天津地區豬飼料中霉菌毒素污染調查

尹姣姣　池晶晶　李富強　譚世旭　任衛科　田向學　路超　鄢明華

摘 ? ?要：為了解天津及周邊地區養豬場飼料中霉菌毒素含量及污染情況，筆者于2016年9月—2017年8月從天津市9個區縣及周邊的河北部分地區采集265份豬飼料及飼料原料，利用直接競爭酶聯免疫吸附試驗法分別對樣品中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、T-2毒素、嘔吐毒素含量進行測定。結果顯示：豬飼料及飼料原料中霉菌毒素檢出率為23.77%～96.98%，且96.98%的豬飼料及飼料原料受到2種及以上霉菌毒素污染。4種霉菌毒素中，嘔吐毒素污染最為嚴重，超標率為29.81%;其次為玉米赤霉烯酮，超標率為2.26%;黃曲霉毒素B1污染較輕，超標率僅1.13%;樣品中未檢出T-2毒素超標。

關鍵詞：豬飼料;飼料原料;霉菌毒素;污染

中圖分類號：S816 ? ? ? ? ?文獻標識碼：A ? ? ? ? ?DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2019.05.007

Investigation of Mycotoxin Contamination in Pig Feed Ingredients in Tianjin

YIN Jiaojiao1，2， CHI Jingjing1，2， LI Fuqiang1，2， TAN Shixu1，2， REN Weike1.2， TIAN Xiangxue1，2， LU Chao1，2， YAN Minghua1，2

（1.Tianjin Animal Science and Veterinary Research Institute， Tianjin 300381， China; 2.Tianjin Livestock and Poultry Health Breeding Technology Engineering Center， Tianjin 300381，China）

Abstract：In order to understand the content and pollution of mycotoxin in feed of the pig farms in Tianjin and its surrounding areas，265 samples were collected in Tianjin and its surrounding areas from September 2016 to August 2017. The content of aflatoxin B1，zearalenone，T-2 toxin ?and deoxynivalenol were determined by direct competitive enzyme-linked immunosorbent assay （ ELISA ）. The results showed that the detection rate of mycotoxins in pig feed and feedstuff was 23.77%～96.98%， and 96.98% of feed and raw materials were contaminated by two or more mycotoxins. Among the four mycotoxins， the vomit toxin was the most polluted， the ratio above the standard rate was 29.81%; the zearalenone was the second， exceeding the standard rate was 2.26%; the aflatoxin B1 was light relatively in pollution and the overshooting was only 1.13%; and T-2 toxin was not detected in the samples.

Key words： pig feed; raw materials of feedstuff; mycotoxin; contamination

霉菌毒素可抑制蛋白質和DNA合成，誘導程序性細胞死亡，間接抑制免疫系統，造成豬對傳染病的易感性增加，降低生產效率[1]。有些霉菌毒素還會在畜禽的肉、蛋、奶等產品中蓄積和殘留，威脅人類食品安全[2]。在多種霉菌毒素中，黃曲霉毒素B1（AFB1）毒性最強，可造成人和動物急性和慢性中毒，引起生長遲緩、肝臟腫大、肝壞死、免疫機能下降等癥狀[3];且其具有蓄積性，長期攝入低劑量的黃曲霉毒素B1會引起動物的慢性中毒，導致動物出現生長緩慢、飼料利用率降低、生產性能下降[4]以及免疫力低下。玉米赤霉烯酮（ZEN）具有類似雌激素的作用，主要影響動物的繁殖性能[5-6]，使雌性小豬及母豬陰道紅腫。妊娠期的動物食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流產、死胎和畸胎。Muthulakshmi等[7]研究發現，玉米赤霉烯酮除造成斑馬魚心臟受損、脊柱彎曲外，還會引起受精胚胎DNA損傷、凋亡和組織學變化。T-2 毒素可抑制蛋白質合成，并影響活細胞分化;中毒后表現為拒食、嘔吐，主要表現為胃腸道、肝和腎的壞死性損害和出血，嚴重中毒時可見口腔黏膜壞死。嘔吐毒素（DON）的毒性效應包括嘔吐、不想進食、胃腸炎、腹瀉和免疫抑制，豬是對嘔吐毒素最敏感的動物，當飼料嘔吐毒素含量≥1 mg·kg^-1，豬只拒絕進食[8]。

