醫院制劑復方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量測定

劉敏 劉俊麗 田佳懿

[摘要] 目的 建立紫外-可見分光光度法測定醫院制劑復方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量，以更好地控制該藥物質量，保證用藥安全。 方法 采用紫外-可見分光光度法，于568 nm波長處測定硫酸卡那霉素的含量。結果 硫酸卡那霉素質量濃度在0.1～0.5 mg/mL范圍內與紫外吸收度的線性關系良好（r = 0.9999），平均加樣回收率為100.35%，RSD為0.66%（n = 9）。 結論 該方法簡便、準確、重現性好，可用于醫院制劑復方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量測定。

[關鍵詞] 紫外-可見分光光度法；醫院制劑；硫酸卡那霉素；含量測定

[中圖分類號] R927.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2019）04（c）-0109-04

Determination of kanamycin sulfate in hospital preparation Compound Diphenhydramine Nasal Drops

LIU Min LIU Junli TIAN Jiayi ZENG Weixin

Department of Pharmacy， Beijing Shijitan Hospital， Capital Medical University， Beijing 100038， China

[Abstract] Objective To establish a method for the determination of kanamycin sulfate in Compound Diphenhydramine Nasal Drops by ultraviolet-visible spectrophotometry so as to better control the quality of the drug and ensure its safety of medication. Methods The content of kanamycin sulfate was determined by ultraviolet-visible spectrophotometry at 568 nm. Results The linear relationship between the concentration of kanamycin sulfate and UV absorbance in the range of 0.1-0.5 mg/mL was good （r = 0.9999）， the average recovery was 100.35%， and the RSD was 0.66% （n = 9）. Conclusion The method is simple， accurate and reproducible. It can be used for the determination of kanamycin sulfate in hospital preparation Compound Diphenhydramine Nasal Drops.

[Key words] Ultraviolet-visible spectrophotometry； Hospital preparation； Kanamycin sulfate； Content determination

復方苯海拉明滴鼻液是液是北京中醫藥大學附屬護國寺中醫醫院的傳統制劑，主要有效成分為鹽酸苯海拉明、鹽酸麻黃堿以及硫酸卡鈉霉素，輔料為羥苯乙酯和氯化鈉，主要用于治療過敏性鼻炎、鼻竇炎及肥大性鼻炎，具有很好的療效。然而，其質量標準中只有鹽酸苯海拉明和鹽酸麻黃堿的含量測定[1]，未對硫酸卡那霉素的含量進行控制，不能全面地評價該制劑的質量。為保證用藥安全，依據《北京市醫療機構化學制劑質量研究技術指導原則》[2]，本研究建立了復方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量測定方法。2015年版《中華人民共和國藥典》（二部）[3]中采用高效液相蒸發光檢測法測定硫酸卡那霉素的含量，但該方法所需要使用的儀器設備昂貴，且對操作要求較高，不利于醫院制劑的快速分析。本研究參考2014年版《北京市醫療機構制劑規程》（第一冊）[4]，建立了硫酸卡那霉素紫外-可見分光光度的含量測定方法，該方法操作簡便、重現性良好、結果可靠，可用于復方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量測定。

1 儀器與試劑

UV2401紫外-可見分光光度儀（日本島津公司）、BT125D十萬分之一電子分析天平（賽多利斯公司）、S220型酸度計（瑞士梅特勒公司）、電熱恒溫水浴鍋（上海赫田科學儀器有限公司）。

復方苯海拉明滴鼻液（首都醫科大學附屬北京世紀壇醫院制劑室制備；批號分別為：20171101、20171102、20171103）、復方苯海拉明滴鼻液陰性樣品（首都醫科大學附屬北京世紀壇醫院制劑室制備）、硫酸卡那霉素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：96066，純度為99.96%）。

乙醇、茚三酮、乙酸、乙酸鈉等試劑均為分析純，實驗用水為純化水。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

