CYP1B1基因多態性與紫杉醇不良反應的相關性研究

許秋霞　葉磊　周細萍　陳文發　陳金成　高雅莉

[摘要] 目的 探討腫瘤患者CYP1B1基因多態性與紫杉醇不良反應的關系。 方法 選擇我院2016年1月～2018年5月接受紫杉醇化療的腫瘤患者52例作為研究對象，檢測其CYP1B1基因型，并觀察、收集、記錄其不良反應發生情況，分析患者的不良反應發生和基因多態性的相關性。 結果 本研究共檢測了27個基因位點，僅11個基因位點發生突變，其余16個基因位點均為野生型。其中，在CYP1B1*2/*5/*6/*7（142 C>G）和CYP1B1*2/*6/*7（355 G>T）基因多態性中，野生型基因患者的白細胞減少不良反應發生率高于突變型基因，差異有統計學意義（P<0.05）;其余不良反應發生率比較，差異無統計學意義（P>0.05）。 結論 CYP1B1基因多態性與紫杉醇的不良反應具有一定的相關性。

[關鍵詞] 紫杉醇;基因多態性;CYP1B1;不良反應

[中圖分類號] R969? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2019）15-0039-04

Study on the correlation between CYP1B1 gene polymorphism and adverse reactions of paclitaxel

XU Qiuxia1? ?YE Lei2? ?ZHOU Xiping3? ?CHEN Wenfa1? ?CHEN Jincheng1? ?GAO Yali1

1.Department of Pharmacy， the Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University， Quanzhou 362000， China; 2.Department of TCM， the Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University， Quanzhou 362000， China; 3.Department of Pharmacy， Hospital of Quanzhou Taiwanese Investment Zone， Quanzhou? ?362700， China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between CYP1B1 gene polymorphism and adverse reactions of paclitaxel. Methods A total of 52 patients with tumor who were given chemotherapy with paclitaxel from January 2016 to May 2018 were selected as the study subjects. The CYP1B1 gene type was detected， and adverse reactions were observed， collected and recorded. The correlation between gene polymorphism and adverse reactions was analyzed. Results A total of 27 gene sites were detected in the study. Only 11 gene sites were mutated， and the other 16 gene sites were wild type. Among the gene polymorphism of CYP1B1*2/*5/*6/*7 （142 C>G） and CYP1B1*2/*6/*7（355 G>T）， the incidence rate of adverse reaction of leukopenia in the patients with wild type gene was higher than that in the patients with mutated gene， and the difference was statistically significant（P<0.05）; the differences in the incidence rates of other adverse reactions were not statistically significant（P>0.05）. Conclusion There is a certain correlation between CYP1B1 gene polymorphism and adverse reactions of paclitaxel.

[Key words] Paclitaxel; Gene polymorphism; CYP1B1; Adverse reactions

隨著個體化治療學理念的不斷完善，個體藥物基因多態性與不良反應相關性的研究越來越受重視，許多成果被應用于臨床上，以指導臨床合理規范用藥。細胞色素酶P450 1B1（cytochrome P450 1B1，CYP1B1）為細胞色素酶P450超家族成員之一，是一種血紅素-硫醇鹽單加氧酶，主要催化17-β-雌二醇（E2）的羥化作用，參與多種惡性腫瘤的發病過程[1]。CYP1B1基因多態性的改變可能影響癌癥的易感和預后，有研究發現CYP1B1基因多態性與紫杉醇的代謝有一定的關系[2]。在臨床中，紫杉醇是治療癌癥的基本藥物，與其他抗腫瘤藥物相似，具有治療窗窄、毒副作用大的特點。紫杉醇引起的不良反應主要表現為過敏反應、骨髓抑制、神經毒性、消化系統反應、肌肉或關節疼痛反應、心臟毒性、脫發、皮膚毒性反應、液體潴留和血管性水腫等[3]，由于紫杉醇不良反應個體差異的存在，在一定程度上限制了其應用[4]。有文獻認為，紫杉醇發生的不良反應與藥物代謝酶與轉運酶的基因多態性相關[5]。因此，為了減少紫杉醇不良反應的發生，提高其療效，開展紫杉醇藥物基因組學及其應用是有必要的。本文主要研究腫瘤患者CYP1B1基因多態性對紫杉醇不良反應的影響，為臨床合理使用紫杉醇提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年1月～2018年5月我院腫瘤患者52例，其中乳腺癌17例、卵巢癌11例，食管癌11例、胃癌8例、肺癌5例，平均年齡56歲，男19例，女33例，其診斷均經組織病理或細胞學證實。血常規、肝腎功能在正常范圍內，心電圖及心功能正常，預計生存期>12周。

