一例豬流行性腹瀉的診斷

陳 靜 ，何廣霞，麻勝紅，路美蘭，曾智勇＊，梁海英，張愛瓊，何小莉，咸 文，陳 娟，吳好葉

（貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025）

豬流行性腹瀉（Porcine Epidemic Diarrhea，簡稱PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的，一種以患病豬食欲下降、嘔吐及嚴重腹瀉等為主要臨床特征的急性、接觸性腸道傳染性疾病[1]。該病在寒冷季節多發, 特別是冬春交替時節。PEDV屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，豬舍的環境溫度會對豬體內病毒的繁殖產生影響，在8～12℃比30～35℃的環境中所產生的毒力效價高, 這可能是本病在寒冷季節流行的一個重要因素[2]。PEDV僅發生于豬, 且不同年齡階段的豬只均易感本病。癥狀的輕重隨病豬年齡的大小而有差異, 年齡越小, 則其癥狀越重。感染發病的潛伏期各豬群不同，一般新生仔豬在24～36 h，育肥豬為48 h以上[3]。病豬是本病傳播的主要傳染源，主要感染途徑為消化道，臨床癥狀和病理變化與豬傳染性胃腸炎極為相似。仔豬感染PEDV后，病豬的體溫正常或稍偏高,精神不振,常出現脫水、嘔吐和水樣腹瀉，患病豬體重下降，皮膚因脫水而干燥，被毛粗亂無光澤，繼而發病豬食欲下降，嚴重脫水等臨床癥狀[4]。本病發病急且死亡率高，主要破壞豬小腸上皮細胞，從而引起腸絨毛脫落，感染病豬多以仔豬為主，極易造成新生仔豬迅速脫水死亡。該病毒于1980年在我國分離出，近來該病已演化為世界流行趨勢且已成為全球性危害。目前，PED已經成為導致世界多個養豬國家仔豬早期死亡的疫病之一,對世界養豬產業造成較大的經濟損失[5]。

2018年1月，銅仁萬山某豬場部分仔豬出現嘔吐、消瘦及腹瀉等臨床癥狀，其中仔豬出現腹瀉的癥狀尤為嚴重，最終病仔豬脫水死亡。這給豬場帶來了嚴重的經濟損失，為查明仔豬腹瀉死亡原因，該豬場特將5頭病死仔豬、3份母豬糞樣和1份發病仔豬腸內容物進行實驗室送檢。現將檢測過程報告如下：

1 臨床及發病特征

據現場人員描述，該豬場患病仔豬被毛凌亂，精神狀態不佳, 進食量顯著降低。體溫較為正常、有時稍高。同時出現嘔吐、水樣腹瀉或是嘔吐與腹瀉并存等臨床癥狀，排泄淡黃色惡臭稀糞。病豬發病急、病程短，部分新生仔豬在出生3 d左右因腹瀉脫水而死亡。

2 病理解剖特征

對送檢病死仔豬進行剖檢（見圖1），可見病豬胃內空虛無食物，內有黃色液體，胃底黏膜有輕度充血。剖檢病豬的主要病變位置在小腸，腸擴張，小腸腸系膜充血。內容物稀薄如水，呈黃色且伴有泡沫。腸壁充血變薄，腸系膜充血且淋巴結出現水腫現象，小腸絨毛縮短。

3 實驗室檢測

取適量的脾、腎、淋巴結等組織進行混合；取送檢病死豬腸內容物與送檢3份仔豬腸內容物混合；取3份母豬糞樣混合，使用MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0核酸提取試劑盒，分別提取混合組織/腸內容物核酸/糞樣的RNA/DNA，應用一步法RT-PCR/PCR試劑盒，根據相關送檢要求對混合組織核酸進行豬藍耳病病毒（PRRSV）、豬瘟病毒（CSFV）和豬偽狂犬病毒（PRV）檢測；對仔豬混合腸內容物和母豬糞樣進行豬流行性腹瀉病毒（PEDV）檢測。其中PEDV反應總體系（25.0 μL）：2×One step buffer 12.5 μL，10 μM PCV3 primer（F1/R1）各0.5 μL，核酸DNA模板4.5 μL，ddH2O 6.0 μL，一步法酶1.0 μL。PCR反應程序為：50 ℃ 40 min；94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共37個循環；72 ℃ 進行終延伸10 min。

RT-PCR/PCR 結束后，取 7 μL的PCR產物進行瓊脂糖凝膠（1.5%）電泳檢測，結果顯示，病死仔豬混合組織中CSFV、PRRSV和PRV均呈陰性；混合糞樣和腸內容物中PEDV均呈陽性（見圖2）。

4 討論

根據病原檢測結果表明，送檢病死仔豬及母豬糞樣中均存在PEDV，說明該豬場中母豬和仔豬均有感染PEDV的情況。PED是豬養殖過程中十分常見的病毒性疾病之一，可引起豬的急性傳染性腸道疾病，常發生于幼齡仔豬，病仔豬出現精神萎靡、食欲減退等現象，長期持續性腹瀉表現為明顯消瘦、被毛粗亂，嚴重腹瀉仔豬排水樣稀糞，常因脫水而死。該病季節性非常強，春冬多發，不同種類及不同日齡的豬均可感染，死亡率可高達100%[6]。對于該病，應當及時采取有效地防治措施。

4.1 遵循預防為主，防大于治的原則

圖1 病死仔豬內臟

圖2 病原RT-PCR/PCR產物凝膠電泳檢測結果

對于PED，目前沒有針對該病的特效治療藥物，故豬場應以預防為主。種豬帶毒散毒是引起新生仔豬感染的主要途徑。首先，發生疫情時, 疫苗免疫是預防豬傳染病的有效方式，制定合理的疫苗免疫方案進行疫苗免疫接種，重點加強母豬的PED疫苗免疫。對全場生豬進行緊急免疫，可有效降低豬群發病率和病死率，這也是亞洲國家PED防疫控制的主要方式之一[7]。其次，加強場地和環境消毒。在冬、春多發季節，應保證豬舍干燥、整潔，做到保暖防寒，同時做好母豬進入產房前的糞便排毒情況檢測以及進入產房時針對母豬的清潔消毒，采取綜合性防治措施，重視免疫預防，加強對豬只的飼養管理[8]。

4.2 患病后及時采取治療措施

若PED在豬場已發生，則建議豬場飼養管理人員立即停止飼喂飼料，液體類飼料可能會加劇生豬的腹瀉，因此尤其注意液體類飼料的飼喂；針對已感染的病豬要及時為其提供干凈的飲水和易消化的飼料，盡可能的控制對病豬飼料的投喂量，及時對健康豬與病豬進行隔離；對病死豬、糞尿排泄物及污染物做無害化處理，可有效控制本病的傳播。可采取對癥治療措施：病初，可對患病仔豬采用口服補液鹽，以糾正病仔豬體內的酸堿平衡。必要時可適當添加土霉素堿或諾氟沙星或阿莫西林進行灌服，每天4～5次；肥豬群和母豬可采用青鏈霉素加安痛定肌注，脫水嚴重的掛水補液；對于公、母豬可緊急免疫2頭份瑞普生物“維樂復康”[9]；在調理腸道菌群的同時，保持欄舍干燥，全進全出，做好消毒工作。