2.1.1 茚三酮溶液 精密稱取水合茚三酮1.0000 g，用無水乙醇溶解后，置100 mL容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，即得10.0 g/L的茚三酮溶液；避光低溫保存，現配現用。

2.1.2 乙酸-乙酸鈉緩沖溶液（pH 5.4） 稱取50.0 g乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）于燒杯中，加入150 mL純化水，用移液管移取2.50 mL冰醋酸，加熱溶解，冷卻后轉移到250 mL容量瓶中，加水定容至刻度，即得。

2.1.3 羥苯乙酯貯備液 精密稱定羥苯乙酯對照品3.00 mg，置于10 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.4 供試品貯備液 精密稱定硫酸卡那霉素對照品適量，分別置100 mL容量瓶中，再精密稱定氯鹽酸苯海拉明1.25 mg，鹽酸麻黃堿10.00 mg，氯化鈉7.00 mg，精密吸取羥苯乙酯貯備液1.00 mL，置于該容量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.5 供試品溶液 精密吸取復方苯海拉明滴鼻液5.00 mL，置于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻，即得。

2.1.6 硫酸卡那霉素對照品溶液 精密稱定硫酸卡那霉素對照品適量，加水溶解并定容稀釋制成每1 mL含硫酸卡那霉素0.25 mg的溶液，即得。

2.1.7 陰性對照溶液 按處方比例制備不含硫酸卡那霉素的陰性樣品，并從中精密量取5.00 mL，置于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻，即得。

2.2 檢測方法

精密吸取供試品溶液1.00 mL置于25 mL比色管中，分別加入1.00 mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液（pH 5.4）和1.00 mL茚三酮溶液（10.0 g/L），混勻后于沸水浴中加熱20 min，冷卻至室溫后，用水定容至刻度線，混勻，靜置15 min，于568 nm波長處測定其吸光度。

2.3 檢測波長的選擇

取上述制備好的供試品溶液及陰性對照溶液，分別在550～650 nm進行掃描，硫酸卡那霉素對照品溶液在568 nm波長處有較大吸收；陰性對照溶液在550～650 nm無明顯的紫外吸收。該制劑中所含其他藥物及輔料在568 nm波長處對硫酸卡那霉素的紫外吸收無干擾。故選擇568 nm處為硫酸卡那霉素的檢測波長。見圖1。

2.4 標準曲線繪制

取硫酸卡那霉素對照品適量，按照“2.1.6”項下方法制備成1 mg/mL的硫酸卡納霉素對照品儲備液，分別精密吸取上述溶液1、2、3、4、5 mL，置于10 mL容量瓶中，按“2.1.6”項下方法制備一系列濃度梯度的對照品溶液，并按照“2.2”項下檢測方法測定其吸光度。以硫酸卡那霉素的濃度為橫坐標（X），吸光度為縱坐標（Y），繪制標準曲線，得到硫酸卡那霉素回歸方程：Y=2.091X-0.048（r = 0.9999）。硫酸卡那霉素在0.1～0.5 mg/mL與吸光度線性關系良好。

2.5 精密度試驗

取“2.1.6”項下硫酸卡那霉素對照品溶液，按照“2.2”項下檢測方法測定其吸光度，連續測定6次。其吸光度的RSD值為0.57%（n = 6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取復方苯海拉明滴鼻液（批號：20171101）適量，按“2.1.5”項下方法制備一系列濃度梯度的供試品溶液，于陰涼處密閉放置，分別于30、60、90、120、150、180 min按照“2.2”項下檢測方法測定其吸光度。其吸光度的RSD為1.32%，提示供試品溶液在陰涼處密閉放置3 h內基本穩定。