1.2 儀器與試劑

LongGene梯度PCR儀，GIS-1600凝膠成像系統（上海天能科技有限公司），WFH-201-B紫外透射反射儀（上海精科實業有限公司），DYY-6C恒流電泳儀（北京市六一儀器廠），DYY-Ⅲ288型板式水平電泳槽（北京市六一儀器廠），ABI3730型DNA測序儀（美國ABI公司），血液基因組DNA提取試劑盒（北京天根生化有限公司），EXTaq MIX（日本TaKaRa公司），PCR引物序列（上海邁浦生物科技有限公司），Hi-Di Formamide（美國ABI公司），瓊脂糖、硼酸、溴化乙錠（上海生工生物），DNA ladder marker：DL 2000、DL 2000 plus（上海生工生物），紫杉醇注射液（Hospira Australia Pte Ltd）

1.3 治療方案

所有患者應用紫杉醇化療方案，給藥劑量為150～175 mg/m2，連續3 h靜脈滴注給藥，每21天為1個周期，共治療2～4個周期。

1.4 觀察指標

藥物不良反應評價參照WHO觀察抗腫瘤藥物急性及亞急性毒性反應分級標準。包括血液系統（白細胞、粒細胞、血紅蛋白、血小板）、胃腸道（膽紅素、谷丙轉氨酶、堿性磷酸酶、惡心嘔吐、腹瀉）、腎、膀胱（尿素氮、肌酐、蛋白尿、血尿）、肺、發熱、過敏、皮膚反應、脫發、感染、心臟節率、心功能、神志、周圍神經、便秘、疼痛等方面的毒副反應。

1.5 CYP1B1基因型檢測

滴注結束后采集靜脈血2 mL于乙二胺四乙酸二鈉抗凝管中，按照天根血液提取試劑盒，提取血液DNA，紫外分光光度計測OD值，檢測DNA濃度和純度，保證DNA濃度>50 ng/mL;保存于-20℃備用。引物由上海邁浦生物科技有限公司合成，每管1OD，引物稀釋時，加入每OD納摩爾數×（100 μL）的滅菌雙蒸H2O，得到終濃度為10 μmol/L的引物，-20℃保存備用。PCR反應體系20 μL，含Premix Taq 10 μL，上游引物1 μL，下游引物1 μL，模板1 μL，ddH2O 7 μL。PCR反應體系20 μL，含Premixtaq 10 μL，DNA模板40 ng，上下游引物各0.2 μmol/L。PCR反應條件：94℃預變性3 min，94℃變性30 s，64℃退火30 s（-0.5℃ percycle）、72℃延伸30 s，循環15次，94℃變性30 s，57℃退火30 s、72℃延伸30 s，循環20次，72℃延伸10 min，PCR產物經2%瓊脂糖凝膠電泳，割取大小對等的目的條帶，按照天根回收試劑盒（DP214-03）純化回收。采用sanger法進行測序，測序平臺ABI 3730xl，用DNA Sequencing analysis軟件分析測序結果。

1.6統計學方法

應用SPSS19.0軟件進行統計分析，基因型分布遺傳平衡吻合度檢驗使用Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗方法進行檢驗，CYP1B1各位點不同基因型與紫杉醇不良反應的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 52例腫瘤患者CYP1B1基因型及分布頻率

本研究共檢測了CYP1B1*2（142C>G）、CYP1B1*2（355G>T）、CYP1B1*3（4326C>G）、CYP1B1*4（4390A>G）、CYP1B1*5（142C>G）、CYP1B1*5（4326C>G）、CYP 1B1*6（142C>G）、CYP1B1*6（355G>T）、CYP1B1*6（432 6C>G）、CYP1B1*7（142C>G）、CYP1B1*7（355G>T）CYP1B1*7（4326C>G）、CYP1B1*7（4360C>G）、CYP1 B1*11（171G>C）、CYP1B1*12（182G>A）、CYP1B1*13（501_502insT）、CYP1B1*14（841G>T）、CYP1B1*15（863_864insC）、CYP1B1*17（4096_4108del）、CYP1B1*18（4125G>T）、CYP1B1*19（4168C>T）、CYP1B1*20（4191G>A）、CYP1B1*21（4201G>A）、CYP1B1*22（4232_4241 dup）、CYP1B1*23（4342C>T）、CYP1B1*24（4377delG）、CY P1B1*25（4437C>T）27個基因位點，所有的基因位點均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（P>0.05），群體基因遺傳平衡，樣本來自同一蒙德爾群體，其分布頻率見表1，結果表明52例腫瘤患者僅CYP1B1*2（142C>G）、CYP1B1*2（355G>T）、CYP1B1*3（4326C>G）、CY P1B1*5（142C>G）、CYP1B1*5（4326C>G）、CYP1B1*6（142C>G）、CYP1B1*6（355G>T）、CYP1B1*6（4326C>G）、CYP1B1*7（142C>G）、CYP1B1*7（355G>T）、CYP1B1*7（4326C>G）11個基因位點有發生突變，其余16個基因位點均為野生型。