氣相色譜法測定禽蛋中有機氯農藥和多氯聯苯殘留量

盧克剛，張紅霞

(1.山東職業學院生物工程系，山東濟南 250104；2.山東省食品藥品檢驗研究院，山東濟南 250101)

隨著人們生活水平的提高，食品安全問題越來越受到重視。有機氯農藥（OCPs）和多氯聯苯（PCBs）屬于環境中普遍存在的有機污染物，由于其性質穩定、半衰期較長、毒性高、脂溶性強等特點，很容易通過食物鏈在脂類物質中高度蓄積，極少量的殘留即能對生物體產生復合干擾損害，甚至致癌、致畸、致突變（LAUBY-SECRETAN等，2016；YANG 等，2015）。近年來，油、蛋、奶等農產品的有機氯農藥和多氯聯苯的污染情況逐漸受到重視，測定殘留量的主要方法是氣相色譜法（GC）及其聯用技術（付文雯等，2018；丁立平等，2014；趙雁冰等，2011）。

目前，GB/T 5009.19-2008和GB 5009.190-2014是分別測定食品中有機氯農藥殘留量和多氯聯苯含量，樣品均需溶劑提取再經凝膠滲透色譜或多次柱色譜層析凈化后方可上機測定，操作繁瑣，且成本較高（中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會，2014；中華人民共和國衛生部、中國國家標準化管理委員會，2008）。本研究采用乙腈為溶劑，超聲輔助提取，結合硫酸酸化凈化、稀釋鹽析法除雜等前處理，操作簡便、快速、凈化徹底，測定結果準確可靠，通量高，可實現禽蛋中14種有機氯農藥和7種多氯聯苯的同時測定，能滿足批量禽蛋樣品快速檢測的需要。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料 雞蛋、鵪鶉蛋均為市售。禽蛋去殼后粉碎混勻，裝入容器置于4℃貯藏。

1.1.2 試劑 乙腈、正己烷、丙酮和二氯甲烷：色譜純，賽默飛世爾公司；無水硫酸鈉、氯化鈉和濃硫酸：優級純，國藥集團；純化水自制。

1.1.3 標準品及標準溶液的配制 標準品：8種有機氯農藥混標（α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、p，p"-滴滴伊、o，p"-滴滴涕、p，p"-滴滴滴、p，p"-滴滴涕）、六氯苯、七氯、艾氏劑、順式-氯丹、反式-氯丹、氧氯丹，濃度均為100 mg/L，購于農業部環保所；7種多氯聯苯混標（PCB28、PCB52、PCB101、PCB118、PCB138、PCB153、PCB180），濃 度 均 為 10 mg/L，購 于 美 國o2si公司。

混合標準貯備液的配制：準確移取適量有機氯和多氯聯苯標準溶液，用正己烷稀釋，配成1000 μg/L的標準儲備液。

混合標準溶液系列的配制：準確吸取適量上述混合標準貯備液用正己烷稀釋，配成濃度為5、10、20、50、100、200 μg/L 的系列混合標準溶液。

1.1.4 儀器 7890B氣相色譜儀，配有電子捕獲檢測器（μECD）：美國Aglient公司；毛細管色譜柱（HP-5，30 m×0.25 mm×0.25 μm）：美國Aglient公司；電子天平：北京賽多利斯；渦旋混合器：德國IKA公司；超聲波清洗機：寧波新芝生物科技公司；離心機：德國sigma公司；氮吹儀：美國Organomation公司；Mili-Q超純水機。

1.2 方法

1.2.1 樣品前處理 提取：稱取樣品4 g（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入10 mL水搖勻，加入20 mL乙腈渦旋2 min，超聲15 min，再加入約4 g氯化鈉，渦旋2 min，8000 r/min離心5 min，移取10 mL有機層提取液于15 mL具塞離心管中，40℃水浴下氮吹近干，用正己烷定容至2 mL，渦旋 2 min，待凈化。

凈化：上述正己烷溶液加濃硫酸0.2 mL，振搖1 min，9000 r/min離心5 min，棄去下層硫酸廢液。如果硫酸層仍有顏色（表明正己烷層中雜質未除完全），再加0.2 mL濃硫酸，重復操作直至無色。正己烷層再加入3 mL 20%硫酸鈉水溶液，渦旋1 min，9000 r/min離心3 min，取正己烷層加入適量無水硫酸鈉脫水后轉移至進樣瓶中供測定用。

