氣霧劑對(duì)肉雞大腸桿菌感染的保護(hù)作用

仲偉平，張鳳華，高 歌

（開封市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南開封 475000）

具有多重抗生素耐藥性的細(xì)菌在人類和動(dòng)物醫(yī)學(xué)中日益受到關(guān)注，在動(dòng)物生產(chǎn)中使用抗生素與在人類醫(yī)學(xué)中使用抗生素相比，抗生素耐藥性細(xì)菌的出現(xiàn)對(duì)人類健康構(gòu)成了威脅。已有相關(guān)文獻(xiàn)表明，動(dòng)物生產(chǎn)中抗生素的使用與人類感染耐抗生素細(xì)菌的增加有關(guān)（Bogaard等，2001；Klare等，1999）。不管抗生素在動(dòng)物生產(chǎn)中的實(shí)際作用如何，關(guān)于人類耐藥感染的發(fā)生率已經(jīng)納入法規(guī)的考慮，今后將嚴(yán)格限制在動(dòng)物生產(chǎn)中使用抗生素。大腸桿菌病仍然是家禽生產(chǎn)中的一個(gè)嚴(yán)重問題，造成的死亡損失很大。如果在家禽生產(chǎn)中限制抗生素的使用，大腸桿菌病感染將成為家禽養(yǎng)殖業(yè)面臨的一個(gè)嚴(yán)重問題。因此，在家禽生產(chǎn)中，為預(yù)防和治療大腸桿菌病，需要尋求抗生素替代品或方法。Carlton（1999）發(fā)表了一篇關(guān)于噬菌體預(yù)防細(xì)菌性疾病的綜述，從中我們可以看到，從一種禽類致病性大腸桿菌中分離出來的噬菌體，在與該細(xì)菌混合之前可以保護(hù)肉雞免受感染。因此，本試驗(yàn)以不同日齡感染大腸桿菌的肉雞為研究對(duì)象，研究噬菌體的氣霧劑對(duì)肉雞大腸桿菌感染的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 3個(gè)試驗(yàn)均包含9個(gè)處理組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只雞。9個(gè)處理組中有3個(gè)未感染大腸桿菌組，其中1組不做任何處理，另外2組噴霧PBS或噬菌體氣霧劑，其余6組分別在第7、8和10天感染大腸桿菌（接種5.5×105CFU）并分別進(jìn)行PBS噴霧或噬菌體氣霧劑。噬菌體噴霧劑購(gòu)自勃林格殷格翰動(dòng)保有限公司。接種情況及PBS噴霧參考Huff等（2002）的研究方法，試驗(yàn)共進(jìn)行3周。

1.2 試驗(yàn)記錄 每周對(duì)各組雞只按照重復(fù)稱重一次（死亡或淘汰雞只也進(jìn)行稱重），3周試驗(yàn)結(jié)束后，取肝、心、脾、法氏囊稱重。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS中ANOVA模型進(jìn)行分析，各組均值用Ducan’s法進(jìn)行多重比較，P＜0.05表示組間差異顯著。

2 結(jié)果與分析

不同氣霧劑對(duì)肉雞體重的影響（試驗(yàn)1）見表1，與對(duì)照組相比，第7天感染大腸桿菌接受噬菌體噴霧的肉雞在第1周體重顯著降低（P＜0.05）。感染大腸桿菌的肉雞在2周體重顯著低于未感染的3組（對(duì)照組、處理1和處理2組）（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，第7天感染大腸桿菌接受PBS噴霧、第8天感染大腸桿菌接受噬菌體噴霧的3周齡肉雞體重顯著降低（P＜0.05）。

表1 噴霧劑對(duì)不同時(shí)間感染大腸桿菌肉雞體重的影響（試驗(yàn)1）

由表2可知，感染大腸桿菌的肉雞死亡率均顯著高于未感染組（P＜0.05）。第7天感染大腸桿菌的肉雞接受PBS噴霧死亡率達(dá)到60%，而同樣日齡接受噬菌體噴霧的肉雞死亡率為30%。第8或10天感染大腸桿菌的肉雞接受PBS噴霧或噬菌體噴霧對(duì)死亡率無顯著影響（P＞0.05）。

不同氣霧劑對(duì)肉雞體重的影響（試驗(yàn)2）見表3，各處理對(duì)第7天肉雞體重?zé)o顯著影響（P＞0.05）。感染大腸桿菌的肉雞在第2周體重均顯著低于未感染組（P＜0.05），但接受PBS噴霧與噬菌體噴霧對(duì)第2周肉雞體重的影響無顯著差異（P＞0.05）。除了第8天感染大腸桿菌的肉雞，其他感染組均較未感染組顯著減低第3周體重（P ＜ 0.05）。

