胃癌組織中IFN-γ、IL-4、SOX-2蛋白的表達(dá)特點(diǎn)及與Hp感染的相關(guān)性

李光艷 ，薛明輝 ，張?zhí)m芳 ，張超賢 ，常廷民 ，李瑋

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，1.消化內(nèi)科；2.胃腸外科；3.科研與繼續(xù)教育學(xué)科，河南 衛(wèi)輝453100)

臨床上胃癌的發(fā)生率明顯的上升，在合并有幽門螺桿菌（Hp）感染的患者中，胃癌的發(fā)病率可進(jìn)一步的上升[1]。胃癌的發(fā)生能夠?qū)е禄颊吒吣[瘤負(fù)荷癥狀的出現(xiàn)，并顯著影響患者的總體生存時間[2]。

不同的腫瘤相關(guān)因子均能夠通過影響上皮細(xì)胞的異常分化及增殖過程，從而促進(jìn)胃癌的發(fā)生。γ-干擾素（IFN-γ）是th1淋巴細(xì)胞分泌的效應(yīng)因子，IFN-γ的上升能夠顯著促進(jìn)機(jī)體的炎癥性損傷，加劇自身免疫功能紊亂程度[3]；白細(xì)胞介素-4（IL-4）是th2淋巴細(xì)胞分泌的效應(yīng)因子，IL-4的濃度改變能夠影響到樹突狀T淋巴細(xì)胞的活性，導(dǎo)致免疫抑制和免疫逃逸的發(fā)生[4]；干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄性別決定調(diào)控因子（S0X-2）的表達(dá)，能夠參與到多種生物學(xué)機(jī)制的進(jìn)展過程中，調(diào)控上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄，抑制上皮細(xì)胞的增殖過程[5]。部分研究者探討了IFN-γ的表達(dá)與消化系統(tǒng)惡性腫瘤的關(guān)系，認(rèn)為IFN-γ的表達(dá)上升能夠增加惡性腫瘤的發(fā)生風(fēng)險[6]，但對于IFN-γ、IL-4與Hp感染的關(guān)系研究不足。為了進(jìn)一步揭示IFN-γ、IL-4、SOX-2的表達(dá)與胃癌的關(guān)系，從而為臨床上胃癌患者的診療提供理論基礎(chǔ)，本次研究選取我院2016年1月至2017年5月收集的相關(guān)胃黏膜病變組織，探討了IFN-γ、IL-4、SOX-2的表達(dá)及其與Hp感染的關(guān)系，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2016年1月至2017年5月收集的214例胃粘膜病理組織，其中胃潰瘍組織80例（胃潰瘍組）、胃炎組織80例（胃炎組）、胃癌組織54例（胃癌組）。

胃潰瘍組，年齡38～77歲，平均54.3±10.9歲，男45例、女35例。胃炎組，年齡35～75歲，平均56.0±12.4歲，男48例、女32例。胃癌組，年齡35～79歲，平均56.2±11.8，男33例、女21例。病理學(xué)類型：腺癌50例、印戎細(xì)胞癌4例；TNM分期：Ⅰ期15例、Ⅱ期23例、Ⅲ期12例、Ⅳ期4例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。三組患者的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴胃癌、胃炎、胃潰瘍的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考人民衛(wèi)生出版社《外科學(xué)》第八版中的標(biāo)準(zhǔn)；⑵患者年齡范圍19～79歲；⑶胃癌、胃炎、胃潰瘍的診斷以病理學(xué)結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)；⑷胃癌患者在獲取標(biāo)本前未接受放化療、免疫治療；⑸本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴轉(zhuǎn)移性胃癌；⑵資料不完整；⑶伴有免系統(tǒng)疾病。

1.2 免疫組化染色方法 所有組織標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片，厚度約為4μm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復(fù)合體法 (strep avidin-biotin complex，SABC法)染色，二氨基聯(lián)苯胺(diamionben zidene，DAB)顯色。 IFN-γ、IL-4、SOX-2 蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)開發(fā)公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對照，高倍顯微鏡下觀察 IFN-γ、IL-4、SOX-2蛋白的表達(dá)情況，具體染色步驟嚴(yán)格按照SP試劑盒說明書進(jìn)行操作。

