食用菌提取多糖對酒精性肝損傷改善測試*

董瑞瑞，程傳喜，蔣文娟

（1.鄭州工業應用技術學院，河南 新鄭 451150；2.黃河科技學院，河南 鄭州 450000）

肝臟可以擔負解毒和分泌等功能。近些年酒精性的肝病死亡率逐漸上升，已經引起了醫療行業的高度重視和深度研究［1-2］。酒精性肝損傷主要指的是在短時間內飲入超出負荷的酒，導致肝臟解毒能力不堪重負引起的肝器官受損。

當前酒精性肝損傷的發病機制相關研究已經取得了很大進展，不過其治療方案突破不是很大，還無法高效治療此類病癥［3-4］。目前臨床上比較常用的酒精性肝損傷治療方案一般為營養支持、水飛薊素等。上述方法雖然在一定程度上能夠消除酒精帶來的氧化應激，但此類治療方案存在著療效不確定性強和副作用大等不足［5-6］。

針對上述情況，提出利用食用菌提取多糖對酒精性肝損傷進行改善與治療。

1 食用菌多糖提取

1.1 儀器和試劑

多糖提取儀器：旋轉式的蒸發儀器；電子天平和紅外光譜儀。

多糖提取試劑：蒽酮、純度為95%的乙醇、濃硫酸、葡萄糖和石油醚、乙醚及三氯乙酸。在實驗過程中所用水為蒸餾水。

實驗用到的食用菌為姬菇Hypsizigus marmoueus（Peck）Bigelw。

標準的葡萄糖溶液調制過程為：精準稱取105℃使其干燥一直到恒重，分析純葡萄糖的對照品110 mg，加入少量水將其溶解，放置到110 mL容量瓶中，以此調制成1 mg·mL-1標準葡萄糖試劑。選取25 mL的1 mg·mL-1標準溶劑，將水放到溶液中定容到500 mL，溶液濃度是50 g·mL-1。

1.2 多糖提取

稱風干粉碎食用菌樣品并精準到0.000 2 g，經過回流去除脂肪，干燥。

選取脫脂樣品干粉形式與蒸餾水以1∶25配比添加二次蒸餾水，將溫度設置成90℃，時間設置為3 h，次數設置為3次。利用旋轉蒸發儀將合并得到的溶液進行濃縮，濃縮至大約25 mL即可。將其5倍體積大概125 mL 95%乙醇進行沉淀，并密封放24 h。利用砂芯漏斗對沉淀品進行過濾，然后抽干，用10 mL的水復溶，添加3%的三氯乙酸，一直到不再生成白色沉淀，將蛋白質去除，對溶液進行濃縮，添加125 mL乙醇醇析。將所得樣品靜置過夜，過濾，利用10 mL的乙醇清洗2次，利用10 mL的乙醚清洗1次，得到食用菌多糖樣本。

2 食用菌多糖對酒精性肝損傷改善測試

2.1 實驗材料

將上述中得到的食用菌多糖樣本和雄性實驗小白鼠當作主要實驗材料，實驗鼠為6周齡，體重大約20 g，上下波動2 g。

實驗用的主要試劑為：甲硫氨酸、二甲苯、肝素、四乙氧基丙烷、ALT、AST和TG等。

實驗主要使用到的器材有：分光光度計、冷凍離心機、酶標儀和超聲破碎儀。

2.2 方法

2.2.1 構建酒精性肝損傷模型

將實驗鼠喂養3 d，并隨機分成對照組和模型組以及多糖組，每組實驗鼠為14只。利用蒸餾水和實驗樣品配制，每天對測試樣品灌胃一次，持續30 d。在實驗期間給實驗鼠提供顆粒飼料，在飲食與飲水方面均不予控制。當實驗到31 d時，每組實驗鼠禁飲水和吃食12 h之后，模型組用50%的乙醇對實驗鼠進行灌胃，構建實驗鼠酒精性肝損傷模型，對照組用同體積蒸餾水對實驗鼠進行灌胃。將死亡實驗鼠去除，各個組選出10只鼠在模型構建12 h之后取眼球并進行采血，將血清分離，并分別測定ALT、AST、TG之后，迅速處死實驗鼠。取實驗鼠肝臟并設計為石蠟以及超薄的切片做病理檢查與細胞超微構造觀察，剩余肝臟在-80℃下保存留作備用，以實現抗氧化損傷情況的測定［7-8］。

2.2.2 制備肝勻漿

選取實驗鼠肝進行稱重，并利用生理鹽水將表面的污垢清除干凈，剪碎之后加入已預冷的50 mmol·L-1磷酸緩沖液中［9-10］。將處理中的樣本放到冰水中超聲破碎并制成10%的肝勻漿，用于MDA等指標的測定。

2.2.3 實驗狀況觀測

在實驗進行中觀察實驗鼠毛發光澤程度和精神狀態以及死亡等狀況并記錄。在實驗之前稱重，實驗后每周稱實驗鼠體重一次并記錄，一直到處死實驗鼠。

2.2.4 測定指標與實驗數據處理

分別對ALT、AST、TG、MDA等進行測定，并通過SPSS17.0對所得數據進行處理及分析。其中，單因素方差利用檢驗組之間進行兩兩差異性對比得到。

3 實驗結果與分析

3.1 食用菌多糖對實驗鼠體重產生的影響

對各個實驗組的實驗鼠進行處理，持續4周，在4周中按照常規飼養方式喂養。實驗結果如表1所示。和對照組相比，多糖組實驗鼠的生長以及精神狀態與體重方面未存在異常，也沒有出現中毒與死亡的情況。一直到第30天多糖組實驗鼠平均體重和空白組相比并無明顯差異。

表1 食用菌多糖對實驗鼠體重產生的影響Tab.1 Effect of polysaccharide on body weight of rats

3.2 食用菌多糖對酒精性肝損傷影響

酒精性肝損傷影響結果見表2。當提供50%乙醇溶液之后，實驗鼠先呈現出了興奮狀態，然后行走不穩，四肢難以支撐，0.5 h后醉倒且呼吸比較急促，還存在抽搐的情況，該狀態大概持續了1 h。對照組實驗鼠的精神狀態良好，且食欲旺盛，在12 h之后模型組實驗鼠狀態普遍比較差，且精神萎靡，毛色光澤性不強，活動也有所減少。對照組和多糖組無變化，但模型組的實驗鼠存在死亡跡象，死亡時間大概集中在1 h～2 h。和酒精模型組比較，多糖組實驗鼠對酒精性肝損傷有明顯的抑制效果，存活率高。實驗結果顯示，食用菌多糖對酒精性肝損傷具有保護和改善作用。

表2 食用菌多糖對酒精性肝損傷影響Tab.2 Effect of edible fungi on alcoholic liver injury

4 結語

上述研究中，利用提取食用菌多糖將小老鼠當作實驗對象，對酒精性肝損傷改善性能進行測試。經實驗結果顯示，食用菌多糖對于酒精性肝損傷具備良好地改善作用，可顯著降低肝損傷程度，以保障肝功能具有相對完整性。通過以上實驗與分析，力爭為開發護肝藥物提供一定依據。