康普瑞汀A4納米制劑的處方前研究

史國慧 曹青日（通訊作者）

（蘇州大學(xué)藥學(xué)院 江蘇 蘇州 215123）

康普瑞汀A4（CA4）是一種順式二苯乙烯類天然化合物，它能夠抑制腫瘤血管的生成，是一種新型的抗腫瘤藥物。然而CA4水溶性極差，導(dǎo)致其在體內(nèi)療效較低，限制了臨床應(yīng)用。為此，研究者們對CA4進(jìn)行了各種修飾及前藥研究，其中康普瑞汀磷酸二鈉（CA4P）是極具代表性的一種，國外該藥已進(jìn)入Ⅲ期臨床研究階段[1]。但是，由于納米材料的代謝產(chǎn)物存在一定的細(xì)胞毒性，導(dǎo)致無法確認(rèn)其安全性。而聚乳酸～羥基乙酸共聚物（PlGA）恰好可以彌補這一缺點，它水解生成的乳酸和羥基乙酸這兩種內(nèi)源性代謝產(chǎn)物，很容易被人體代謝，所以它幾乎沒有系統(tǒng)毒性。并且它具有可調(diào)的降解速率，被廣泛應(yīng)用于藥物緩控釋體系中[2]。因此，筆者考慮以PlCA為載體材料，制備CA4緩釋納米制劑。

本研究以CA4為模型藥物，在藥物的分析方法建立、溶解度、輔料相容性等方面進(jìn)行了處方前研究，為后續(xù)CA4納米制劑的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。通過這些試驗來估算是否需要更穩(wěn)定劑型，一旦在此過程中發(fā)現(xiàn)主藥在溶解度和相容性上存在問題，則可考慮改進(jìn)其劑型設(shè)計，保證后期處方研究順利進(jìn)行。

1.儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫1260高效液相色譜儀、FA2004電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)，SHA-B恒溫振蕩器(常州市國旺儀器制造有限公司)、DHG-9140A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)、H-1650臺式高速離心機(湘儀離心機儀器有限公司)、YG120藥物光照試驗箱（上海恒誼制藥設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥

康普瑞汀A4(≥98%，南京春秋生物工程有限公司)；PlGA(75∶25，12000Da，濟南岱罡生物工程有限公司)；大豆卵磷脂S100（94%，LiPoid）；甲醇（色譜純，Sigma～Aldrich)；水為超純水(產(chǎn)自實驗室純水儀)；其它試劑為分析純[3]。

2.實驗方法與結(jié)果

2.1 分析方法建立

2.1.1 色譜條件色 譜柱：COSMOSIL5C18-MS-Ⅱ(4.6mm×250mm，5μm)，流動相：甲醇-水(65：35)，檢測波長：295nm，流速：1.0mL·min～1，柱溫：40oC，進(jìn)樣量：20μL。該方法下，CA4色譜圖見圖1，雜質(zhì)峰與主峰分離度良好（＞1.5），不會干擾測定。

圖1 CA4的HPlC色譜圖

2.1.2 線性關(guān)系

見圖2。結(jié)果表明，CA4溶液在0.5～250μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

圖2 CA4溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.3 精密度

結(jié)果表明，該方法的精密度良好（RSD＜2%）。見表1、2。

表1 日內(nèi)精密度

表2 日間精密度

2.1.4 穩(wěn)定性

結(jié)果表明，CA4溶液室溫下24小時內(nèi)是穩(wěn)定的（RSD＜2%）。見表3。

表3 溶液穩(wěn)定性

2.1.5 定量限和檢測限

取“2.1.2”項下的CA4母液，用甲醇逐步稀釋至主峰的響應(yīng)值約為噪音水平的10倍，見圖3，得CA4定量限為0.1056μg·mL-1；響應(yīng)值約為噪音水平的3倍，見圖4，得CA4的檢測限為0.0264μg·mL-1。

圖3 CA4定量限

圖4 CA4檢測限

2.2 溶解度

2.2.1 CA4在不同Ph緩沖液中的溶解度

CA4幾乎不溶于各種Ph值的緩沖溶液，且溶解度不隨Ph值而改變。見表4。

表4 CA4在不同Ph值緩沖液中的溶解度

2.2.2 CA4在不同有機溶劑中的溶解度

CA4可溶于甲醇、乙醇，易溶于丙酮、三氯甲烷及二甲基亞砜。見表5。

表5 CA4在不同有機溶劑中的溶解度

2.3 輔料相容性

本研究選擇PlGA、大豆卵磷脂S100作為輔料，因此，分別考察CA4與大豆卵磷脂S100、PlGA在高高溫（40℃）、高濕（RH92.5%）、強光（4500lx）條件下的相容性。見表6。

表6 藥物與輔料相互作用考察表

3.討論

作為一種新型的血管生成抑制劑，CA4具有腫瘤增殖抑制和血管破環(huán)雙重作用，有很高的抗癌活性[4]。PlGA是一種理想的控緩釋材料，利用PlGA包封原料藥制成納米制劑，可提高藥物療效并減少毒副作用[5]。

本研究利用HPlC建立CA4的分析方法，結(jié)果表明，該方法專屬性強、精密度高、穩(wěn)定性良好，可用于CA4納米制劑中藥物含量的測定[6～7]。在此分析方法的基礎(chǔ)上，測定了CA4在不同介質(zhì)中的溶解度，結(jié)果顯示，藥物在各Ph緩沖液中幾乎不溶，且不受Ph的影響。另外，藥物可溶于甲醇、乙醇、丙酮等有機溶劑，這為后續(xù)處方工藝中溶劑的選擇提供了依據(jù)。原輔料相容性試驗結(jié)果表明，CA4與PlGA的相容性良好（RSD＜2%），但大豆卵磷脂S100在強光條件下會使CA4含量有輕微減少（2%＜RSD＜10%），但無明顯影響，所選輔料與主藥的配伍穩(wěn)定性較好，均可用于后續(xù)處方工藝研究。本實驗為CA4納米制劑的制備提供了處方依據(jù)。