MTSS1與SOX2在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其對(duì)術(shù)后患者預(yù)后的影響

劉慶濱，陳艷昕，肖芳，周穎，張輝

隨著我國(guó)人民生活水平不斷提高、人口老齡化加劇，生活習(xí)慣和飲食結(jié)構(gòu)的改變，導(dǎo)致臨床結(jié)直腸癌發(fā)病率逐年升高，嚴(yán)重威脅人們身體健康，雖然手術(shù)治療具有較好的臨床療效，但患者術(shù)后極易復(fù)發(fā)，仍是臨床中嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)[1-2]。術(shù)后轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是臨床中導(dǎo)致結(jié)腸癌治療失敗主要原因之一，因而如何篩選出可有效評(píng)估結(jié)腸癌患者治療預(yù)后質(zhì)量的指標(biāo)，并根據(jù)指標(biāo)變化及時(shí)予以治療，可有效提高治療質(zhì)量，并改善患者生存質(zhì)量和生存率[3]。有學(xué)者采用mRNA差異性顯示技術(shù)對(duì)膀胱癌細(xì)胞系中不同轉(zhuǎn)移能力基因進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白1(metastasis suppressor 1，MTSS1)，且其在諸多惡性腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)中起到十分重要作用，日益成為當(dāng)前腫瘤轉(zhuǎn)移研究新熱點(diǎn)和新機(jī)制[4-5]。SRY性別決定區(qū)Y Box2蛋白(sex determining region Y-box 2，SOX2)具有較高敏感性，常被用于鑒定干細(xì)胞亞群，近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌、胃癌等多種腫瘤中可見(jiàn)明顯的SOX2表達(dá)異常[6]。因而筆者對(duì)醫(yī)院收治的結(jié)腸癌患者進(jìn)行分析，探討MTSS1與SOX2在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其對(duì)術(shù)后患者預(yù)后的影響，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年1月—2016年7月秦皇島市第一醫(yī)院普外科收治的行結(jié)腸癌根治術(shù)治療患者60例作為研究對(duì)象，均經(jīng)術(shù)后病理學(xué)確診。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)手術(shù)前未接受化療及其他藥物治療；(2)結(jié)腸癌TNM分期均為Ⅲ期；(3)術(shù)前未出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及多原發(fā)腫瘤；(4)病理及病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)術(shù)前輔助放化療；(2)TNM分期為Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ期；(3)非腫瘤因素死亡；(4)結(jié)腸癌復(fù)發(fā)；(4)主動(dòng)申請(qǐng)退出本研究。60例結(jié)腸癌根治術(shù)患者中男39例，女21例，年齡48～68(59.93±5.23)歲；參照WHO結(jié)直腸癌病理分型標(biāo)準(zhǔn)[7]，組織學(xué)分型均為腺癌；分化程度：高分化腺癌15例，中分化腺癌17例，低分化腺癌28例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組化檢測(cè)與判斷 本研究中所用免疫組織化學(xué)二抗、DAB顯色試劑盒均購(gòu)買自中杉金橋(北京)生物技術(shù)有限公司。MTSS1及SOX2抗體均購(gòu)買自南京福麥斯生物科技有限公司。60例腫瘤病灶標(biāo)本及癌旁標(biāo)本應(yīng)用SP法檢測(cè)MTSS1和SOX2表達(dá)，均參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。若細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕褐色顆粒則判定MTSS1或SOX2陽(yáng)性。在10倍顯微鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野，然后在40倍高倍鏡下檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞百分比，取其均值，并依照陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分，其中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10%則判定為0分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為10%～25%則判定為1分，26%～74%為2分，≥75%則判定為3分。對(duì)染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)估，無(wú)色記為0分，淡黃色記為1分，棕黃色記為2分，棕褐色記為3分。將兩者積分相乘，0分記為陰性(-)、1～5分記為陽(yáng)性(+)、6～9分記為強(qiáng)陽(yáng)性(++)。

1.3 隨訪 隨訪患者2年，每3個(gè)月隨訪1次，采取醫(yī)院復(fù)查、電話隨訪相結(jié)合的多種方式隨訪，計(jì)算患者生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 19.0軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料用例或%表示，采用卡方檢驗(yàn)；采用多因素Logistic回歸分析病理因素與MTSS1和SOX2表達(dá)；繪制Kaplan-Meier生存曲線分析患者生存率。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 MTSS1及SOX2表達(dá)比較 結(jié)腸癌組織中MTSS1表達(dá)陽(yáng)性率為86.67%(52/60)，低于癌旁組織的98.33%(59/60)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.799，P=0.002)；結(jié)腸癌組織中SOX2表達(dá)陽(yáng)性率為70.00%(42/60)，低于癌旁組織的95.00%(57/60)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.645，P=0.000)。

2.2 MTSS1及SOX2表達(dá)與臨床病理關(guān)系 不同性別、年齡患者M(jìn)TSS1及SOX2陽(yáng)性表達(dá)量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；不同腫瘤分化程度、血管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者腫瘤組織中MTSS1及SOX2表達(dá)量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表1。

2.3 臨床病理因素與MTSS1和SOX2表達(dá)相關(guān)性 性別、年齡與MTSS1及SOX2陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)，腫瘤分化程度、血管侵犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與MTSS1及SOX2陽(yáng)性表達(dá)顯著相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.4 患者生存率調(diào)查結(jié)果 MTSS1陽(yáng)性表達(dá)患者2年生存率為42.86%，高于陰性表達(dá)患者的12.50%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=23.022，P=0.000);SOX2陽(yáng)性表達(dá)患者2年生存率為44.74%，高于陰性表達(dá)患者的27.27%，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.623，P=0.010)，見(jiàn)圖1、圖2。

