裙帶菜多肽的制備及其抗氧化活性的研究

畢秋蕓

(淄博職業(yè)學(xué)院，山東 淄博 255314)

隨著人們對(duì)陸地資源的不斷開(kāi)發(fā)，人們可利用的資源越來(lái)越少，其中很多資源已面臨枯竭的危險(xiǎn)。而相比之下，海洋中蘊(yùn)含的資源極其豐富，對(duì)海洋生物資源的開(kāi)發(fā)利用至今仍是人類涉及不多的領(lǐng)域，所以海洋生物資源的開(kāi)發(fā)潛力巨大。裙帶菜屬褐藻門、裙帶菜屬，是經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的大型褐藻，蛋白質(zhì)含量較高，約占藻體的16%左右，僅次于龍須菜和紫菜[1]，是我國(guó)北方大規(guī)模栽培的主要藻類。但目前，我國(guó)對(duì)裙帶菜的開(kāi)發(fā)主要以提取海藻酸鈉和碘為主，利用率僅達(dá)30%左右，大部分裙帶菜蛋白成了加工廢棄物，未得到有效利用[2]，造成了資源的極大浪費(fèi)。近年來(lái)，隨著對(duì)海洋資源的不斷開(kāi)發(fā)，海藻抗氧化肽迅速成為國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者研究的熱點(diǎn)，部分學(xué)者已從海藻中分離得到多種可清除體內(nèi)自由基、具有抗氧化作用的海藻活性肽[3]，顯示了海藻類蛋白能夠作為水溶性抗氧化劑的新資源，但對(duì)裙帶菜蛋白酶解制備抗氧化肽的研究還相對(duì)較少，僅有于慧等在2017年探究了響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化裙帶菜蛋白酶解工藝，并研究了酶解產(chǎn)物的抗氧化活性，顯示裙帶菜多肽具有較強(qiáng)的亞鐵離子螯合能力[4]。本實(shí)驗(yàn)利用多種蛋白酶水解裙帶菜蛋白，在酶解單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，運(yùn)用正交試驗(yàn)法對(duì)水解工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化，得到裙帶菜多肽的最佳制備條件。并對(duì)酶解后的裙帶菜多肽進(jìn)行了超濾分級(jí)，研究分級(jí)后不同分子量段的裙帶菜多肽的抗氧化活性，為裙帶菜的深加工提供了一定理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮裙帶：購(gòu)于海貨市場(chǎng)，洗凈曬干后，用組織粉碎機(jī)粉碎，包裝密封，于陰涼干燥處保存。

復(fù)合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶：丹麥諾維信有限公司；堿性蛋白酶、胃蛋白酶：杰能科(中國(guó))生物工程有限公司；DPPH、菲洛嗪：美國(guó)Sigma公司；抗壞血酸、三氯乙酸、三氯化鐵、鐵氰化鉀、無(wú)水乙醇等：均為分析純。

1.2 儀器和設(shè)備

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 裙帶菜蛋白質(zhì)的提取方法

將裙帶菜洗凈、去雜，50 ℃恒溫烘干粉碎，過(guò)60目篩，加入一定量的石油醚脫脂2次，每次6 h，脫脂后于50 ℃烘干恒重。稱取一定量的脫脂粉末，放入圓底燒瓶，按照液料比23∶1的比例加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.2%的氫氧化鈉溶液在55 ℃的溫度條件下提取5 h后過(guò)濾，向?yàn)V液中加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至5.0，在4000 r/min條件下離心20 min，得沉淀，冷凍干燥后即為裙帶菜蛋白。

1.3.2 裙帶菜多肽的制備方法

一定量的裙帶菜蛋白質(zhì)→加緩沖溶液→調(diào)節(jié)至酶解條件→酶解→85 ℃滅酶15 min→5000 r/min離心20 min→取上清液→冷凍干燥→裙帶菜多肽。

1.3.3 還原力的測(cè)定

取一定量的裙帶菜多肽，加入3.5 mL 0.2 mol/L的磷酸緩沖液(pH 6.6)、2.5 mL 1%的鐵氰化鉀溶液，混勻后于50 ℃水浴保溫30 min，再加入2.5 mL 10%的三氯乙酸溶液，混勻后于3000 r/min離心10 min，取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸餾水和0.5 mL 0.1%的FeCl3溶液，混勻，靜置10 min后，于波長(zhǎng)700 nm處測(cè)定其吸光度，記為酶解液的還原力。吸光度越大，表示還原能力越強(qiáng)[5]。