免疫組化結(jié)果判定：IFN-γ、IL-4蛋白的陽性著色表達(dá)于細(xì)胞漿，SOX-2蛋白的陽性著色表達(dá)于細(xì)胞核，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)，⑴根據(jù)著色強(qiáng)度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據(jù)陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分、陽性細(xì)胞所占比例11%～50%為2分、陽性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3分、陽性細(xì)胞數(shù)所占比例＞75%為4分，兩種積分相乘總分＜3分為陰性、≥3分為陽性。

1.3 Hp感染檢測方法 采用C13呼氣實(shí)驗(yàn)進(jìn)行Hp的檢測，空腹5h后，檢查者進(jìn)行呼氣，呼出的氣體大于500ml，口服C13尿酸，連續(xù)性呼出氣體100ml～150ml，采用紅外質(zhì)譜檢測儀器進(jìn)行檢測，測得的值-基線值大于2.5作為判斷陽性的標(biāo)準(zhǔn)。

標(biāo)本經(jīng)過甲醛固定后，常規(guī)脫水透明，石蠟進(jìn)行包埋，4um連續(xù)性切片，Giemsa進(jìn)行染色，乙醇脫水、二甲苯進(jìn)行透明操作，樹膠封片。1000倍的油鏡下觀察，Giemsa染色下Hp感染呈現(xiàn)紅色，“S”形，主要分布于胃小凹和腺體細(xì)胞中。

2 結(jié)果

2.1 三組標(biāo)本中的Hp陽性率比較 胃炎組的Hp陽性率顯著的高于胃癌組、胃潰瘍組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；胃癌組和胃潰瘍組的Hp陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；見表 1。

表1 三組標(biāo)本中的Hp陽性率比較[n（%）]

2.2 三組標(biāo)本中的IFN-γ、IL-4、SOX-2蛋白陽性率比較 胃癌組的IFN-γ蛋白陽性率顯著的高于胃潰瘍組、胃炎組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），胃癌組的IL-4蛋白、SOX-2陽性表達(dá)率顯著的低于胃潰瘍組、胃炎組（P＜0.05）；見表 2。

2.3 胃癌組織中 Hp表達(dá)與 IFN-γ、IL-4、SOX-2蛋白陽性率的關(guān)系 胃癌組組織中的IFN-γ蛋白陽性率、IL-4蛋白陽性表達(dá)率與Hp感染無相關(guān)關(guān)系 （r=0.171、P=0.218，r=0.007、P=0.959）， 胃癌組SOX-2陽性表達(dá)率與Hp感染具有顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.682、P=0.000）；見表 3。

3 討論

Hp的感染能夠通過誘導(dǎo)胃黏膜上皮細(xì)胞的端粒酶的改變、誘導(dǎo)癌基因的突變，進(jìn)而促進(jìn)胃癌的發(fā)生。特別是在合并有相關(guān)家族史的患者中，胃癌的發(fā)生風(fēng)險或者遠(yuǎn)期病死率等指標(biāo)可進(jìn)一步的惡化[7]。現(xiàn)階段臨床上主要通過手術(shù)及放化療等綜合性措施治療胃癌，但其治療后的胃癌患者的無瘤生存時間或者無進(jìn)展生存期仍然無明顯的改善[8]；同時現(xiàn)階段臨床上缺乏對于胃癌早期診斷的血清學(xué)指標(biāo)，雖然CEA或者CA19-9能夠在胃癌的血清學(xué)診斷過程中發(fā)揮作用，但其診斷的靈敏度較低。而本次研究對于胃癌患者體內(nèi)IFN-γ、IL-4、SOX-2的表達(dá)研究，不僅能夠?yàn)槲赴┗颊叩纳飳W(xué)靶向治療提高治療靶點(diǎn)，同時還能夠?yàn)槲赴┗颊叩难鍖W(xué)篩查提供依據(jù)。

表2 三組標(biāo)本中的IFN-γ、IL-4、SOX-2蛋白陽性率比較[n（%）]

