黃連等6味中草藥對(duì)耐藥性鮑曼不動(dòng)桿菌的抑菌作用研究

楊娟

【摘要】 目的 研究黃連等6味中草藥對(duì)耐藥性鮑曼不動(dòng)桿菌的抑菌作用。方法 選擇黃連、黃芩、黃柏、千里光、白頭翁和金銀花， 通過(guò)水煎法和醇提法對(duì)有效成分進(jìn)行提取， 之后采用K-B法進(jìn)行上述6味中草藥提取物的測(cè)定， 比較三種不同濃度的菌液在不同提取方法下的6味中草藥的抑菌直徑。結(jié)果 當(dāng)菌液濃度達(dá)到1.0g/L的時(shí)候， 6味中草藥均存在有一定的抑菌作用。與菌液濃度為1.00 g/L時(shí)， 當(dāng)菌液濃度為0.25、0.50 g/L時(shí)， 6味中藥物的抑菌直徑較大， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;黃連、黃芩的抑菌直徑均大于其余4味中草藥， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 黃連等6味中草藥對(duì)于耐藥性鮑曼不動(dòng)桿菌均有不同程度的抑菌作用， 而菌液濃度升高其抑菌作用會(huì)存在不同程度的降低， 黃連和黃芩通過(guò)水煎法和醇提法提取的有效成分對(duì)耐藥性不動(dòng)桿菌的抑菌作用最強(qiáng)。

【關(guān)鍵詞】 黃連;中草藥;耐藥性鮑曼不動(dòng)桿菌

鮑曼不動(dòng)桿菌是一種較為嚴(yán)重的獲得性耐藥性的條件致病菌， 均會(huì)在各個(gè)自然角落存在， 這種病菌容易導(dǎo)致患者出現(xiàn)感染， 在現(xiàn)如今是引起院內(nèi)感染的主要病菌。近年來(lái)， 抗生素的濫用導(dǎo)致患者出現(xiàn)耐藥不動(dòng)桿菌率逐年提高， 所以臨床上有存在多重耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌， 甚至?xí)嬖谕耆退幍孽U曼不動(dòng)桿菌， 給臨床的干預(yù)工作帶來(lái)較大的影響， 加重患者的病情和炎癥反應(yīng)[1]。在這種背景下， 為防止患者的病毒耐藥性加重， 為臨床工作提供有效的治療， 已開(kāi)始成為一個(gè)重要的課題。本文從中藥角度分析黃連、黃芩、黃柏、千里光、白頭翁和金銀花6味中草藥通過(guò)不同方法進(jìn)行提取所得的提取物對(duì)于耐藥性鮑曼不動(dòng)桿菌的抑菌作用進(jìn)行分析， 并將研究情況報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 本研究的鮑曼不動(dòng)桿菌菌株種本院檢驗(yàn)科通過(guò)細(xì)菌分離式進(jìn)行分離、鑒定和保存的菌種。而黃連、黃芩、黃柏、千里光、白頭翁和金銀花6味中草藥均為本院的藥房提供。其余材料包括M-H培養(yǎng)基、生物安全柜、培養(yǎng)皿、酒精燈、試管、鑷子、無(wú)菌紗布、燒杯、無(wú)菌棉簽、濾紙和卡尺等。

1. 2 方法

1. 2. 1 中藥藥液提取 分別采用水煎方法和醇提方法提取中藥藥液。采用水煎方法對(duì)藥液進(jìn)行提取時(shí)， 選擇黃連30 g首先進(jìn)行研磨處理， 并且加入到300 ml蒸餾水中浸泡大約1 h， 再選擇文火煎煮2 h， 對(duì)枝葉進(jìn)行收取。選擇無(wú)菌紗布進(jìn)行過(guò)濾， 再加入水300 ml， 進(jìn)行加熱， 直到水分收縮到30 ml為止， 進(jìn)行裝瓶加蓋， 采用高壓滅菌0.5 h后取出備用。選擇同樣的方法對(duì)其余的5味藥材進(jìn)行水煎提取。

采用醇提方法進(jìn)行提取時(shí)， 對(duì)黃連等6味中草藥需要先進(jìn)行干燥， 之后再次進(jìn)行研磨。通過(guò)75%的酒精6倍回流處理， 然后進(jìn)行2次的提取， 將酒精的濃度進(jìn)行減壓， 并且縮成1∶1的藥液。