1.3.4 裙帶菜多肽超濾分級(jí)

取一定量的裙帶菜蛋白質(zhì)溶于水中，調(diào)節(jié)體系pH至7.0，沉淀未反應(yīng)的蛋白，經(jīng)4000 r/min離心。在室溫條件下，使用Pellicon-2超濾裝置對(duì)上清液進(jìn)行超濾分離，進(jìn)行多步分級(jí)(截留分子量Mw>10 kDa，5～10 kDa，3～5 kDa，1～3 kDa，<1 kDa)。

1.3.5 裙帶菜多肽清除DPPH自由基能力和亞鐵離子螯合能力的測(cè)定

配制一定濃度的裙帶菜多肽液，按照于慧等的方法進(jìn)行測(cè)定。

1.3.6 裙帶菜多肽·OH清除能力和O2-·清除能力的測(cè)定

配制一定濃度的裙帶菜多肽液，按照齊希光等的方法進(jìn)行測(cè)定[6]。

1.3.7 裙帶菜多肽分子量分布的測(cè)定

裙帶菜多肽的分子量測(cè)定方法及條件設(shè)置參照張友維[7]的方法。

1.3.8 裙帶菜多肽氨基酸組成的測(cè)定

裙帶菜多肽的氨基酸組成測(cè)定，以外標(biāo)法于安捷倫AG1100型氨基酸專用液相色譜儀進(jìn)行定量分析，具體樣品預(yù)處理和測(cè)定方法參照郭旭[8]的方法。

2 結(jié)果與分析

2.1 裙帶菜蛋白質(zhì)組分分析

表1 裙帶菜蛋白質(zhì)組成成分分析Table 1 The composition analysis of Undaria pinnatifida protein g/100 g

由表1可知，干裙帶菜中的主要成分為蛋白質(zhì)和多糖，其中蛋白質(zhì)的含量為12.11 g/100 g，多糖的含量為38.27 g/100 g。經(jīng)過(guò)本實(shí)驗(yàn)提取后的裙帶菜蛋白的純度可達(dá)到83.21 g/100 g。

2.2 裙帶菜蛋白質(zhì)酶解單因素試驗(yàn)

2.2.1 蛋白酶種類及酶解時(shí)間對(duì)裙帶菜多肽抗氧化活性的影響

按照一定的料液比和加酶量，分別加入木瓜蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、胃蛋白酶，分別于各自的最適酶解條件下，酶解1，2，3，4，5，6 h后，于85 ℃滅酶15 min，離心后取其上清液，冷凍干燥，測(cè)定其總還原力。

由圖1可知，隨著酶解時(shí)間的不斷延長(zhǎng)，5種酶酶解制備的裙帶菜多肽的總還原力呈現(xiàn)先增加后逐漸降低的趨勢(shì)。堿性蛋白酶酶解制備的裙帶菜多肽的總還原力明顯高于其他4種酶。其中木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解制備的裙帶菜多肽的還原力相對(duì)較弱，復(fù)合蛋白酶和胃蛋白酶酶解制備的裙帶菜多肽的還原力處于5種酶的中等水平，堿性蛋白酶酶解制備的裙帶菜多肽的還原力最強(qiáng)。其中堿性蛋白酶酶解3 h后制備的裙帶菜多肽的總還原力最高，吸光值達(dá)到0.321。因此，選擇堿性蛋白酶作為單因素試驗(yàn)的最佳酶解用酶，3 h為最佳酶解時(shí)間。

圖1 酶種類及酶解時(shí)間對(duì)裙帶菜多肽還原能力的影響Fig.1 The influence of enzyme types and enzymatic hydrolysis time on reduction ability of Undaria pinnatifida peptides

2.2.2 料液比對(duì)裙帶菜多肽抗氧化活性的影響

選擇堿性蛋白酶，按照1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%的料液比，按照一定的加酶量，在堿性蛋白酶理論最適pH值和溫度條件下水浴反應(yīng)3 h，制備裙帶菜多肽，并測(cè)定其總還原力。

圖2 料液比對(duì)裙帶菜多肽還原能力的影響Fig.2 The influence of solid-to-liquid ratio on reduction ability of Undaria pinnatifida peptides

