過敏性哮喘患兒外周血Th17/Treg比值變化及其與呼吸功能、免疫球蛋白的相關(guān)性

高兵，李松，馬虹，吳薇，容志惠，李果

過敏性哮喘是一種慢性氣道炎性反應(yīng)，兒童是其高發(fā)人群，可引起反復(fù)發(fā)作的喘息、胸悶氣促、咳嗽等，干預(yù)不當(dāng)者可遷延至成年[1-2]。在早期確診疾病的同時應(yīng)積極判斷病情嚴(yán)重程度，以此制定針對性治療方案，但目前缺乏過敏性哮喘病情評估的簡便指標(biāo)。Th17/Treg免疫失衡參與多種炎性疾病的發(fā)生發(fā)展，已有研究明確Th17/Treg比值與變應(yīng)性鼻炎的病情密切相關(guān)[3]，鑒于變應(yīng)性鼻炎與過敏性哮喘的緊密聯(lián)系，推測Th17/Treg比值在過敏性哮喘病情評估中也具有一定作用。故檢測過敏性哮喘患兒外周血Th17/Treg比值，以判斷其與患兒病情的內(nèi)在聯(lián)系，旨在為該病病情評估提供高效、簡便的指標(biāo),報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年9月—2018年10月華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院兒科診治過敏性哮喘患兒300例作為哮喘組，同期在本院進(jìn)行體檢的健康小兒100例作為健康對照組。哮喘組：足月兒278例，早產(chǎn)兒22例；男161例，女139例，年齡3～11(7.39±1.85)歲；出生體質(zhì)量2.6～4.1(3.19±0.45)kg。對照組：足月兒93例，早產(chǎn)兒7例；男67例，女33例，年齡3～12(7.45±1.91)歲；出生體質(zhì)量2.5～4.3(3.22±0.51)kg。2組小兒的性別、年齡、足月/早產(chǎn)情況分布、出生體質(zhì)量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，受試兒童家屬同意并簽署知情同意書。

1.2 選擇標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組制定的《支氣管哮喘防治指南(支氣管哮喘的定義、診斷、治療及教育和管理方案)》[4]中對于小兒過敏性哮喘的定義：①反復(fù)發(fā)作的喘息、胸悶咳嗽等；②發(fā)作時聽診雙肺聞及以呼氣相為主的哮鳴音；③上述兩點(diǎn)癥狀經(jīng)治療后可緩解或者自行緩解；④不伴有其他疾病所致喘息、氣急；⑤臨床癥狀若不典型，伴支氣管激發(fā)試驗(yàn)、運(yùn)動試驗(yàn)陽性或支氣管舒張?jiān)囼?yàn)陽性或PEF日內(nèi)變異率或晝夜波動率≥20%。(2)首次確診并未經(jīng)相關(guān)治療。(3)年齡3～12歲兒童期。(4)可配合肺功能檢查及血液標(biāo)本獲取。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并先天性心臟病等嚴(yán)重先天性疾病；(2)合并肺炎等下呼吸道感染；(3)合并其他臟器活動性感染；(4)合并嚴(yán)重自身免疫性疾病。

1.3 觀察指標(biāo)與方法

1.3.1 外周血Th17/Treg比值測定：留取晨起空腹外周靜脈血(過敏性哮喘組患兒處于發(fā)作期)1.0～2.0 ml，采用美國BD FACSCanto Ⅱ流式細(xì)胞儀測定其中Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞的比例，計算Th17/Treg比值。

1.3.2 肺功能指標(biāo)測定：用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼氣容積占預(yù)計值百分比(FEV1%)、峰值呼氣流速(PEF)。讓小兒接上咬口并平靜呼吸，經(jīng)幾個呼吸周期后指導(dǎo)其將氣緩慢吐出(至無法再吐為止)，讓小兒用力快速吸足氣至肺總量位，其后以最大能力最快速度吐氣，最后深吸一口氣回到平靜呼吸。每個測試者檢測3次，取最好的一次結(jié)果進(jìn)行記錄。

1.3.3 免疫指標(biāo)測定：采血2 ml 離心取血清,采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清免疫球蛋白IgA、IgM、IgG、IgE的含量。

2 結(jié) 果

2.1 Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞比例及Th17/Treg比值比較 哮喘組患兒外周血中Th17細(xì)胞比例、Th17/Treg比值高于健康對照組，Treg細(xì)胞的比例低于健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，見表1。