表3 胃癌組織中Hp表達(dá)與IFN-γ、IL-4、SOX-2蛋白陽性率的關(guān)系

IFN-γ作為th1淋巴細(xì)胞分泌的主要效應(yīng)因子，其能夠誘導(dǎo)上皮組織的炎癥性損傷，增加上皮細(xì)胞的惡性病變的風(fēng)險。過度上調(diào)的IFN-γ還能夠誘導(dǎo)氧化應(yīng)激性障礙，提高趨化因子對于胃黏膜上皮細(xì)胞的浸潤程度，促進(jìn)了癌細(xì)胞DNA的異常擴(kuò)增的可能[9]；IL-4作為th2淋巴細(xì)胞分泌的主要效應(yīng)因子，其能夠在穩(wěn)定T淋巴細(xì)胞免疫過程中發(fā)揮重要作用，IL-4能夠維持樹突狀細(xì)胞的抗原提呈功能，提高T淋巴細(xì)胞對于惡性腫瘤的免疫監(jiān)察功能[10]；SOX-2是轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)性因子，SOX-2在胃竇上皮組織中存在少量的表達(dá)。SOX-2的表達(dá)能夠抑制癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄活性，穩(wěn)定癌細(xì)胞的周期，抑制癌細(xì)胞快速跨越G0期的風(fēng)險[11]。

本次研究對于不同患者體內(nèi)的Hp感染情況進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)在胃炎組患者中，Hp感染的陽性率較高，這主要由于Hp感染能夠誘導(dǎo)較為顯著的胃黏膜上皮組織的炎癥性損傷，提高了上皮細(xì)胞的炎癥信號通路的激活程度。Hp雖然能夠參與到胃潰瘍或者胃癌的發(fā)生過程，但Hp在相關(guān)病變組織中表達(dá)陽性率較低，考慮可能與相關(guān)疾病并未處于疾病的進(jìn)展或者活動期有關(guān)。本次研究重點(diǎn)探討了IFN-γ、IL-4、SOX-2的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中，IFN-γ蛋白的表達(dá)陽性率明顯的上升，而IL-4、SOX-2表達(dá)陽性率明顯的下降，差異較為明顯，提示了 IFN-γ、IL-4、SOX-2的異常表達(dá)均能夠參與到胃癌的發(fā)生發(fā)展過程。通過匯集不同的相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為這主要由于 IFN-γ、IL-4、SOX-2 的下列幾個方面的作用有關(guān)[12，13]：⑴IFN-γ的上升能夠?qū)е鲁掷m(xù)性胃黏膜上皮細(xì)胞的損傷，提高了上皮細(xì)胞癌基因的轉(zhuǎn)錄速度；⑵IL-4的表達(dá)下降失去了其對于腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)察作用，導(dǎo)致自然殺傷性T淋巴細(xì)胞吞噬腫瘤細(xì)胞的能力不足；⑶SOX-2的表達(dá)下降影響到了癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程，導(dǎo)致癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄上游啟動子的明顯激活，提高了癌DNA的擴(kuò)增速度。Xu Y等[14]研究者也認(rèn)為，在胃癌患者中，IFN-γ的表達(dá)濃度可平均上升40%以上，特別是在合并有明顯的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者高腫瘤負(fù)荷表現(xiàn)的患者中，IFN-γ的表達(dá)上升更為明顯。相關(guān)關(guān)系分析研究可見，胃癌組SOX-2陽性表達(dá)率與Hp感染具有顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示了Hp感染能夠影響SOX-2的表達(dá)，這主要由于Hp感染能夠誘導(dǎo)線粒體轉(zhuǎn)錄基因的調(diào)控紊亂，影響到胃黏膜上皮細(xì)胞的癌基因的轉(zhuǎn)錄平衡，導(dǎo)致SOX-2轉(zhuǎn)錄和翻譯活性的下降[15]。但本次研究并未發(fā)現(xiàn)Hp感染與IFN-γ、IL-4的關(guān)系，提示Hp感染并不能影響到體內(nèi)的th1/th2淋巴細(xì)胞免疫平衡。

綜上所述，在胃癌患者中，IFN-γ的表達(dá)明顯的上升，而IL-4、SOX-2的表達(dá)明顯的下降，同時SOX-2表達(dá)與胃癌患者Hp感染具有一定的相關(guān)性。