由圖2可知，料液比在1%～4%范圍內(nèi)，隨著料液比的不斷增大，裙帶菜多肽的還原力不斷增強(qiáng)，當(dāng)料液比高于4%時(shí)，隨著濃度的增加，裙帶菜多肽的還原力趨于平穩(wěn)。這是因?yàn)榱弦罕容^低的情況下，底物濃度不足，酶解制備的具有還原能力的裙帶菜多肽的含量較低，此時(shí)，隨著料液比的不斷增加，酶解制備的裙帶菜多肽的還原能力不斷提高。當(dāng)料液比達(dá)到4%時(shí)，底物濃度充足，堿性蛋白酶不足，因此，此時(shí)增加料液比，不能提高制備的裙帶菜多肽的還原能力。因此，選擇4%的料液比作為酶解反應(yīng)單因素試驗(yàn)的最佳料液比。

2.2.3 加酶量對(duì)裙帶菜多肽抗氧化活性的影響

選擇堿性蛋白酶，在料液比4%的條件下，按照1000，3000，5000，7000，9000，11000，13000 U/g的加酶量加入堿性蛋白酶，在堿性蛋白酶理論最適pH值和溫度條件下，振蕩水浴中反應(yīng)3 h，制備裙帶菜多肽，并測(cè)定其總還原力。

圖3 加酶量對(duì)裙帶菜多肽還原能力的影響Fig.3 The influence of enzyme amount on reduction ability of Undaria pinnatifida peptides

由圖3可知，加酶量對(duì)裙帶菜多肽總還原力的影響較大，隨著加酶量的不斷增加，制備的裙帶菜多肽的總還原力呈現(xiàn)先增加后逐漸穩(wěn)定的趨勢(shì)。當(dāng)堿性蛋白酶的加酶量為1000 U/g時(shí)，制備的裙帶菜多肽的總還原力最低，吸光值為0.216。當(dāng)加酶量增加至7000 U/g時(shí)，裙帶菜多肽的還原力基本達(dá)到最高，此時(shí)的吸光值為0.362。繼續(xù)提高加酶量，對(duì)制備的裙帶菜多肽的總還原力影響不大。這是因?yàn)樵?000～7000 U/g的加酶量范圍內(nèi)，底物濃度充足，堿性蛋白酶含量不足，酶解后產(chǎn)生的抗氧化性多肽較少，隨著加酶量的不斷增加，酶解后產(chǎn)生的抗氧化活性肽逐漸增加，制備裙帶菜多肽的總還原力不斷提高。而酶用量增大到一定量時(shí)，酶分子間碰撞的機(jī)會(huì)增加，會(huì)引起酶自溶，不利于酶促反應(yīng)的進(jìn)行[9]，因此，選擇7000 U/g作為酶解反應(yīng)單因素試驗(yàn)的最佳加酶量。

2.2.4 pH對(duì)裙帶菜多肽抗氧化活性的影響

選擇堿性蛋白酶，在加酶量7000 U/g、料液比4%的條件下，按照不同pH值(8.5，9，9.5，10，10.5，11，11.5)，在堿性蛋白酶理論最適溫度下振蕩水浴反應(yīng)3 h，制備裙帶菜多肽，并測(cè)定其總還原力。

圖4 pH對(duì)裙帶菜多肽還原能力的影響Fig.4 The influence of pH on reduction ability of Undaria pinnatifida peptides

由圖4可知，隨著體系pH的逐漸增大，制備的裙帶菜多肽的總還原力呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)。這是因?yàn)閴A性蛋白酶對(duì)體系的pH變化敏感，不同pH下結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生一定的變化，酶切活性隨之不同[10]。當(dāng)pH為8.5時(shí)，堿性蛋白酶的活力較低，酶解后產(chǎn)生的裙帶菜多肽的抗氧化活性最低，吸光值僅為0.265。隨著pH的逐漸升高，堿性蛋白酶的酶活逐漸增加，另外，裙帶菜蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)在堿性條件下逐漸打開(kāi)，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變得更加松散，蛋白酶更容易于酶切位點(diǎn)結(jié)合，對(duì)酶解作用有利，使得酶解更加充分，進(jìn)而增加了制備后的多肽的總還原力，當(dāng)pH為10.0時(shí)還原力達(dá)到最大值，此時(shí)吸光值為0.381。當(dāng)pH高于10.0時(shí)，體系pH過(guò)高，堿性蛋白酶活性降低，進(jìn)而導(dǎo)致制備后的多肽的總還原力降低。因此，選擇pH 10.0為單因素試驗(yàn)的最佳pH值。