1.2.2 氣相色譜條件 HP-5毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；氮氣（≥ 99.999%），恒流，柱流量為1.0 mL/min；進樣口溫度為260℃；不分流進樣，進樣量1 μL；檢測器（μECD）溫度為300℃；程序升溫：初始溫度50℃，保持1 min，15℃ /min升 至 200℃，3℃ /min升 至260℃，30℃ /min 升至 280℃，保持 5 min。

2 結果與討論

2.1 儀器分析條件的選擇 為了使目標物有合適的保留時間和良好的分離度，本文考察了色譜柱、柱流速、升溫程序及進樣口溫度等影響因素。通過多次實驗，最終確定了1.2.2所述的色譜條件。在此色譜條件下，混合標樣、雞蛋空白樣品加標色譜圖分別見附圖（I、II）。圖1可見，21種待測目標物達到基線分離，同時避免雜峰的干擾，在30 min內就可完成分析。

圖1??有機氯農藥和多氯聯苯標準品（100?μg/L）色譜圖（I）、雞蛋空白樣品加標（25?μg/kg）色譜圖（II）

1-α-六六六；2-六氯苯；3-β-六六六；4-γ-六六六；5-δ-六六六；6-PCB28；7-七氯；8-PCB52；9-艾氏劑；10-氧氯丹；11-反式-氯丹；12-PCB101；13-順式-氯丹；14-p，p"-滴滴伊 ；15-PCB118；16-p，p"-滴滴滴；17-o，p"-滴滴涕 ；18-PCB153；19-p，p"-滴滴涕 ；20-PCB138；21-PCB180

2.2 提取溶劑的選擇 為了有效提取目標物，根據禽蛋樣品的特點及目標化合物的特性，比較了正己烷、乙腈、丙酮、正己烷與二氯甲烷混合液等4種溶劑的提取效果。結果發現，用含正己烷的溶劑提取極易乳化并有大量的共萃物，而以乙腈為溶劑，目標物溶解性好，并能較好地除脂、沉淀蛋白，目標物有較好的回收率，故選乙腈為提取溶劑。

2.3 硫酸凈化 硫酸磺化過程中不能劇烈振搖，以免樣品乳化嚴重，硫酸應少量多次添加，根據酸層顏色決定添加次數。凈化后如直接進樣，引入的酸氣會影響毛細管柱的涂層，縮短色譜柱壽命，對檢測器也會造成損壞，因此，凈化后的正己烷層要用20%硫酸鈉溶液洗滌以除去殘留的硫酸和磺化物。

2.4 方法的評價

2.4.1 方法的線性范圍、檢出限及定量限 取1.1.3配制的混合標準溶液系列進行儀器分析，以化合物濃度為橫坐標，以色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算相關系數。以雞蛋空白樣品加標來考察方法的檢出限和定量限，S/N≥3、S/N≥10所對應的化合物濃度分別為檢出限和定量限，結果見表1。從表中可見，21種化合物在5～200 μg/L時線性關系良好，相關系數均大于0.999，檢出限為0.10～0.20 μg/kg，定量限為0.3 ～ 0.7 μg/kg。

2.4.2 回收率和精密度 在雞蛋空白樣品中添加 3個濃度水平（5、20、100 μg /kg）的混合標準溶液進行添加回收實驗（每個水平重復6次）。按照選定的方法進行前處理和分析測定，計算各待測組分的回收率及RSD，結果見表2。由表2可知，在3個濃度加標水平下，雞蛋空白樣品中有機氯農藥和多氯聯苯加標的平均回收率為75.1%～103.8%，相對標準偏差1.41%～6.64%，方法的準確度與精密度較高，可滿足日常檢測的需要。

表1 方法的線性方程、相關系數、檢出限和定量限

表 2 有機氯農藥和多氯聯苯在雞蛋中的回收率和相對標準偏差（n=6）????????????%

2.5 實際樣品的檢測 采用本法對市售的20份禽蛋樣品（雞蛋、鵪鶉蛋各10份）進行檢測，僅有2份雞蛋和1份鵪鶉蛋樣品中檢出有機氯農藥p，p"-DDT，檢出值均低于5 μg/kg，多氯聯苯均沒有檢出，說明這些禽蛋樣品受到的污染較輕。

3 結論

禽蛋是我國居民生活中動物蛋白的重要來源，如果長期攝入有機氯農藥與多氯聯苯污染的禽蛋會對人體健康產生極大危害。本研究建立了禽蛋中14種有機氯農藥和7種多氯聯苯殘留同時檢測的氣相色譜方法，該法靈敏度高，重現性好，通過對實際樣品的檢測，驗證了本方法的實用性和可靠性，可為禽蛋中有機氯農藥和多氯聯苯殘留的高通量檢測提供參考。