氣相色譜法檢測加米霉素原料藥中6種溶劑的殘留

侯林 張聰 姚路路

摘要 [目的]建立加米霉素原料藥中丙醛、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、正庚烷和吡啶6種溶劑殘留的檢測方法。[方法]采用氣相色譜法，色譜柱為DB-624（30 m×0.32 mm×1.8 μm）;采用氫火焰離子化檢測器（FID），溫度250 ℃，載氣為N2;程序升溫，流速為1.2 ?mL/min。[結果]丙醛、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、正庚烷和吡啶在各自濃度范圍內線性關系良好，檢測限分別為1.7、5.0、4.1、5.0、1.7和2.0 ng，平均加樣回收率為99.1%～103.0%。[結論]該方法適用于加米霉素原料中溶劑殘留的檢測。

關鍵詞 加米霉素;殘留溶劑;氣相色譜法

中圖分類號 S 859.79+6 ?文獻標識碼 A

文章編號 0517-6611（2019）12-0200-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.12.055

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Abstract [Objective] To establish the method for determination of six residual solvents in gamithromycin. [Method] The experiment was carried out by GC with column of DB-624 capillary column （30 m×0.32 mm×1.8 μm），temperature of detector （FID） 250 ℃，carrier gas of N2，and programmed temperature with flow rate of 1.2 mL/min. [Result] The linear relationships of propanal，acetone，acetonitrile，ethyl acetate，nheptane and pyridine were good in respective concentration ranges. The limits of detection were 1.7，5.0，4.1，5.0，1.7 and 2.0 ng，respectively. The average recovery was 99.1%-103.0%. [Conclusion] The method is suitable for the determination of residual solvents in gamithromycin.

Key words Gamithromycin;Residual solvents;Gas chromatography

加米霉素（Gamithromycin）是由梅里亞公司開發的氮雜大環內酯類抗生素，其在7α位為丙基取代，在生理pH條件下，有利于快速吸收，在靶組織富集。其制劑產品zactran經EMEA批準用于治療由溶血性曼氏桿菌、多殺性巴氏桿菌等引起的牛、豬呼吸系統疾病[1]，相關產品已在國內批準上市[2]。加米霉素在合成過程中使用了丙酮、吡啶、正庚烷、乙酸乙酯、乙腈和丙醛等有機溶劑[3-8]，不可避免地會有部分殘留在終產品中，進而會在使用過程中殘留在動物體內造成傷害。根據《中華人民共和國獸藥典》中對各類溶劑殘留量的要求[9]，筆者建立了氣相色譜法測定加米霉素中6種有機溶劑殘留的檢測方法，結果表明，該方法可以用于加米霉素原料藥中殘留溶劑的測定。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

島津GC2010PLUS氣相色譜儀，配氫火焰離子化檢測器（FID）;BS224S電子分析天平。

加米霉素，批號171001、171002、171003，洛陽惠中獸藥有限公司;N，N-二甲基甲酰胺，光譜純，國藥集團化學試劑有限公司;丙酮、乙腈，色譜純，德國默克;乙酸乙酯、正庚烷、吡啶，色譜純，上海試劑一廠;丙醛，分析純，阿拉丁試劑。

1.2 色譜條件

色譜柱：DB-624（30 m×0.32 mm×1.8 μm）;柱溫：起始溫度37 ℃，保持6 min，以15 ℃/min 速率升溫至150 ℃，然后以40 ℃/min速率升溫至240 ℃，保持5 min。

FID檢測器溫度： 250 ℃;氣化室溫度：200 ℃;載氣：N2;恒壓模式流速：1.2 ?mL/min;分流比：50∶1;進樣量：1 μL。

1.3 溶液的配制

1.3.1 對照品儲備液。

稱取丙醛0.055 3 g、丙酮0.469 6 g、乙腈0.052 6 g、乙酸乙酯0.495 2 g、正庚烷0.475 6 g、吡啶0.061 8 g，精密稱定，分別置10 mL容量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺（DMF）溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品儲備液。

分別取丙醛、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、正庚烷和吡啶對照品儲備液 1 013、1 065、779、1 010、1 051、324 μL于10 ?mL容量瓶中，用 DMF定容，搖勻作為丙醛、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、正庚烷和吡啶的混合對照品儲備液。

1.3.2 供試品溶液。取加米霉素1.0 g，精密稱定，加DMF溶解并稀釋至10 mL，作為供試品溶液。

1.4 線性關系考察

精確移取混合對照品儲備液 150、120、100、80、50 μL，分別用DMF定容至1 ?mL容量瓶中，即得混合對照品的標準曲線L5、L4、L3、L2、L1，對應的濃度為限量的150%、120%、100%、80%和50%。