由于飼料及原料霉菌毒素污染對畜禽養殖業及飼料工業的發展影響嚴重，隨著我國現代養殖業快速發展，人們對飼料原料中霉菌毒素的污染日益重視。研究表明，我國飼料及原料霉菌毒素污染相當普遍，對畜牧業生產造成了不可忽視的影響，制約了養殖生產的效益[9]。本研究對天津及河北部分地區豬飼料及飼料原料中4種霉菌毒素的含量進行調查，以便了解該地區霉菌毒素污染情況，為養豬生產提供咨詢和指導。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

試驗所用豬飼料及飼料原料樣品，于2016年9月—2017年8月采集于天津市（武清、寶坻、靜海、寧河、薊州、北辰、津南、西青和東麗）9個區縣及周邊河北部分地區，樣品包括玉米、豆粕、麩皮和豬飼料（表1）。

1.2 儀器與試劑

酶標儀（美國BioTeK-ELx800）;洗板機（美國BioTeK-405LS）;離心機（美國Thermo-FRESCO17）;粉碎機（永康市老本行多功能粉碎機）。

霉菌毒素ELISA檢測試劑盒：黃曲霉毒素B1檢測試劑盒、玉米赤霉烯酮檢測試劑盒、T-2毒素檢測試劑盒和嘔吐毒素檢測試劑盒，均購自ROMER國際貿易（北京）有限公司。

鹽酸、氫氧化鈉、甲醇均為分析純，購自天津風船化學公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 溶液配制 70%甲醇溶液：取2 100 mL純水，加入甲醇4 900 mL混勻。

1.3.2 樣品前處理 樣品采集方法按GB/T 14699.1-2005《飼料采樣方法》[10]進行，從可能受污染的區域多次、多點采集具有代表性的樣品。每份樣品不少于500 g，粉碎過0.90 mm篩網。混合后分裝封樣，一包作為檢測樣，一包留樣，各占50%。樣品在測定前密封保存于-20 ℃冰箱。

1.3.3 提取 黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和T-2毒素稱取5 g（精確至0.01 g）粉碎的樣品于50 mL離心管中，準確加入25 mL 70%甲醇溶液，振蕩萃取3 min，靜置樣品，濾紙過濾上清液，收集濾液待測。

嘔吐毒素稱取5 g（精確至0.01 g）粉碎的樣品于50 mL離心管中，準確加入25 mL蒸餾水，振蕩萃取3 min，靜置樣品，濾紙過濾上清液，收集濾液待測。

1.3.4 霉菌毒素含量檢測 按照ELISA檢測試劑盒說明書進行。

1.3.5 判定標準 各種霉菌毒素限量值及參考標準見表2。

2 結果與分析

2.1 霉菌毒素在不同飼料中的檢測結果

2.1.1 玉米 從表3可見，玉米中4種霉菌毒素均有檢出。其中，嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮污染比較嚴重，檢出率分別為91.07%和82.14%，超標率分別為30.36%和7.14%，嘔吐毒素最高含量2 520.00 μg·kg^-1，是污染最為嚴重的毒素。黃曲霉毒素B1檢出率為19.64%，超標率為5.36%;T-2毒素檢出率為48.21%，但均未超標。

2.1.2 豆粕 從表4可見，豆粕中黃曲霉毒素B1未檢出，其他3種霉菌毒素均有不同程度污染。玉米赤霉烯酮和T-2毒素檢出率很高，分別為100.00%和97.06%，但均未超標。嘔吐毒素檢出率為100.00%，超標率為47.06%，污染嚴重，詳見表4。

2.1.3 麩皮 從表5可見，嘔吐毒素污染嚴重，檢出率94.59%，平均含量1 200.00 μg·kg^-1，最高含量為3 160.00 μg·kg-1，超過國家規定的飼料衛生標準，超標率達45.95%。玉米赤霉烯酮、T-2毒素和黃曲霉毒素B1檢出率依次為97.30%，94.59%和27.03%，但含量均未超標。