表1 2組Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞比例及Th17/Treg比值比較

2.2 肺功能指標(biāo)比較 哮喘組患兒FVC、FEV1%、PEF水平均低于健康對照組小兒，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，見表2。

表2 2組肺功能參數(shù)水平的比較

2.3 免疫球蛋白含量比較 哮喘組患兒血清IgE含量高于健康對照組(P<0.01)。2組IgA、IgM、IgG含量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表3 2組免疫球蛋白含量比較

2.4 相關(guān)性分析 過敏性哮喘患兒外周血Th17/Treg比值與肺功能參數(shù)FVC、FEV1%、PEF水平呈負(fù)相關(guān)(r/P=-0.571/<0.05、-0.483/<0.05、-0.627/<0.05)，與IgE的含量呈正相關(guān)(r/P=0.602/<0.05)。

3 討 論

Th17細(xì)胞及Treg細(xì)胞在過敏性哮喘的發(fā)生發(fā)展過程中扮演重要角色，兩者來源于共同的初始T細(xì)胞，在不同環(huán)境影響下其分化出現(xiàn)偏移[5-7]。Th17細(xì)胞可分泌IL-17并發(fā)揮積極促炎作用，Treg細(xì)胞則具有免疫抑制作用[8-9]。胡影等[10]的研究指出兒童過敏性哮喘的發(fā)生與Th17/Treg比值異常相關(guān)。本研究中過敏性哮喘患兒外周血Th17/Treg比值較健康同齡小兒有大幅提升，說明在過敏性哮喘患兒中存在Th17/Treg免疫平衡向Th17偏移。

過敏性哮喘患兒發(fā)病時存在支氣管痙攣，可導(dǎo)致氣流受限，長此以往將出現(xiàn)氣道直徑永久性改變以及肺功能異常[11-12]。肺功能測試有助于確診支氣管哮喘，也是評估哮喘控制程度的依據(jù)之一，其主要指標(biāo)包括FVC、FEV1%、PEF[13-15]。本研究中過敏性哮喘患兒的FVC、FEV1%、PEF水平均明顯下降，說明其存在氣道痙攣、氣道直徑縮小、呼氣阻力增加等狀況。相關(guān)性分析指出，過敏性哮喘患兒外周血Th17/Treg比值與上述肺功能參數(shù)水平呈負(fù)相關(guān)，說明Th17/Treg比值可客觀反映過敏性哮喘患兒的肺功能損傷程度，間接反映該病病情嚴(yán)重程度。

免疫功能異常是過敏性哮喘發(fā)生的重要原因之一，其中代表體液免疫功能的免疫球蛋白含量的改變可客觀反映患兒免疫功能紊亂情況以及哮喘整體病情[16]。IgA、IgM、IgG是最常見的免疫球蛋白，在自身免疫性疾病患兒中其含量可發(fā)生顯著改變，而在過敏性哮喘患兒中基本處于正常水平[17]。IgE對嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞具有高度親和性，主要由呼吸道黏膜產(chǎn)生，生理狀態(tài)下在人體血液中含量極低，在過敏體質(zhì)或者過敏性疾病患者中其血清含量明顯上升并參與變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生[18-19]。有研究認(rèn)為過敏性哮喘是IgE介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，IgE診斷該病的靈敏度很高，IgE滴度極高者多處于哮喘急性期[20]。本研究中過敏性哮喘患兒血清中IgE的含量明顯高于健康小兒，而IgA、IgM、IgG的含量則與健康小兒無明顯差異，與既往研究結(jié)果吻合。相關(guān)性分析進(jìn)一步指出，過敏性哮喘患兒外周血Th17/Treg比值與IgE的含量呈正相關(guān)，說明Th17/Treg比值可反映過敏性哮喘患兒的變態(tài)反應(yīng)嚴(yán)重程度。

由此可見，過敏性哮喘患兒外周血Th17/Treg比值異常升高，且具體值與肺功能損傷程度、IgE含量均直接相關(guān)，可客觀反映患兒病情嚴(yán)重程度。

利益沖突：無

作者貢獻(xiàn)聲明

高兵:負(fù)責(zé)研究設(shè)計、論文撰寫;李松、馬虹:負(fù)責(zé)臨床指標(biāo)檢測；李果：分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，論文審核和修改;吳薇、容志惠：臨床信息采集，資料搜集整理，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析