1.5 定量限與檢測限

取混合對照品儲備液依次稀釋，分別以信噪比（S∶N）約為10∶1及3∶1時的濃度作為定量限及檢測限。

1.6 中間精密度試驗

精確移取混合對照品儲備液 1.20、1.00、0.80于10 ?mL 容量瓶中，精確稱量1 g 供試品加入各容量瓶中，并用DMF 定容至刻度線搖勻，即為含量為限量120%、100%和80%的供試品加標溶液，各取3組平行樣進行中間精密度試驗。

1.7 重復性試驗

精確移取混合對照品儲備液1.00 ?mL于10 ?mL 容量瓶中，精確稱量1 g 供試品加入容量瓶中，并用DMF 定容至刻度線搖勻，即為含量為限量100%的供試品加標溶液，共進樣6次驗證系統重復性。

1.8 加樣回收率試驗

取加米霉素中試樣品9份（批號1001），每份約1 g，精密稱定，分別置于10 ?mL容量瓶中，分別精密加入混合對照品儲備液0.8、1.0、1.2 ?mL，用DMF稀釋至刻度，配制成限量為80%、100%、120%的回收溶液，各取3組平行樣進行回收率測定。

1.9 樣品的測定

按照確定的方法對3批加米霉素原料樣品（批號171001、171002、171003）進行殘留溶劑測定。

2 結果與分析

2.1 系統適應性

精密移取混合對照品溶液 100 μL，用DMF定容至1 mL。分別精密吸取丙醛、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、正庚烷和吡啶 10.1、10.7、7.8、10.1、10.5和3.2 μL至1 ?mL容量瓶中，用DMF定容，作為單標對照品溶液。按“1.2”色譜條件進行分析，結果見圖1、2、3和表1。

2.2 線性范圍 由表2可知，待測溶劑在規定的濃度范圍內線性關系良好。

2.3 檢測限與定量限

分別以信噪比約為10∶1及3∶1時的濃度作為定量限及檢測限，結果見表3。

2.4 精密度

不同人員在不同時間按“1.6”中試驗流程操作，按確定的色譜方法進樣，記錄峰面積，結果顯示：丙醛、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、正庚烷和吡啶峰面積RSD分別為0.83%、0.36%、1.29%、0.41%、1.92%和0.54%，表明色譜系統精密度良好。

2.5 重復性

精密量取“1.7”項下限量100%的供試品加標溶液，按上述色譜方法進樣，以峰面積為指標，考察該方法的進樣精密度，結果丙醛、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、正庚烷和吡啶的RSD分別為1.29%、0.50%、0.71%、0.41%、3.32%和0.69%，表明系統重復性良好。

2.6 加樣回收率 回收率試驗結果見表4。由表4可知，丙醛、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、正庚烷和吡啶的RSD分別為3.39%、1.17%、1.94%、0.82%、2.84%和2.83%。

2.7 樣品測定 按

照上述方法對中試樣品（批號171001、171002、171003）進行殘留溶劑測定，結果見表5。

3 討論

3.1 丙醛殘留溶劑限度的確定

丙醛未在2015年版《中華人民共和國獸藥典》一部附錄所列的常見溶劑中出現，但是在加米霉素合成過程中作為反應原料使用，必須對其殘留量進行控制。參考文獻，根據半數致死量計算NOEL，根據NOEL計算PDE值，進而計算限度。

EMEA清潔驗證指導原則中NOEL計算公式為

NOEL=LD50×702 000

EMEA ICH Q3C中PDE計算公式為

PDE=NOEL×體重調整F1×F2×F3×F4×F5×100%

濃度限度=PDE（mg/d）/[1 000×劑量（g/d）]×100%，劑量估算為10 g/d。大鼠口服丙醛的LD50為800～1 600 mg/kg，根據EMEA ICH Q3C中規定[10]，PDE計算公式中F1為5，F2為10，F3為5，F4為1，F5為1，根據公式計算丙醛的限度為0.056%。

3.2 方法耐用性

考察了確定的方法對條件發生微小變化的耐受程度，考察因素包括氣化室溫度、檢測器溫度、流速，考察指標為各待測組分的理論塔板數、保留時間以及相鄰組分間的分離度。結果顯示：在流速±0.2 mL/min和氣化室溫度、檢測器溫度±5 ℃時，確定的方法耐用性良好。

4 結論

該研究建立了氣相色譜法測定加米霉素原料中6種有機溶劑殘留量的方法，結果表明，該方法能夠滿足加米霉素原料溶劑殘留控制的需要。

參考文獻

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