1. 2. 2 藥敏紙制作 應(yīng)用打孔器對(duì)定性濾紙進(jìn)行打孔， 保證濾紙形成直徑為6 mm的圓形小紙片， 通過(guò)30 min的高壓滅菌處理后， 將小紙片放入烘烤箱中進(jìn)行烘干處理， 當(dāng)完全干燥后， 則制備的濾紙片浸泡在中草藥中進(jìn)行相關(guān)處置， 使濾紙片完全吸收藥液以后， 再次進(jìn)行烘干， 將兩種提取液的濾紙片均進(jìn)行無(wú)菌保存。

1. 2. 3 菌液制作 需要將相關(guān)菌株接種在瓊脂平板上， 然后將其放在37℃的溫度下進(jìn)行24 h的孕育， 對(duì)單個(gè)菌落需要接種在培養(yǎng)基里， 同時(shí)在37℃的溫度下， 進(jìn)行24 h的培 養(yǎng)， 分別接種無(wú)菌生理鹽水， 試管中將濃度校正為0.25、0.50、1.00 g/L三檔備用。

1. 2. 4 體外抑菌試驗(yàn) 采用K-B法進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)。根據(jù)M-H瓊脂粉38 g配備1000 ml蒸餾水， 制成瓊脂培養(yǎng)基， 并且將其放在三角燒瓶中進(jìn)行高壓滅菌， 每個(gè)平板大約25 ml 分配。之后通過(guò)對(duì)無(wú)菌棉拭子的應(yīng)用， 對(duì)相關(guān)菌液進(jìn)行選擇， 試管內(nèi)壁通過(guò)無(wú)菌棉拭子旋轉(zhuǎn)， 將多余菌液擠出， 在瓊脂平板表面均勻進(jìn)行反復(fù)3次的涂抹進(jìn)行接種處理， 然后旋轉(zhuǎn)平板60°/次， 沿著平板內(nèi)壁， 再均勻地進(jìn)行1周的涂抹， 對(duì) 3種梯度， 分別需要制作相關(guān)的平板。并且保證在室溫環(huán)境下進(jìn)行5 min的干燥， 放置在酒精燈前或者生物安全柜中， 通過(guò)無(wú)菌鑷子將制好的藥敏紙片貼在平板的瓊脂表面進(jìn)行壓實(shí)， 在培養(yǎng)箱37℃的溫度中進(jìn)行撫育， 時(shí)間大約為24 h， 對(duì)于抑菌直徑進(jìn)行測(cè)量和記錄。為確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性， 進(jìn)行3次抑菌試驗(yàn)， 取平均值作為最終結(jié)果[2]。

1. 3 觀察指標(biāo) 對(duì)三種不同濃度的菌液在不同提取方法下的6味中草藥的抑菌直徑進(jìn)行比較。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

對(duì)于水煎方法所提取的藥液， 黃連、黃芩、黃柏、千里光、白頭翁和金銀花等中草藥在0.25、0.50、1.00 g/L濃度下的抑菌直徑分別為（13.41±4.20）、（13.32±5.03）、（11.66± 5.02）mm， （11.42±2.83）、（10.41±4.67）、（9.07±6.01）mm， （7.01±1.84）、（6.80±1.04）、（6.85±1.75）mm， （7.41±3.08）、（8.25±3.12）、（6.91±1.68）mm， （9.41±3.41）、（9.32±3.67）、（8.82±3.27）mm， （7.91±2.18）、（7.82±2.85）、（6.91±1.43）mm; 對(duì)于醇提方法所提取的藥液， 黃連、黃芩、黃柏、千里光、白頭翁和金銀花等中草藥在0.25、0.50、1.00 g/L的濃度下抑菌直徑分別為（13.51±4.37）、（13.40±4.93）、（11.74± 4.98）mm， （11.42±2.83）、（10.91±3.67）、（9.17±6.02）mm， （7.07±1.82）、（6.82±1.02）、（6.82±1.74）mm， （7.91±2.10）、（8.32±3.15）、（7.01±1.66）mm， （9.51±3.08）、（9.42±3.59）、（8.81±3.25）mm， （8.01±2.21）、（7.91±2.80）、（7.07±1.37）mm。