不同前處理對酶抑制法檢測蔬菜有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留的影響

陳軍麗

（鄭州華洲食品檢測科技有限公司 河南 鄭州 450000）

隨著人們生活水平的不斷提高，蔬菜水果中的農藥殘留問題引起了人們更多更普遍的關注。有機磷及氨基甲酸酯類殺蟲劑使用廣泛，占到殺蟲劑用量的70%以上[1～2］。目前，我國針對有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留所采用的檢測方法主要有酶抑制法和色譜法。色譜法具有定性、定量、準確和靈敏度高等特點[3］，大多為實驗室所采用。不太適合生產基地和流通領域要求的快速檢測。采用酶抑制方法，儀器和試劑投入成本低、檢測方法簡便易學、檢測速度快、檢測不受試驗場所限制，是水果生產基地和超市、水果店等流通領域快速自行檢測的實用方法[4］。但是使用本方法檢測部分蔬菜水果時，對酶有影響的次生物質容易產生假陽性結果，給檢測帶來了不便，也給食品監管增加了難度。本研究以GB/T 5009.199-2003[5］為基礎，針對容易產生假陽性的幾種蔬菜，采用酶抑制法測定不同前處理方法對蔬菜提取液中農殘含量的影響，滿足市場監督快篩需求，為蔬菜和水果中農藥殘留檢測技術提供參考。

1 材料和方法

1.1 試劑與儀器。市售試劑盒(鄭州華洲食品檢測科技有限公司)。農藥殘留快速檢測儀(廈門綠安分析儀器有限公司，型號：GNSPRD-8)；電熱恒溫水浴鍋(北京中興偉業儀器有限公司，型號：DZKW-4)；分析天平(奧豪斯儀器(常州)有限公司，型號：CP114)。

1.2 方法

1.2.1 試驗原理。在一定條件下，有機磷和氨基甲酸酯類農藥對膽堿酯酶的正常功能有一定抑制作用，其抑制率與農藥濃度呈正相關。正常情況下，酶催化神經傳導代謝產物(乙酰膽堿)水解，其水解產物與顯色劑反應產生黃色物質，用農藥殘留檢測儀在412 nm處測定吸光度隨時間的變化值，計算出抑制率。通過抑制率可判斷樣品中是否含有高劑量的有機磷和氨基甲酸酯類農藥[5］。

1.2.2 檢測步驟。①對照試驗：燒杯中加入2.5 ml緩沖液(即空白樣品)，再加入0.1ml酶液(切勿滴在壁上)和0.1ml顯色劑，搖勻后于37℃水浴鍋內放置10min，最后加入0.1 ml底物液，搖勻，立即將反應液倒入比色皿中，置于農藥殘留檢測儀通道中檢測412 nm波長處反應3 min前后的吸光度變化值ΔA0；②樣品試驗：另取燒杯分別添加2.5 ml蔬菜樣品提取液，再加入0.1 ml酶液和0.1 ml顯色劑，搖勻后于37℃水浴鍋內放置10 min，最后加入0.1 ml底物液，搖勻，立即將反應液倒入比色皿中，置于農藥殘留檢測儀通道中檢測412 nm波長處反應3 min前后的吸光度變化值ΔAt。按以下公式計算酶的抑制率。

表1 不同前處理對抑制率的影響

抑制率(%)=[(ΔA0-ΔAt)/ΔA0］×100；式中ΔA0—空白對照吸光度的變化值；ΔAt—樣品吸光度的變化值。

2 結果與分析

從表1中可以看出，蒜黃、大蒜、姜、小蔥4種蔬菜只要被剪切就會使抑制率增高，產生疑似陽性；朝天椒、香菇2種蔬菜被剪切的更短，也會使抑制率增高，產生疑似陽性。

3 結論與討論

3.1 結論分析。樣品剪短后比整體浸提疑似陽性的概率大；樣品剪得越短，結果疑似陽性的概率越大。若蔬菜樣品的酶抑制率達到50%以上，則表示蔬菜中可能含有高劑量的有機磷農藥和氨基甲酸酯類農藥，該樣品則判斷為疑似陽性。結果為疑似陽性的樣品，均要進行2次以上測定或通過氣相色譜等儀器檢測進一步確認具體農藥品種和含量。

3.2 檢測誤差分析。在實驗過程中，實驗環境溫度的變化對酶的活性具有一定的影響；實驗過程中用到的比色皿，清洗的是否干凈對農藥殘留檢測儀的折光率也會造成一定的影響；使用移液槍過程中，人員操作速度、溶液反應時間長短等都是影響檢測結果的因素；實驗中添加過多的緩沖液會稀釋農藥殘留量，添加過多的酶液會提高分解底物的速度，添加過多的顯色劑會增加顯色的程度，添加過多的底物液會提高酶的利用效率，以上這些因素都會影響實驗結果。