高加索人：OR=0.997，95%CI(0.883～1.126)〕。見表2。

表1 納入研究基本特征(n)

續表1 納入研究基本特征(n)

1)對異質性產生主要影響的研究

2.2.2顯性模型(CC+CT vs TT) 異質性檢驗I2=58.1%，故采用隨機效應模型進行分析，Meta分析結果顯示:在顯性模型下，CYP46A1基因rs754203多態性與AD的發病無明顯相關性〔OR= 0.943，95%CI(0.826～1.076)〕。去除對照組基因型不符合HWE的4個研究〔9,10,12,22〕后，結果也無統計學意義〔OR=0.947，95%CI(0.820～1.094)〕。基于人群種族進行亞組分析結果與整體分析結果一致〔中國人：OR=0.812，95%CI(0.530～1.246)；高加索人：OR=0.991，95%CI(0.845～1.163)〕。見表2、圖2。

表2 CYP46A1基因rs754203多態性與AD發病相關性Meta分析結果

2.2.3隱性模型(CC vs CT+TT) 異質性檢驗I2= 26.2%，故采用固定效應模型進行分析，Meta分析結果顯示:在隱性模型下，CYP46A1基因rs754203多態性與AD的發病無明顯相關性〔OR=1.045，95%CI(0.904～1.207)〕。去除對照組基因型不符合HWE的4個研究〔9,10,12,22〕后，結果也無統計學意義〔OR=1.125，95%CI(0.963～1.315)〕。基于人群種族進行亞組分析結果與整體分析結果一致〔中國人：OR=1.222，95%CI(0.837～1.783)；高加索人：OR=1.085，95%CI(0.912～1.292)〕。見表2。

2.3敏感性分析 剔除對照組基因型不符合HWE和在各個模型中對異質性產生主要影響的研究后，對剩余研究重新進行Meta分析，結果顯示各遺傳模型合并效應量也均未發生明顯變化，說明本次Meta分析結果比較穩定。見表2。

2.4發表偏倚評估 剔除對照組基因型不符合HWE和在各個模型中對異質性產生主要影響的研究后，對是否存在發表偏倚進行評估。漏斗圖顯示，各點之間對稱性較好，說明發表偏倚較小；應用Egger線性回歸法對漏斗圖對稱性進行定量評價，結果也提示無明顯發表偏倚(C vs T：P=0.244；CC+CT vs TT：P=0.235；CC vs CT+TT：P=0.418)。見圖3。

圖2 去除對照組基因型不符合HWE后，CYP46A1基因rs754203多態性與AD發病風險的Meta分析(CC+CT vs TT)

圖3 CYP46A1基因rs754203多態性與AD發病風險的漏斗圖(CC+CT vs TT)

3 討 論

AD為老年神經變性疾病，近年來關于AD病因與發病機制及治療方面的研究取得了較大的進步，特別是關于AD基因的研究已成為目前研究的熱點。Bogdanovic等〔27〕于2001年首次對CYP46A1基因與AD之間的關系進行了研究報道。從這以后，大量的研究開始關注CYP46A1基因在AD病因學上的重要性。

本次Meta分析結果顯示,人群AD與CYP46A1基因rs754203多態性無顯著關聯。無論是對所有研究進行統計分析還是去除對照組基因型不符合HWE的研究進行分析，在三種模型中均無統計學意義。考慮到不同的人群種族的基因型頻率不同及不同的遺傳背景對AD的遺傳易感性不一樣，我們對不同種族中CYP46A1基因rs754203多態性位點與AD的相關性進行了亞組分析。研究結果進一步證實了CYP46A1基因rs754203多態位點與AD發病風險沒有相關性。為驗證Meta分析檢查結果的穩定性，本文還進行了敏感性分析。去除對照組基因型不符合HWE和各個模型中對結果產生主要異質性的研究后得到的結果與之前的結果相似。此外，對CYP46A1基因rs754203多態性的各研究是否存在發表偏倚進行漏斗圖觀察，未見明顯的發表偏倚，證明結果較穩定可靠。綜上，本次Meta分析結果具有較高的科學性。

AlzGene數據庫是對AD遺傳易感性進行Meta分析的一個重要工具。此次Meta分析所得結果與AlzGene數據庫結果一致：CYP46A1基因rs754203多態性與AD沒有相關性。與AlzGene數據庫Meta分析的結果相比，此次結果更具有說服力和可靠性。因為：①此次Meta分析納入的研究數據比AlzGene數據庫的文獻多3組；②此次的Meta分析對CYP46A1基因rs754203多態性與AD關系的等位基因、顯性和隱性三種模型進行了分析，而AlzGene數據庫僅分析了等位基因模型；③此次的Meta分析對每種模型的異質性都進行了計算分析，并根據異質性的大小選擇固定效應模型或隨機效應模型進行統計量的合并，而AlzGene數據庫都采用了隨機效應模型進行統計量的合并。

Meta分析是一種可進行全面了解、綜合分析和客觀評價的統計學處理方法，通過合并樣本增大樣本量，彌補單個研究的不足，提高統計檢驗功效，得到更可信的結論，越來越多地應用在醫學領域。然而此次Meta分析亦存在一定局限性：①只納入了公開發表的中英文文獻，可能存在選擇偏倚；②每篇文獻的對照組納入標準不完全一樣，有可能會影響分析結果；③AD是一個基因與環境共同作用的疾病，可能存在基因與環境之間的交互作用，而本研究并未闡述其交互作用。

綜上所述，基于現有Meta分析結果顯示，CYP46A1基因rs754203多態性可能與AD無關。