表2 噴霧劑對(duì)不同時(shí)間感染大腸桿菌肉雞死亡率的影響（試驗(yàn)1）

表3 噴霧劑對(duì)不同時(shí)間感染大腸桿菌肉雞體重的影響（試驗(yàn)2）

由表4可知，第10天感染大腸桿菌的肉雞接受噬菌體噴霧較接受PBS噴霧顯著降低了死亡率（3%和40%）（P＜0.05）。第7或10天感染大腸桿菌的肉雞接受噬菌體噴霧對(duì)死亡率的影響不顯著（P ＞ 0.05）。

不同氣霧劑對(duì)肉雞體重的影響（試驗(yàn)3）見表5，第10天感染大腸桿菌的肉雞接受噬菌體噴霧較對(duì)照組顯著提高了第1周齡的體重（P＜0.05）。無論肉雞在幾日齡感染大腸桿菌，接受PBS噴霧的肉雞均較未感染組顯著提高了第2周體重（P＜0.05）。各處理組對(duì)第3周肉雞體重?zé)o顯著影響（P ＞ 0.05）。

表4 噴霧劑對(duì)不同時(shí)間感染大腸桿菌肉雞死亡率的影響（試驗(yàn)2）

表5 噴霧劑對(duì)不同時(shí)間感染大腸桿菌肉雞體重的影響（試驗(yàn)3）

由表6可知，接受噬菌體噴霧但未感染大腸桿菌的肉雞死亡率較對(duì)照組及接受PBS噴霧組顯著降低（P＜0.05）。肉雞在第7或8天感染大腸桿菌，同時(shí)接受噬菌體噴霧較接受PBS噴霧顯著降低了死亡率（P＜0.05）。各處理對(duì)第10天感染大腸桿菌肉雞的死亡率無顯著影響（P ＞ 0.05）。

3 討論

本試驗(yàn)給肉雞接種大腸桿菌來模擬其受該菌感染，3個(gè)試驗(yàn)均反應(yīng)了給感染的雞只進(jìn)行噬菌體噴霧對(duì)雞只具有保護(hù)作用。試驗(yàn)1結(jié)果顯示，噬菌體噴霧只對(duì)感染了大腸桿菌的雞只具有保護(hù)作用，試驗(yàn)2結(jié)果發(fā)現(xiàn)，噬菌體噴霧3 d后對(duì)感染大腸桿菌的雞只具有保護(hù)作用，但其保護(hù)期限還尚不明確，試驗(yàn)3結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肉雞感染大腸桿菌后接受噬菌體噴霧，其保護(hù)作用一直在延續(xù)。

表6 噴霧劑對(duì)不同時(shí)間感染大腸桿菌肉雞死亡率的影響（試驗(yàn)3）

試驗(yàn)3中使用的雞只體重較小，雞只活力也沒有試驗(yàn)1和試驗(yàn)2的雞只強(qiáng)，因此，該試驗(yàn)未感染的雞只死亡率都達(dá)到20%，而接受PBS噴霧的雞只死亡率達(dá)到27%，而接受噬菌體噴霧的雞只死亡率只有3%，顯著小于對(duì)照組和未感染接受PBS噴霧組。我們懷疑試驗(yàn)3中的雞只已經(jīng)感染了大腸桿菌，而噬菌體噴霧可能為這種感染提供保護(hù)作用，改善其生存環(huán)境。這一假設(shè)得到證實(shí)，解剖對(duì)照組死亡的雞只發(fā)現(xiàn)，球囊炎是期死亡的主要原因。

本試驗(yàn)結(jié)果記錄噬菌體在預(yù)防或治療肉雞大腸桿菌感染的作用，為動(dòng)物和人類細(xì)菌性疾病方面的研究提供了理論依據(jù)。Barrow等（1998）證實(shí)了噬菌體在大腸桿菌介導(dǎo)的敗血癥和腦膜炎的保護(hù)作用，Soothill（1992）的結(jié)果顯示，噬菌體可以保護(hù)小鼠免受單胞菌的感染。此外，Alisky等（1998）研究發(fā)現(xiàn)，噬菌體對(duì)疾病有治療作用。Huff等（2002）研究表明，在沒有明確口服噬菌體對(duì)大腸桿菌感染的保護(hù)作用前噴霧法是最有效的。

4 結(jié)論

氣噴噬菌體對(duì)保護(hù)肉雞呼吸道感染大腸桿菌具有重要作用，使用孵化場(chǎng)和家禽舍內(nèi)的現(xiàn)有設(shè)備，在氣溶膠噴霧劑中使用噬菌體可適用于家禽養(yǎng)殖業(yè)，并可替代抗生素控制家禽細(xì)菌性疾病。