CD10和CD34免疫組化染色在增生性腎小球腎炎病理診斷中的輔助作用

吳春華

腎小球腎炎簡稱為腎炎，是一組病因各不相同的病變范圍累及腎小球的綜合征。腎小球腎炎是臨床常見的腎臟疾病之一，也是導(dǎo)致終末期腎病的重要病因之一。有資料顯示，美國的終末期腎病患者中，腎小球腎炎者占51.0%，而我國這一比例更高，占54.4%[1]。臨床上，腎小球腎炎分類較多，其中增生性腎小球腎炎是其一大分類，主要包括系膜增生性腎小球腎炎、急性彌漫性增生性腎小球腎炎(又稱為毛細(xì)血管內(nèi)增生性腎小球腎炎)、膜增生性腎小球腎炎(又稱為系膜毛細(xì)血管性腎小球腎炎)和急進(jìn)性腎小球腎炎(又稱為新月體性腎小球腎炎)[2]。長期以來，光鏡下病理檢查是鑒別增生性腎小球腎炎亞型的主要手段，然而在腎小球基膜輪廓不佳時(shí)診斷難度較大。近年來，隨著免疫組化技術(shù)的發(fā)展，臨床上逐漸將免疫組化技術(shù)應(yīng)用于病理檢查，以便進(jìn)一步提高準(zhǔn)確率。因此，本研究旨在探討CD10和CD34免疫組化染色在增生性腎小球腎炎病理診斷中的輔助作用?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 對象和方法

1.1 對象 回顧性選擇2015—2018年我院收治的增生性腎小球腎炎患者147例，診斷參照《病理學(xué)》相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[3]。其中，男79例、女68例；年齡27～49歲，平均(36.4±8.1)歲；包括系膜增生性腎小球腎炎41例、急性彌漫性增生性腎小球腎炎30例、膜增生性腎小球腎炎39例和急進(jìn)性腎小球腎炎37例。

1.2 方法

1.2.1 制片方法 將腎組織制作成厚度約2 μm的切片，平整貼于親水性防脫落載玻片；之后進(jìn)行烘干，烘干溫度65 ℃，烘干時(shí)間2 h。

1.2.2 染色方法 本研究免疫組化染色均在中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一院病理科完成。首先進(jìn)行抗原修復(fù)，修復(fù)溫度99 ℃、修復(fù)時(shí)間30 min；然后以CD10和CD34雙抗體(抗體均為羅氏公式產(chǎn)品)進(jìn)行免疫組化染色，染色溫度37 ℃、孵育時(shí)間15 min。

1.2.3 觀察方法 腎小囊臟層和壁層上皮細(xì)胞可被CD10染色，呈紅色；腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞可被CD34染色，呈棕色；腎小球系膜細(xì)胞和基質(zhì)無法被CD10和CD34染色，呈無色[4]。

2 結(jié)果

2.1 光鏡描述 系膜增生性腎小球腎炎：腎小球系膜細(xì)胞和基質(zhì)彌漫性增生；腎小囊臟層細(xì)胞明顯增生，腎小球毛細(xì)血管管腔受壓。急性彌漫性增生性腎小球腎炎：腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和系膜增生，腎小球毛細(xì)血管管腔受壓。膜增生性腎小球腎炎：腎小球系膜細(xì)胞和基質(zhì)明顯增生，系膜基質(zhì)插入毛細(xì)血管基質(zhì)內(nèi)；腎小囊臟層上皮細(xì)胞明顯增生，腎小球毛細(xì)血管管腔受壓。急進(jìn)性腎小球腎炎：腎小囊壁層上皮細(xì)胞增生，新月體形成；腎小球系膜和毛細(xì)血管管腔均受壓。

2.2 免疫組化 在伊紅-蘇木素染色(HE染色)基礎(chǔ)上，全部147例增生性腎小球腎炎腎小囊臟層及壁層細(xì)胞經(jīng)CD10染色后呈紅色(+～+++)；腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞被CD34染色后呈棕色(+～+++)；而系膜細(xì)胞和基質(zhì)未被CD10和CD34染色，呈無色(-)。各腎小球組成成分CD10和CD34染色情況見表1。

