提高肉羊同期發情及胚胎移植效果的技術研究

劉學峰 朱貴 李信濤 佟桂芝 李魯蒙 海龍 王偉霞 郭立宏

摘要：針對我國肉羊良種化和繁殖技術水平低的現狀，采用現代繁殖生物技術是提高優質肉用種羊利用率、縮短生產周期、加速良種肉羊擴繁、促進肉羊產業化發展的必經之路。把肉羊胚胎移植過程中的同期發情、超數排卵、腹腔鏡輸精等關鍵技術進行了創新，并與傳統方法效果進行了對比分析，提高了良種供體母羊的利用率，降低了胚胎移植技術的成本，突破了肉羊胚胎移植成功率低的技術瓶頸，促進了肉羊胚胎移植產業化。

關鍵詞：肉羊;同期發情;超數排卵;腹腔鏡輸精

中圖分類號：S826.3 ? ? 文獻標識碼：A

文章編號：2095-9737（2019）04-0006-02

近年來，由于炒種熱的降溫和胚胎移植技術水平的提高，肉羊胚胎移植收費標準趨于理性化，胚胎移植技術正在向產業化挺進。過去每獲得1只胚胎移植斷奶羔羊大致需支出人民幣4000元左右，而現在只需1000元左右，同市場上純種肉羊每只5000～8000元價格比，有很大的經濟優勢。再加上一只供體母羊一次超排可獲5只羔羊，一個繁殖季節超排4次以上，可獲羔羊20只以上，是肉用種羊原種迅速擴繁的最有效途徑。特別是冷凍胚胎移植，解決了鮮胚移植半徑小和保存時間短的難題。通過胚胎移植集成技術，即為良種擴繁與新品種（品系）選育奠定了基礎，企業也收到了很好的經濟效益，同時也創造了極大的社會效益。因此，肉羊胚胎移植應用于生產，在我國進行產業化發展前景廣闊。

1 材料

1.1 供體羊

選取2～3歲繁殖性能正常的經產純種杜泊羊母羊作為供體羊，統一飼養管理，

1.2 藥品

注射用血促性素（孕馬血清，PMSG）購自寧波第二激素廠;氯前列烯醇購自上海市計劃生育科學研究所;陰道海綿栓、胚胎保存液、O-FSH 超數排卵藥、沖胚液全部為新西蘭進口。

1.3 器械

主要器械有外科手術器械、手術保定架、體視顯微鏡、腹腔鏡、沖卵管、檢卵針、移植管等。

2 方法

2.1 誘導同期發情技術

在非繁殖季節內母羊處于乏情期，不表現明顯的發情癥狀，受體母羊同期發情效果差， 直接影響胚胎移植效果。采用預飼養技術+VE+CIDR（陰道激素緩釋裝置）+PMSG（孕馬血清）法，對乏情期受體母羊進行誘導同期發情。

2.2 超數排卵技術

根據不同季節、日照時間和供體母羊營養狀況，對不同品種供體母羊采用預飼養技術+VE+CIDR+ FSH（垂體促卵泡素）+LH（垂體促黃體生成素）法，采用FSH四天遞減注射超排方案，供體母羊排卵數、回收胚胎數和可用胚胎數（10.4±2.1）均高于常規的三天等量注射法可用胚胎數（4.0±5.2），超排效果顯著。

2.3 供體羊腹腔鏡輸精

取栓的第2天對供體羊進行試情， 對發情母羊于發情當天分別進行子宮頸輸精及腹腔鏡輸精。

2.4 沖胚

以開始配種日為第0天，于配種后的第6天或第7天通過手術法子宮角沖出胚胎。沖胚液和短期保存液均為加拿大進口產品，手術前置于38℃的水浴中預熱。在一側子宮角基部用鈍鉗刺透子宮壁，然后將8#～10#沖卵管從此孔導入子宮角大彎處，給沖卵管氣囊充氣（充氣量2～5 mL），拔出沖卵管內芯，用20 mL 注射器與針頭連接，并由此向子宮腔內注入沖卵液。注入沖卵液的方法為：先注入沖卵液20～25 mL，對超排反應好的供體可再重復沖一次，然后注入空氣5～10 mL，此方法可保證胚胎的有效回收。用Φ9 cm培養皿接收沖卵液。最后用手指輕輕壓擠子宮角，讓沖卵液盡量回收完全，然后氣囊放氣，用同樣的方法沖另一側子宮角。每側子宮角約需40 mL沖卵液。

