維生素D結合蛋白基因遺傳變異與海南省老齡慢性鼻竇炎的關聯性

陳賽明 周小柳 李志路 張云霞 周代鋒

(海南醫學院 1第一附屬醫院，海南 海口 571102；2科學實驗中心)

慢性鼻竇炎(CRS)分為慢性鼻竇炎鼻息肉和單純性慢性鼻竇炎，而后者的發病率約占80%〔1～4〕。歐洲國家的CRS患者中，老年人占4.5%～12.0%，對生活質量有顯著影響〔5〕；而17%的中國老齡人患有CRS，嚴重影響著中國老齡人的生活質量〔6,7〕。近些年的研究表明，脂溶性維生素D與CRS存在顯著的關聯，它在體內首先與維生素D結合蛋白(VDBP)結合，并通過維生素D受體、細胞色素P450家族等成分的作用進行信號傳遞，實現對機體免疫系統的調節〔8～10〕。VDBP的編碼基因為GC，該基因存在超過2 000個單核苷酸多態性(SNP)位點，這些位點的多態性與CRS的關聯性研究數據頗少，而與海南省老齡人群CRS的關聯性研究更是尚未見報道。本研究通過分析海南省老年CRS患者GC多態性的三個多態性位點rs7041、rs222016、rs4588，探討其與CRS的關聯性。

1 對象與方法

1.1對象 選擇海南醫學院第一附屬醫院2017年3～12月收治的37例老齡單純性CRS患者作為病例組，選擇同期在該院體格檢查科檢查的99例健康老年人作為對照組。病例組男23例，女14例，年齡60～75歲。對照組中男54例，女45例，年齡60～76歲。兩組性別及年齡無統計學差異。樣本納入及排除標準： CRS診斷嚴格根據2012年歐洲鼻-鼻竇炎臨床診療指南(EPOS-2012)和CPOS2088的建議，CRS診斷標準包括癥狀、體征和輔助影像學檢查三個方面：(1)持續超過12 w的四種癥狀：主要癥狀：鼻塞，黏膿性鼻塞；次要癥狀：嗅覺減退，頭面部悶脹沉重感；四種癥狀中必須有兩種以上，其中主要癥狀必有其一。(2)體征：使用前鼻鏡或鼻內鏡檢查可見中鼻道或嗅裂有膿性分泌物。(3)影像學檢查：包括鼻竇X線檢查、鼻竇CT檢查、鼻竇MRI檢查，其中鼻竇CT檢查是診斷CRS最直接和準確的方法。所有受試者排除癌癥史、心血管疾病、自身免疫性疾病或已知感染性疾病史。

1.2基因分型方法 采集所有受試者EDTAK2抗凝血2 ml，取100 μl提取高質量基因組DNA。委托上海捷瑞生物工程有限公司對樣本進行基因多態性位點的分型。具體過程：合成引物P1(AAAGAGGAGGTGAGTTTATGGAA)、P2(GACTGGCAGAGCG-ACTAA)，擴增包含rs7041(擴增片段長度：122 bp)的PCR片段；以引物P3(CTCTGTTGGTGATTTGATCTTGAA)、P4(GGCTCTGTCCTCTTACTCTTG)擴增包含rs222016(擴增片段長度：103 bp)的PCR片段；以引物P5(GACTGGCAGAGCGACTAA)、P6(AAAGAGGAGGTGAGTTTATGGAA)擴增包含rs4588(擴增片段長度：121 bp)的PCR片段。多重PCR的擴增條件：95℃(3 min)；94℃、15 s,55℃、15 s，72℃、30 s共35個循環；72℃延伸3 min。純化產物以引物P7(CTAAAAGCAAAATTGCCTGA)、P8(ctgactgactAGGATTAACCTCCATGCTGA)及P9(ctgactgactgactgactgaTAACCAGCTTTGCCAGTTCC) 分別進行延伸反應。利用美國ABI公司的3730XL基因測序儀進行序列測定及數據讀取。

1.3統計學分析 登陸網站https://www.snpstats.net/start.htm?q=snpstats/start.htm，利用SNPStats軟件進行基因型云分析，基因型的組間差異用共顯性模型進行驗證。等位基因頻率及組間差異采用SPSS25.0軟件行χ2檢驗。

2 結 果

三個多態性位點均可以檢測出三種基因型，rs7041的三種基因型TT、GT、GG在病例組及對照組中的發生率差異無統計學差異(P>0.05)；該位點的等位基因T和G亦無組間統計學差異(P>0.05)。rs222016的三種基因型AA、AG、GG在病例組和對照組中的基因型及等位基因分布頻率比較無統計學差異(P>0.05)。rs4588的三種基因型CC、AC、AA在病例組和對照組中的基因型及等位基因分布頻率比較也無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 GC基因多態性與海南省老齡CRS的關聯性〔n(%)〕

3 討 論

VDBP是維生素D進入細胞后第一個與之結合的蛋白，在維生素D發揮作用的過程中具有極其重要的作用。該蛋白除了運輸維生素D及其代謝產物外，還具有調節肌動蛋白、調節免疫和炎癥反應、結合脂肪酸、調節骨質發育等功能〔11～13〕。 VDBP的編碼基因GC在人群中存在廣泛多態性，而這些多態性位點與某些疾病的關聯性已經被廣泛研究并報道〔14～17〕。

rs7041多態性(T→A)突變可導致VDBP第432位的氨基酸由天冬氨酸突變位為氨酸，rs4588(C→A)突變可導致VDBP第436位氨基酸由蘇氨酸轉變為賴氨酸。Navasnazario等〔18〕發現rs7041與兒童哮喘密切相關，在基因型TT、TA、AA的兒童中，哮喘的發病頻率依次遞減，而rs4588與同批樣本無顯著關聯性。

本研究首次報道了海南省老齡CRS人群中GC基因多態性，三個多態性位點rs222016、rs4588、rs7041在海南省老齡CRS人群中均具有野生型、雜合型及突變型三種基因型。三種基因型分布頻率均與海南省老齡CRS無顯著關聯性；此外，等位基因的分布頻率亦無組間差異。這說明VDBP多態性與海南省CRS的關聯性較弱。當然，也不排除本次收集的樣本量較小的原因。