2.7 重復性試驗

取同一復方苯海拉明滴鼻液（批號：20171102）6份，按“2.1.5”項下方法制備供試品溶液，按照“2.2”項下檢測方法測定其吸光度，連續測定6次。其吸光度的RSD值為0.76%，提示該方法的重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取含量的已知復方苯海拉明滴鼻液（批號：20171 102）適量，參考2015年版《中華人民共和國藥典》（四部，通則9101）[3]，并加入取樣量中硫酸卡那霉素含量的80%、100%、120%的硫酸卡那霉素對照品，每個濃度各3份，按照“2.1.5”項下供試品溶液制備方法制備，按照“2.2”項下檢測方法測定其吸光度，計算硫酸卡那霉素的含量及其回收率。硫酸卡那霉素的平均加樣回收率為100.35%，RSD值為0.66%，提示該方法準確性良好。見表1。

2.9 含量測定

取3批復方苯海拉明滴鼻液（批號：20171101、20171102、20171103），分別按“2.1.5”項下方法制備供試品溶液，按照“2.2”項下檢測方法測定其吸光度，計算硫酸卡那霉素的含量。3批樣品中硫酸卡那霉素的含量分別為5.1204、5.0876、5.1765 mg/mL，分別為標示量的102.05%、101.75%、103.53%。

3 討論

原復方苯海拉明滴鼻液的質量標準中只有鹽酸苯海拉明和鹽酸麻黃堿的含量測定，未對硫酸卡那霉素的含量進行控制。硫酸卡那霉素是臨床上常用的一種氨基糖苷類的光譜抗生素[5]，具有很好的水溶性，其性質穩定，價格低廉，對大多數革蘭陰性菌，如大腸埃希菌、沙門菌、變形桿菌、多殺性巴氏桿菌等，有較強的抗菌作用[6-7]。硫酸卡那霉素也具有一定的毒性，不但有可能使機體產生過敏反應，而且濃度過高時，也對神經系統、腎臟系統產生毒性[8-9]。因此，對制劑中的硫酸卡那霉素的含量進行控制，具有十分重要的意義，有助于保證藥品質量，確保用藥安全。

相關文獻中記載的硫酸卡那霉素的含量測定方法有微生物法[10]、酶聯免疫法[11]、高效液相蒸發光檢測法[12-13]、旋光法[14]、熒光法[15]、紫外-可見分光光度法[16]、電化學法[17]等。考慮到醫院藥檢室設備條件有限[18]，本研究建立了紫外-可見分光光度法測定復方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量。紫外-可見分光光度法操作簡單、分析成本低、準確度高、快速且易于推廣[19]，適用于醫院制劑的快速檢測。

本研究建立的硫酸卡那霉素的含量測定方法，雖然參考了2014年版《北京市醫療機構制劑規程》（第一冊）[4]中的硫酸卡那霉素的含量測定方法，但由于處方中的其它藥物及輔料成分有了很大的變化，因此本研究重點考察了組方中鹽酸苯海拉明、鹽酸麻黃堿及其它輔料成分對硫酸卡那霉素含量測定的影響。本研究陰性對照品溶液在568 nm處無紫外吸收，故排除了該制劑中其它成分的干擾。

此外，2014年版《北京市醫療機構制劑規程》（第一冊）[4]中的硫酸卡那霉素的含量測定方法的前處理采用鹽酸苯肼溶液，其與硫酸卡那霉素反應生成絡合物，在可見光區出現明顯的褪色峰，利用褪色峰的吸光度與硫酸卡那霉素濃度的相關性，測定硫酸卡那霉素的含量[20]。茚三酮是一種用于檢測或者一級胺以及二級胺的試劑[21]。硫酸卡那霉素中含有較多的氨基，茚三酮與氨基酸機構中的氨基作用可發生顯色反應，其方法更為簡便、反應靈敏、顯色速度快，所需試劑較為廉價，故本研究選用茚三酮作為顯色劑。

綜上，本研究建立了紫外-可見分光光度法以測定醫院制劑復方苯海拉明滴鼻液中的硫酸卡那霉素含量。該方法方法操作簡便、分析速度快、結果準確、重現性好，可為復方苯海拉明滴鼻液的質量評價提供依據。

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（收稿日期：2018-08-15 本文編輯：王 蕾）