2.2.5 溫度對(duì)裙帶菜多肽抗氧化活性的影響

裙帶菜蛋白在加酶量為7000 U/g、料液比為4%、pH為10.0的條件下，分別在40，45，50，55，60，65，70 ℃振蕩水浴酶解3 h，制備裙帶菜多肽，并測(cè)定其總還原力。

由圖5可知，在一定溫度范圍內(nèi)，隨著酶解溫度的升高，裙帶菜多肽的還原能力呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，當(dāng)酶解溫度為55 ℃時(shí)，制備后的裙帶菜多肽的還原力達(dá)到最大值，此時(shí)吸光值為0.396。當(dāng)酶解溫度超過(guò)55 ℃時(shí)，裙帶菜多肽的抗氧化活性呈下降趨勢(shì)。可見(jiàn)，在酶解過(guò)程中，適當(dāng)提高溫度可增加酶的活力，促進(jìn)抗氧化肽的產(chǎn)生，但若溫度過(guò)高，酶蛋白變性，酶的穩(wěn)定性下降，酶解效率也隨之降低。因此，裙帶菜蛋白的酶解溫度以55 ℃為宜。

圖5 溫度對(duì)裙帶菜多肽還原能力的影響Fig.5 The influence of enzymolysis temperature on reduction ability of Undaria pinnatifida peptides

2.3 裙帶菜蛋白質(zhì)酶解正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以裙帶菜多肽的總還原力為指標(biāo)，在固定料液比為4%的條件下，以酶解時(shí)間、酶解溫度、加酶量及pH為因素，通過(guò)四因素三水平的正交試驗(yàn)對(duì)酶解條件進(jìn)行優(yōu)化，見(jiàn)表2。

表2 正交試驗(yàn)因素水平表Table 2 The factors and levels of orthogonal test

表3 正交結(jié)果分析Table 3 The results of orthogonal test

由表3極差R1可知，影響裙帶菜多肽總還原力的各因素主次順序?yàn)锳>D>C>B。因此，酶解溫度對(duì)裙帶菜多肽還原力的影響最大。根據(jù)各試驗(yàn)因子的平均數(shù)可知，在所選的因素水平下，水解最佳組合為A2B3C3D2。

按照正交試驗(yàn)優(yōu)化的酶解條件：酶解溫度55 ℃、酶解時(shí)間3.5 h、加酶量7500 U/g、pH 10.0條件下，分別進(jìn)行3次裙帶菜蛋白酶解試驗(yàn)，制備裙帶菜多肽，并測(cè)定其總還原力，平均吸光值為0.411。

2.4 裙帶菜多肽的超濾分級(jí)

2.4.1 裙帶菜多肽組成成分分析

表4 裙帶菜多肽成分分析Table 4 Analysis of polypeptide components of Undaria pinnatifida g/100 g

由表4可知，經(jīng)最優(yōu)條件酶解制備的裙帶菜多肽的組分為多肽含量72.5 g/100 g，多糖含量0.34 g/100 g，灰分含量26.79 g/100 g，其他0.37 g/100 g。

2.4.2 裙帶菜多肽分子量分布分析

酶解制備的裙帶菜多肽的分子量分布見(jiàn)圖6。

圖6 裙帶菜多肽的平均分子量分布Fig.6 The average molecular weight distribution of Undaria pinnatifida polypeptides

由圖6可知，裙帶菜多肽主要是由低分子量的肽段組成，其中低于1 kDa分子量肽段部分占總峰面積的77.63%。

2.4.3 不同分子量裙帶菜多肽的氨基酸組成

將裙帶菜多肽進(jìn)行超濾分級(jí)，依照截留孔徑的大小，裙帶菜多肽可分成5個(gè)組分，分子量大小如下：UPPs-L(Mw<1 kDa)、UPPs-1(Mw=1～3 kDa)、UPPs-3(Mw=3～5 kDa)、UPPs-5(Mw=5～10 kDa)、UPPs-10(Mw>10 kDa)，對(duì)超濾后的5個(gè)裙帶菜多肽組分進(jìn)行氨基酸分析，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 各組分氨基酸分析Table 5 Amino acid analysis of each component