沖胚完畢后，用25～30℃的生理鹽水將子宮及卵巢沖洗干凈，然后送回腹腔，將子宮復位，并向腹腔倒入250 mL消毒液。分別對腹膜、肌肉和皮膚進行縫合。供體母羊創口采用兩層縫合法。即腹膜與肌肉進行縫合，皮膚進行結節縫合。針腳間距1 cm。在肌肉與皮膚間撒適量青霉素粉，以防創口感染。術后注射青霉素80萬IU，鏈霉素100萬IU。腹腔鏡微創術回收肉羊體內胚胎技術利用腹腔鏡對肉羊供體母羊實施微創手術，借助自制的沖胚針和回卵管，對供體母羊進行非開放性腹腔內沖胚，從而有效回收肉羊體內胚胎技術。腹腔鏡微創術回收肉羊體內胚胎技術利用腹腔鏡對肉羊供體母羊實施微創手術，借助自制的沖胚針和回卵管，對供體母羊進行非開放性腹腔內沖胚，從而有效回收肉羊體內胚胎技術。

2.5 數據分析

試驗數據采用 SPSS 19.0 統計軟件進行統計分析和顯著性檢驗。

3 結果與分析

3.1 誘導同期發情技術

小尾寒羊非繁殖季節采用生殖激素進行誘導肉羊發情，在不同季節母羊發情率（97.0%、77.5%、87.5%）之間及受胎率（97.44%、87.10%、91.43%）之間存在顯著差異（P<0.05），秋季效果最好，春季次之，夏季最次（詳見表1）。

3.2 不同超排方案的效果對比

采用FSH四天遞減注射超排方案，供體母羊排卵數、回收胚胎數和可用胚胎數（10.4±2.1）均顯著高于常規的三天等量注射法可用胚胎數（4.0±5.2），超排效果顯著（P<0.05），見表3。

4 討論與結論

4.1 誘導同期發情、兩年三產高頻繁殖技術

通過誘導同期發情技術、胚胎移植及羔羊早期斷奶技術，實現一年兩產或兩年三產，一年兩產可使母羊的繁殖率提高90%～100%，生產效益提高40%～50%，其核心是母羊發情調控、胚胎移植、羔羊早期斷奶和早期妊娠檢查。兩年三產體系，比一年兩產體系增加40%，其核心是母羊的多胎處理、發情調控和羔羊早期斷奶，強化育肥。小尾寒羊非繁殖季節采用生殖激素進行誘導肉羊發情，在不同季節母羊發情率（97.0%、77.5%、87.5%）之間及受胎率（97.44%、87.10%、91.43%）之間存在顯著差異（P<0.05），秋季效果最好，春季次之，夏季最次。

在非繁殖季節內母羊處于乏情期，不表現明顯的發情癥狀，受體母羊同期發情效果差，直接影響胚胎移植效果。采用預飼養技術+VE+CIDR+PMSG法，對乏情期受體母羊進行誘導同期發情。

4.2 利用腹腔鏡定時輸精技術

采用在肉羊供體母羊撤栓后48 h，利用腹腔鏡子宮內一次定時輸精法，不僅提高了胚胎受精率、而且降低了胚胎的退化率。對于超排肉羊來說，明顯好于常規子宮頸口人工授精和自然交配效果;在超排肉羊中自然交配或子宮頸輸精時肉羊子宮頸的卷繞結構使精液很難精確到位，常出現不受精的現象。另外，同期發情和超數排卵處理本身對精子通過宮頸運輸也有一定干擾作用，這對受精率和可移植胚胎的數量有一定影響。項目組改變了傳統的子宮頸口輸精方法，采用腹腔內窺鏡輸精技術，將精液直接輸到兩側子宮角前端，突破了超排羊人工授精胚胎受精率低和優質胚胎率低的技術難題。

4.3 超數排卵技術

根據不同季節、日照時間和供體母羊營養狀況，對不同品種供體母羊采用預飼養技術+VE+CIDR+ FSH+ LH，采用FSH四天遞減注射超排方案，供體母羊排卵數、回收胚胎數和可用胚胎數（10.4±2.1）均高于常規的三天等量注射法可用胚胎數（4.0±5.2），超排效果顯著。重復超排將比一次超排獲得胚胎更多，根據不同供體母羊上一次超排效果，調整超排方法，制定個體羊超排方案，可以獲得供體羊最好的超排效果。