丹參酮ⅡA對(duì)超氧化物歧化酶活性的影響*

吳林蕓，蔡周權(quán)，沈 馳

（四川省科學(xué)城醫(yī)院藥劑科，四川 綿陽 621900）

超氧化物歧化酶（SOD）是重要的抗氧化酶，廣泛分布于動(dòng)物、植物、微生物等生物體內(nèi)。SOD具有特殊的生理活性，是機(jī)體內(nèi)天然存在的超氧自由基清除因子，能催化超氧陰離子發(fā)生歧化反應(yīng)，把有害的超氧自由基轉(zhuǎn)化為過氧化氫，再通過體內(nèi)的過氧化氫酶和過氧化物酶將其分解為完全無害的水，因此SOD可對(duì)抗與阻斷因氧自由基對(duì)細(xì)胞造成的損害，并及時(shí)修復(fù)受損細(xì)胞[1]。丹參酮ⅡA是丹參的主要活性成分，有抗炎、抑菌等多種藥理作用[2]，具有保肝、保護(hù)腎小管的正常結(jié)構(gòu)，以及延緩腎間質(zhì)纖維化[3-5]、抗癌[6]、改善血循環(huán)[7-9]等作用。丹參酮ⅡA具有抗氧化活性，可減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)。本研究中就丹參酮ⅡA對(duì)SOD活性的影響進(jìn)行了探討。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

儀器：UV-6100型紫外可見分光光度計(jì)（上海元析儀器有限公司）；37℃恒溫水浴；微量移液器。

試藥：丹參酮ⅡA提取物（西安開來生物有限公司，批號(hào)為K176845，純度98%）；維生素C（分析純，成都麥卡希化工有限公司，批號(hào)為2017041301）；總超氧化物歧化酶測試盒（南京建成生物工程研究所）；雙蒸水（自制）。

1.2 方法

1.2.1 原理

采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活力。在有氧條件下，黃嘌呤氧化酶催化黃嘌呤發(fā)生氧化反應(yīng)，產(chǎn)生超氧陰離子自由基（O2-），O2-氧化型細(xì)胞色素C還原為還原型細(xì)胞色素C，用可見分光光度計(jì)測定吸光度，后者在550 nm波長處有最大吸收。當(dāng)被測樣品中含SOD時(shí)，O2-被催化而歧化，細(xì)胞色素C還原反應(yīng)速率則降低，根據(jù)細(xì)胞色素C在加入SOD前后被O2-還原的速率變化測定SOD活性。

1.2.2 方法

分組：以丹參酮ⅡA提取物配制的3個(gè)質(zhì)量濃度梯度（2.5，5.0，10.0 g／L）的丹參酮溶液為試驗(yàn)1 組、2 組、3組（A1組、A2組、A3組），5 g／L 維生素 C 溶液為陽性對(duì)照組（B組），雙蒸水為陰性對(duì)照組（C組），每組不同質(zhì)量濃度各取5個(gè)樣本進(jìn)行試驗(yàn)。

活性測定：取透明度好、質(zhì)底相同的試管。按表1所列內(nèi)容加入各種溶液。操作全部完成后，于550 nm波長處，使用1 cm光徑比色杯，雙蒸水調(diào)零，比色。

表1 超氧化物歧化酶活力測定方法（mL）

1.2.3 SOD活力計(jì)算公式

每1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為1個(gè)SOD活力單位，則SOD活力計(jì)算公式如下：總 SOD活力（U／mL）=（對(duì)照OD值-測定OD值）／對(duì)照OD值／50% ×反應(yīng)體系的稀釋倍數(shù)×樣本試前稀釋倍數(shù)。

2 結(jié)果

結(jié)果見表 2 和圖 1。由圖 1 可見，隨著丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度的增加，其SOD活力亦逐漸增加，當(dāng)?shù)⑼駻的質(zhì)量濃度增至10g／L時(shí)，其SOD活力已大于維生素C，提示丹參酮ⅡA具有增強(qiáng)SOD活性的作用，且其質(zhì)量濃度越大，SOD活性越強(qiáng)。

表2 丹參酮ⅡA溶液SOD活力的測定值（n=5）

圖1 各組SOD活力值比較

3 討論

自由基是具有未配對(duì)電子的原子或原子團(tuán)，對(duì)組織的損傷主要是通過過氧化脂質(zhì)的作用來完成。過氧化脂質(zhì)是體內(nèi)細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)中的多價(jià)不飽和脂肪酸受氧自由基的作用生成的脂質(zhì)過氧化物，膜脂質(zhì)的過氧化會(huì)使膜結(jié)構(gòu)和細(xì)胞功能受損而引起多種疾病。同時(shí)，氧自由基和脂質(zhì)過氧化物的降解產(chǎn)物如丙二醛（MDA）等物質(zhì)可干擾蛋白質(zhì)、糖和核酸的代謝，導(dǎo)致酶的活性減弱，酸的模板功能障礙，以及組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)損傷[10]。

丹參酮ⅡA是中藥丹參的有效成分，為脂溶性二萜酮類化合物，將磺酸基引入后生成水溶性的丹參酮ⅡA磺酸鹽。丹參酮的脂溶性成分和水溶性成分能增強(qiáng)內(nèi)源性抗氧化酶的活性、穩(wěn)定細(xì)胞膜、減少溶酶體內(nèi)水解酶的釋放及磷脂酶的激活，是細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物與DNA相互作用的有效抑制劑，具有很強(qiáng)的抗脂質(zhì)過氧化和自由基清除作用[11-12]。丹參酮ⅡA作為預(yù)防型抗氧化劑，通過清除氧化性物質(zhì)、活性自由基、介質(zhì)過氧化物質(zhì)等，使之轉(zhuǎn)變成危險(xiǎn)性小的物質(zhì)，以防止自由基鏈反應(yīng)的形成和進(jìn)一步損傷，降低了超氧自由基對(duì)細(xì)胞造成的損害。本研究結(jié)果也證實(shí)，丹參酮ⅡA具有增強(qiáng)SOD活性的作用，且其質(zhì)量濃度越大，SOD活性越強(qiáng)。