續(xù) 表

不同分子量肽段中氨基酸種類與組成的不同，在一定程度上影響了裙帶菜多肽抗氧化活性的大小。如含硫氨基酸Cys和Met，含咪唑基的氨基酸His等，因具有親核性可作為氫受體，提高肽段的抗氧化活性。芳香族氨基酸可以參與供氫，減慢或終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，提高肽段的抗氧化活性，Glu可以作為氫供體提高肽類物質(zhì)的還原能力等[11]。因此，分析不同分子量裙帶菜多肽的氨基酸組成，對(duì)分析其抗氧化性具有重要的意義。由表5可知，不同分子量的裙帶菜多肽中的氨基酸組成不同，其中UPPs-L中疏水性氨基酸含量達(dá)到44.41 g/100 g，對(duì)多肽片段的抗氧化性有利，其His含量占3.97 g/100 g，高于其他組分，由此可以推測(cè)該片段具有較強(qiáng)的抗氧化活性。

2.5 不同分子量裙帶菜多肽的抗氧化活性測(cè)定

裙帶菜多肽作為一種混合體系的酶解產(chǎn)物，其抗氧化性可能表現(xiàn)為多重反應(yīng)機(jī)制，因此，本文從O2-·清除能力、·OH清除能力、DPPH自由基清除能力、Fe2+螯合能力4個(gè)方面來(lái)評(píng)價(jià)UPPs-L、UPPs-1、UPPs-3、UPPs-5、UPPs-10的抗氧化能力。

2.5.1 不同分子量裙帶菜多肽清除O2-·的能力

圖7 不同分子量段的裙帶菜多肽對(duì)O2-·的清除能力Fig.7 O2-·scavenging capacity of UPPS with different molecular weights

由圖7可知，不同分子量段的裙帶菜多肽對(duì)O2-·的清除能力不同。其中UPPs-1(Mw=1～3 kDa)對(duì)O2-·的清除能力最強(qiáng)，清除率達(dá)到31.7%，UPPS-L(Mw<1 kDa)對(duì)O2-·的清除能力次之，清除率達(dá)到27.5%，UPPs-10(Mw>10 kDa)對(duì)O2-·的清除能力最弱，清除率僅達(dá)到11.6%。相關(guān)研究報(bào)道，酚羥基對(duì)O2-·有較強(qiáng)的清除能力，酚羥基的個(gè)數(shù)增加會(huì)提高O2-·的清除效果[12]。而酪氨酸(Tyr)具有酚羥基結(jié)構(gòu)，能提高多肽的O2-·清除能力。UPPs-1肽段中酪氨酸含量為6.23 g/100 g，遠(yuǎn)高于其他組分，在一定程度上提高了UPPs-1的O2-·清除活性。

2.5.2 不同分子量裙帶菜多肽清除·OH的能力

Fe2+可與鄰菲羅啉(phen)生成橙紅色配合物[Fe(phen)3]2+，H2O2在Fe2+的催化下產(chǎn)生具有強(qiáng)氧化性的·OH，使得Fe2+氧化成Fe3+，繼而生成無(wú)色或藍(lán)色的配合物[Fe(phen)3]3+，原本的溶液褪色。在多肽、氨基酸的存在下，氨基酸等物質(zhì)易與·OH發(fā)生氧化修飾，捕捉·OH，從而延緩溶液的褪色變化，因此可以表征多肽體系的抗氧化性。

圖8 不同分子量段的裙帶菜多肽對(duì)·OH的清除能力Fig.8·OH scavenging capacity of UPPS with different molecular weights

由圖8可知，UPPs-L和UPPs-1具有較好的·OH清除效果，清除率分別可以達(dá)到21.85%和16.43%，而UPPs-3、UPPs-5、UPPs-10 3個(gè)分子量段的裙帶菜多肽的·OH清除能力較弱。