3 討 論

結(jié)腸癌是現(xiàn)階段臨床中較為常見(jiàn)的腫瘤，其臨床發(fā)病率及病死率均呈新發(fā)展趨勢(shì)，其與患者飲食結(jié)構(gòu)、環(huán)境氣候因素密切相關(guān)。有學(xué)者研究結(jié)果顯示，若能在臨床中實(shí)現(xiàn)早期診斷并篩查出結(jié)腸癌，可有效改善手術(shù)治療療效，延長(zhǎng)患者生存時(shí)間，但目前臨床中仍缺乏特異性評(píng)估早期結(jié)直腸癌的臨床指標(biāo)，當(dāng)患者表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀時(shí)多已處于中晚期，預(yù)后質(zhì)量較差[8]。因而臨床中如何有效篩查并評(píng)估患者預(yù)后質(zhì)量已成為目前研究熱點(diǎn)。腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲是多步驟、多基因參與、連續(xù)、復(fù)雜過(guò)程，減少腫瘤增殖細(xì)胞間黏附分子，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力，減弱黏附力，是腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移發(fā)生基礎(chǔ)，其在腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲過(guò)程中起到十分重要的作用[9]。為避免不同腫瘤患者的病情差異對(duì)本研究的影響，因而選擇了TNM分期Ⅲ期患者作為研究對(duì)象。

表1 MTSS1及SOX2表達(dá)與臨床病理關(guān)系

表2 患者臨床病理因素與MTSS1和SOX2表達(dá)相關(guān)性

圖1 MTSS1陽(yáng)性及陰性患者生存曲線

MTSS1是近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)的新型轉(zhuǎn)移抑制基因，在人體內(nèi)許多正常組織中均可見(jiàn)明顯表達(dá)，但在轉(zhuǎn)移的膀胱癌或乳腺癌細(xì)胞系中均無(wú)表達(dá)，因而有學(xué)者認(rèn)為MTSS1屬一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制型基因[10]。但有學(xué)者指出，在前列腺癌細(xì)胞系中若增加MTSS1表達(dá)則可能增加腫瘤轉(zhuǎn)移潛力[11]。早期肝癌病變與MTSS1高水平表達(dá)密切相關(guān)，其可能是重要的誘導(dǎo)肝癌早期病變的強(qiáng)誘導(dǎo)劑。有學(xué)者采用免疫組化技術(shù)對(duì)結(jié)直腸癌患者病變組織進(jìn)行檢查，結(jié)果顯示MTSS1缺失是十分常見(jiàn)的腫瘤晚期事件[12]。結(jié)腸癌中MTSS1可有效抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。但也有研究結(jié)果顯示，胃癌組織中MTSS1陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常組織，因而在胃癌組織中MTSS1可能在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到十分重要的促進(jìn)作用。在不同惡性腫瘤病灶中MTSS1表達(dá)不同，存在組織特異性。

圖2 SOX2陽(yáng)性及陰性患者生存曲線

SOX2是重要的維持胚胎干細(xì)胞特征和早期胚胎發(fā)育的必需轉(zhuǎn)錄因子，在消化道器官發(fā)育及腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到十分重要的作用。有研究結(jié)果表明，在食管鱗癌組織中SOX2表達(dá)情況與患者預(yù)后質(zhì)量密切相關(guān)[13]。SOX2在胰腺侵襲性導(dǎo)管癌、胰腺上皮內(nèi)瘤病變均可見(jiàn)明顯高表達(dá)。有研究結(jié)果顯示，在胃癌組織中SOX2表達(dá)量下調(diào)，抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯[14]。SOX2在黏液腺癌、結(jié)腸息肉、印戒細(xì)胞癌中均可見(jiàn)明顯高表達(dá)狀態(tài)，可通過(guò)上調(diào)MUC4AC表達(dá)而起到作用。直腸癌手術(shù)后采用放化療治療，SOX2、CD133陽(yáng)性表達(dá)可作為評(píng)估患者遠(yuǎn)處復(fù)發(fā)與預(yù)后不良預(yù)警指標(biāo)。此外，有研究指出，在呼吸道、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)等腫瘤中均可見(jiàn)SOX2表達(dá)[15]。

本組結(jié)腸癌患者病灶組織中MTSS1及SOX2陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于正常癌旁組織；且對(duì)患者腫瘤分化程度分析顯示，低分化組患者病灶組織中MTSS1及SOX2陽(yáng)性表達(dá)率均明顯低于高分化組。回歸分析結(jié)果顯示，MTSS1及SOX2陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤分化程度、血管侵犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。隨訪結(jié)果顯示，MTSS1及SOX2陽(yáng)性表達(dá)組患者生存率均高于陰性組。筆者認(rèn)為，在結(jié)腸癌中MTSS1及SOX2具有一定的抑制腫瘤作用，可作為評(píng)估患者預(yù)后質(zhì)量的標(biāo)志物，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，MTSS1及SOX2在結(jié)腸癌中陽(yáng)性表達(dá)與患者預(yù)后質(zhì)量密切相關(guān)，可用于評(píng)估患者預(yù)后質(zhì)量。但本組研究中并未對(duì)MTSS1及SOX2的具體作用機(jī)制進(jìn)行深入分析，有待后續(xù)深入研究。

利益沖突：無(wú)

作者貢獻(xiàn)聲明

劉慶濱，陳艷昕：設(shè)計(jì)研究方案，實(shí)施研究過(guò)程，論文撰寫;肖芳：提出研究思路，分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，論文審核;周穎、張輝：實(shí)施研究過(guò)程，資料搜集整理，論文修改;黃江梅：進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理