3 討論

腎小球腎炎是多因素導(dǎo)致的以腎小球固有細(xì)胞增殖，伴或不伴炎性細(xì)胞浸潤為特征的一類疾病。目前，腎小球腎炎的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，主要觀點(diǎn)認(rèn)為其發(fā)病與循環(huán)免疫復(fù)合物沉積、原位免疫復(fù)合物形成和腎小球固有成分作為抗原等有關(guān)[5]。從病理學(xué)上來說，原發(fā)性腎小球腎炎可分為急性彌漫性增生性腎小球腎炎、急進(jìn)型腎小球腎炎、膜性腎小球病、微小病變性腎小球病、局灶性節(jié)段性腎小球硬化、膜增生性腎小球腎炎、系膜增生性腎小球腎炎、IgA腎病和慢性腎小球腎炎等，其中。急性彌漫性增生性腎小球腎炎、急進(jìn)性腎小球腎炎、膜增生性腎小球腎炎和系膜增生性腎小球腎炎均屬于增生性腎小球腎炎。

臨床上，鑒別腎小球疾病主要的病理學(xué)方法包括HE染色、過碘酸-雪夫染色(PAS染色)、過碘酸-銀-烏洛托品染色(PASM染色)和馬松染色(MASSOM染色)。HE染色可直接觀察切片組織細(xì)胞成分的種類和數(shù)量，然而在區(qū)分腎小球毛細(xì)血管細(xì)胞、系膜細(xì)胞和腎小囊臟層、壁層細(xì)胞上存在難度。PAS染色可清晰顯示基膜和系膜基質(zhì)成分，對基膜輪廓判斷較清晰；PASM染色與PAS相比更為清晰；MASSOM染色除基膜外，還可進(jìn)一步區(qū)分膠原、免疫復(fù)合物和纖維蛋白等成分，然而上述三種方法卻不能顯示腎小球細(xì)胞，這無疑給病理診斷帶來不便[6]。因此，近年來病理診斷中逐步引入免疫組化技術(shù)進(jìn)行補(bǔ)充。免疫組化技術(shù)是利用免疫學(xué)基本原理，在抗原-抗體特異性結(jié)合的基礎(chǔ)上，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色，來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原，根據(jù)不同目的可進(jìn)行定位、定量、定性分析[7]。

表1 不同類型增生性腎小球腎炎CD10和CD34染色情況

本研究中，我們采用CD10和CD34抗體免疫組化染色，進(jìn)行增生性腎小球腎炎的病理分類診斷。從染色過程來說，CD10可將腎小囊臟層和壁層上皮細(xì)胞染成紅色，CD34可將腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞染成棕色；而二者卻無法對腎小球系膜細(xì)胞和基質(zhì)進(jìn)行染色。從病例特征來看，系膜增生性腎小球腎炎為彌漫性系膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多；急性彌漫性增生性腎小球腎炎為彌漫性毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和系膜增生，伴有中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤。膜增生性腎小球腎炎為腎小球基膜增厚，腎小球細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多。急進(jìn)性腎小球腎炎為腎小球壁層上皮細(xì)胞增生，新月體形成。病理基礎(chǔ)不同正是利用上述兩種CD分子輔助診斷的理論依據(jù)。結(jié)果顯示，系膜增生性腎小球腎炎腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮CD34(+)、腎小囊臟層上皮CD10(+++)、腎小囊壁層上皮CD10(+)；急性彌漫性增生性腎小球腎炎對應(yīng)CD34(+++)、CD10(+++)、CD10(+++)；膜增生性腎小球腎炎對應(yīng)CD34(+)、CD10(+++)、CD10(+)；急進(jìn)性腎小球腎炎對應(yīng)CD34(+)、CD10(++)、CD10(+++)。這里需要注意的是，系膜增生性腎小球腎炎和膜增生性腎小球腎炎CD10和CD34抗體免疫組化結(jié)果相同；而二者卻在常規(guī)病理檢查中存在區(qū)別，即后者系膜基質(zhì)插入毛細(xì)血管基質(zhì)內(nèi)可作為鑒別點(diǎn)。這也充分說明免疫組化可以輔助病理診斷，但是需要與傳統(tǒng)的病理診斷方法相結(jié)合才能提高診斷效率。

綜上所述，在常規(guī)病理檢查下，結(jié)合CD10和CD34雙抗體免疫組化染色，能夠更準(zhǔn)確地對增生性腎小球腎炎做出進(jìn)一步細(xì)分。