2.1.4 豬飼料 從表6可見，豬飼料中4種霉菌毒素均被檢出，其中，玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、T-2毒素和黃曲霉毒素B1檢出率分別為100.00%，99.28%，78.24%和30.43%;黃曲霉毒素B1和T-2毒素均未超標，而嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮超標率分別為21.01%和0.72%;嘔吐毒素的超標率最高，含量的平均值為750 ?μg·kg^-1，接近國家規定的飼料衛生標準最高限量，污染相對嚴重。

2.2 不同霉菌毒素污染情況

從檢測結果看，不同種類樣品中均出現高檢出率，表明這4種霉菌毒素在當前豬飼料及飼料原料中的污染很普遍。在送檢樣品中，未檢出毒素的樣品1份（0.38%）;檢測到1種、2種和3種及以上毒素的樣品分別為7份（3.02%），43份（15.85%）和214份（80.75%）（圖1）。

在送檢的豬飼料和飼料原料樣品中，嘔吐毒素污染最嚴重，檢出率為96.98%，超標率為29.81%;其次是玉米赤霉烯酮檢出率為95.85%，超標率為2.26%;T-2毒素檢出率為76.98%，超標率為0.00%; 黃曲霉毒素B1檢出率為23.77%，超標率為1.13%（表7）。

2.3 不同季節霉菌毒素污染情況

從表8～表11可見，一年四季4種霉菌毒素均有污染，其中秋季污染最為嚴重。4種霉菌毒素中，黃曲霉毒素B1污染最輕，其中豆粕在四季中均未檢出;玉米赤酶烯酮在秋季和冬季污染嚴重，夏季污染相對較輕，其中以豬飼料和玉米含量較高，檢測平均值分別為111.96 μg·kg^-1和116.59 μg·kg^-1;T-2毒素在秋季污染嚴重，其后依次為夏季、冬季和秋季，以豆粕和麩皮含量較高，檢測平均值分別為37.60 μg·kg^-1和41.91 μg·kg^-1;嘔吐毒素在秋季污染最為突出，其中豆粕和麩皮最為嚴重，檢測平均值分別為980 μg·kg^-1和1 160 μg·kg^-1。

3 討 論

從檢測結果來看，天津及周邊地區豬飼料及飼料原料中霉菌毒素污染情況比較嚴重，超過99.00%以上的豬飼料及飼料原料受到霉菌毒素污染，這與朱風華等[11]、王國強和杜妮[12]、曹偉[13]的報道基本一致，說明我國不同地區豬飼料及飼料原料均存在霉菌毒素的污染。此外，調查結果顯示，高達96.98%的豬飼料及飼料原料受到2種及以上霉菌毒素污染，表明本地區多種霉菌毒素在同一豬飼料或飼料原料樣品中共存現象很普遍，這比高新等[14]研究報道無論在豬成品飼料中或玉米、麩皮、豆粕等常見典型飼料原料中，2種霉菌毒素的共存現象均超過50.00%的結果還要嚴重。

黃俊恒等[15]研究報道，2015年嘔吐毒素超標情況相對嚴重，樣品超標率為38.7%，檢測平均值為1 896.8 ?μg·kg^-1。敖志剛和陳代文[16]研究報道，2006—2007年我國飼料原料和全價飼料中超標率和檢出水平最高的霉菌毒素是嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和煙曲霉毒素，超標率分別為53.5%，46.9%和38.1%。匈牙利Tima等[17]報道的鐮刀菌毒素和嘔吐毒素在豬飼料中的含量最高，T-2毒素和玉米赤霉烯酮含量較低。本研究結果顯示，嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素B1和T-2毒素的超標率分別為29.81%，2.26%，1.13%和0.00%，其趨勢和以上報道基本相同。但超標率明顯低于以上報道的數據，表明天津及周邊地區的霉菌毒素污染程度相對較輕，同時，嘔吐毒素仍是近幾年該地區豬飼料及飼料原料中霉菌毒素超標的主要毒素。

對不同的霉菌毒素檢測結果表明，4種毒素中嘔吐毒素的超標率明顯高于其他3種毒素，尤其是在豆粕和麩皮中，其中豆粕中超標率為47.06%，最高含量為1 250.00 ?μg·kg^-1，麩皮中超標率為45.95%，最高含量為3 160.00 ?μg·kg^-1。而以往備受關注的黃曲霉毒素B1的超標率則僅為1.13%。此結果與杜妮[18-19]、黃俊恒和黃廣明[20]及謝文梅等[21]報道的檢測結果均一致;表明近年來我國豬飼料及飼料原料中嘔吐毒素的超標率呈上升趨勢，而黃曲霉毒素B1的污染率呈下降趨勢。