2.5.3 不同分子量裙帶菜多肽清除DPPH自由基的能力

DPPH自由基清除率是快速定量分析多肽作為電子受體、轉(zhuǎn)移電子能力的通用方法[13]。由圖9可知，不同分子量段的裙帶菜多肽對(duì)DPPH自由基的清除能力不同，其中低分子量段的UPPs-L、UPPs-1和高分子量段的UPPs-10的清除率較高，分別為58.35%、43.48%和40.29%。中分子量段的UPPs-3和UPPs-5的清除率較低且差別不大，僅為25.62%和22.16%。這是因?yàn)楦叻肿恿康娜箮Р硕嚯钠沃芯哂休^多電子致密的側(cè)鏈基團(tuán)，疏水性較強(qiáng)，更易于與DPPH·結(jié)合。而較低分子量片段的裙帶菜多肽自身的空間位阻較小，電子轉(zhuǎn)移能力較好，故而導(dǎo)致了2種分子量的裙帶菜多肽的DPPH自由基清除率較高，這與Bamdad等[14]報(bào)道的DPPH自由基的清除率取決于良好的疏水性與在反應(yīng)介質(zhì)中的良好擴(kuò)散性相一致。

圖9 不同分子量段的裙帶菜多肽對(duì)DPPH自由基的清除能力Fig.9 DPPH·scavenging capacity of UPPS with different molecular weights

2.5.4 不同分子量裙帶菜多肽螯合Fe2+的能力

圖10 不同分子量段的裙帶菜多肽對(duì)Fe2+的螯合能力Fig.10 Fe2+ chelating capacity of UPPS with different molecular weights

Fe2+因高效的催化活性，加速自由基的生成，從而引發(fā)氧化性的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。由圖10可知，不同分子量片段的裙帶菜多肽對(duì)Fe2+的螯合能力明顯不同，其中UPPs-L的Fe2+螯合能力最強(qiáng)，螯合率達(dá)89.87%，UPPs-3次之，F(xiàn)e2+的螯合率達(dá)82.14%，UPPs-10的Fe2+螯合能力最弱，螯合率僅為47.6%。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，肽段中蘇氨酸、谷氨酸、天冬氨酸的存在，使得肽段容易形成類聚脯氨酸的螺旋結(jié)構(gòu)，提高肽段的金屬螯合能力[15]，這一結(jié)果與UPPs-3氨基酸分析結(jié)果一致，UPPs-3中的蘇氨酸、谷氨酸、天冬氨酸組成含量達(dá)25.45%，明顯高于其他組分，因此使得UPPs-3呈現(xiàn)出較高的Fe2+螯合能力。隨著肽段的分子量不斷變小，更多的帶電活性小肽暴露出來(lái)，空間位阻減小，更易于與金屬離子發(fā)生化學(xué)螯合，從而使得UPPs-L表現(xiàn)出極高的螯合能力。

3 結(jié)論

本研究以多肽的還原能力為指標(biāo)，通過(guò)酶解的單因素和正交試驗(yàn)確定了堿性蛋白酶為裙帶菜抗氧化肽制備的最佳酶，最優(yōu)酶解條件為：料液比4%、酶解溫度55 ℃、酶解時(shí)間3.5 h、加酶量7500 U/g、pH 10.0，此時(shí)裙帶菜多肽的還原能力最強(qiáng)，在700 nm處的吸光值為0.411，并對(duì)裙帶菜多肽進(jìn)行超濾分級(jí)，從O2-·清除能力、·OH清除能力、DPPH自由基清除能力、Fe2+螯合能力4個(gè)方面，探究不同分子量段的裙帶菜多肽的抗氧化能力。結(jié)果表明：裙帶菜多肽在Fe2+螯合能力和DPPH自由基清除能力方面較強(qiáng)，在O2-·清除能力和·OH清除能力方面相對(duì)較弱。且總體呈現(xiàn)低分子量的裙帶菜多肽的抗氧化活性較強(qiáng)，高分子量的裙帶菜多肽的抗氧化活性較弱的趨勢(shì)。其中，UPPs-L(Mw<1 kDa)的Fe2+螯合能力、DPPH自由基清除能力和·OH清除能力最強(qiáng)，螯合率和清除率分別達(dá)到89.87%、58.35%和21.85%，UPPs-1(Mw=1～3 kDa)的O2-·清除能力最強(qiáng)，清除率達(dá)到31.7%，UPPs-5(Mw=5～10 kDa)和UPPs-10(Mw>10 kDa)的抗氧化能力均相對(duì)較弱。