以上結果顯示，天津及周邊地區豬飼料及飼料原料中霉菌毒素污染情況仍然比較嚴重，且一年四季均有污染。嘔吐毒素是當前飼料中污染最為嚴重的毒素，應加強監測和防控。飼料廠和養殖企業對霉菌毒素的污染應引起高度重視，加強對飼料及飼料原料的儲存方式、溫度和濕度等因素的管理和控制，以降低養殖風險。

參考文獻：

[1]王國強，張天偉.豬群霉菌毒素中毒危害與防控[J].國外畜牧學（豬與禽），2015，35（10）：25-27.

[2]王松雪，李愛科，謝剛，等.糧食飼料資源霉菌毒素檢測技術[J].中國糧油學報，2006，21（3）：415-418.

[3]張定華，吉色曲伍，金衛華，等.霉菌毒素對畜禽的影響及防控方法研究進展[J].飼料研究，2015：（17）11-15.

[4]肖傳英，馮廣鵬，魏金濤，等.飼料中黃曲霉毒素研究進展[J].畜禽業，2007（5）：4-7.

[5]錢利純，尹兆正.玉米赤霉希酮對畜禽的毒害作用研究進展[J].黑龍江畜牧獸醫，2005：（9）70-80.

[6]張蕾，權自芳，顏其貴，等.霉菌毒素對豬生殖的影響[J].飼料工業，2012，33（12）：34-36.

[7]MUTHULAKSHMI S，MAHARAJAN K，HABIBI H R，et al. Zearalenone induced embryo and neurotoxicity in zebrafish model （Dnnio rerio）： Role of oxidative stress revealed by a multi biomarker study[J].Chemosphere， 2018，198：111-121.

[8]劉子涵.霉菌毒素對豬生產性能的影響及預防[J].今日畜牧獸醫，2010（2）：19-20.

[9]達富蘭，薛萬朝.飼料中常見的霉菌毒素及預防[J].養豬技術顧問，2015 （1）：22-24.

[10]全國飼料工業標準化技術委員會.GB/T 14699.1-2005飼料 采樣[S].北京：中國標準出版社，2005.

[11]朱風華，陳甫，徐進棟，等.2014年山東省飼料原料霉菌毒素污染狀況調查[J].飼料檢測，2015（18）：56-60.

[12]王國強，杜妮.2014年7—12月全國飼料及原料霉菌毒素污染及調查報告[J].今日養豬業， 2015（3）：50-53.

[13]曹偉.江蘇省2016年上半年市售飼料及原料中霉菌毒素污染及調查報告[J].飼料研究， 2017（6）：8-10.

[14]高新，馬義勝，姚巧粉.云南省養豬場（戶）飼料霉菌毒素污染狀況[J].飼養飼料，2017（5）：51-55.

[15]黃俊恒，黃廣明，李婉華.2015年19省區飼料及飼料原料霉菌毒素污染狀況分析[J].養豬，2016（2）：14-16.

[16]敖志剛，陳代文.2006—2007年中國飼料及飼料原料霉菌毒素污染調查報告[J].中國畜牧獸醫，2008：35（1）：152-156.

[17]TIMA H， RACZ A， GULD Z， et al. Deoxynivalenol， zearalenone and T-2 in grain based swine feed in Hungary[J].Food addit contam part B surveill，2016（4）：275-280.

[18]杜妮.2014年我國部分地區飼料及原料霉菌毒素污染調查報告[J].豬業科學，2015，32（5）：82-84.

[19]杜妮.2015年我國部分地區飼料及飼用原料霉菌毒素污染調查報告[J].豬業科學，2016，33（2）：46-48.

[20]黃俊恒，黃廣明.2016年20省市飼料及飼料原料霉菌毒素污染狀況分析[J].養豬，2017（2）：21-24.

[21]謝文梅，張蘭，蘇永騰，等.2017年1—6月份飼料及原料霉菌毒素分析報告[J].飼料廣角，2017（9）：28-31.