云南梁河傣族育齡婦女雌激素α受體基因多態性分析

王建蘭,袁彥玲,鄭 水,莫麗濱,張玉梅,張煥芬

(1.云南省人口和計劃生育科學技術研究所 生殖醫學治療中心，云南 昆明 650021；2.云南省德宏州梁河縣婦幼保健計劃生育服務中心, 云南 德宏 679200)

雌激素受體分為α和β受體2個亞型.雌激素受體基因的多態性在不同種族間存在差異.雌激素受體的基因多態性被證實與多種疾病存在關聯.

雌激素α受體和育齡期生育相關疾病如：妊娠期糖尿病[1]、產后抑郁[2]、妊娠期肝內膽汁淤積綜合癥[3]、圍生期抑郁[4]、助孕過程中卵巢反應性[5]、排卵功能障礙[6]等相關聯.

雌激素受體與育齡期某些常見自身免疫疾病，如Graves病、系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎等相關聯；并被證實與女性退性行疾病膝骨關節炎、骨質疏松癥、女性盆底功能障礙性疾病發生相關聯.

本研究檢測分析了云南梁河傣族育齡婦女ERα基因 rs2234693(PvuⅡ)、rs9340799(XbaⅠ) 位點的基因型頻率和等位基因頻率的分布特征，通過分析梁河傣族育齡人群ERα基因多態性的分布特征及與其他種族不同，以期為進一步研究該人群ERα基因多態性與女性育齡期疾病及女性退性行疾病的相關性提供基礎數據.

1 資料與方法

1.1 對象

來自云南梁河縣勐養、平山、小廠、大廠、河西、遮島6個鄉鎮的自愿參加該項研究的164位傣族育齡婦女.所有研究對象在抽血前均簽署知情同意書.她們最大年齡33歲，最小年齡16歲，平均年齡(25.27±3.29)歲.

1.2 方法

抽取所有調查檢測對象靜脈血 5 mL.采用血液基因組 DNA 提取試劑盒嚴格按照試劑盒說明書提取DNA.將DNA溶液置于4 ℃保存備用.引物序列為:正向:5′-CTGCCACCCTATCTGTATCTTTTCCTATTCTCC-3′,反向: 5′-TCTTTCTCTGCCACCCTGGCGTCGATTATCTGA-3′. PCR 反應體系包括10 μL TakaraTaqMix，0. 5 μL 正向引物，0. 5 μL 反向引物，2 μL DNA 模板，用 ddH2O 補足至20 μL.各檢測基因的PCR條件均為: 94 ℃預變性4 min，然后 94 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，共 30 個循環，最后 72 ℃延伸 5 min. PCR擴增產物由限制性內切酶于37 ℃電熱恒溫水浴箱中進行酶切反應.酶切反應結束后應用1%瓊脂糖凝膠電泳40 min，電泳完畢后置于紫外線凝膠分析系統下分析其基因型.

1.3 統計分析

所有統計分析均在 SPSS 18.0 軟件包上完成.基因型頻率和等位基因頻率分布使用Hardy-Weinberg平衡來檢驗是否達到遺傳平衡，判斷是否具有人群代表性.不同種族間ER基因型頻率和等位基因頻率分布用χ2檢驗, 以P<0.05 為差異有統計學意義.

2 結果

2．1 位點檢測結果的Hardy-Weinberg平衡檢驗

對164例云南梁河傣族育齡女性樣本rs2234693(PvuⅡ)、rs9340799(XbaⅠ) 位點檢測結果經Hardy-Weinberg平衡檢驗，rs2234693(PvuⅡ) H - W檢驗χ2值為0.865，P值為0.649； rs9340799(XbaⅠ) H - W檢驗χ2值為5.51，P值為0.06.表明位點基因型頻率分布的差異無統計學意義(P>0.05)，rs2234693(PvuⅡ)、rs9340799(XbaⅠ)位點基因型和等位基因頻率分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，達到遺傳平衡，具有群體代表性.

2．2 用直接計數法計算出基因型及等位基因的檢出頻率

ERα基因rs2234693(PvuⅡ)位點、rs9340799(XbaⅠ) 位點經酶切后分別有 3 種基因型：CT、TT、CC和AA、、AG、GG.在云南梁河傣族育齡女性人群中，ERα基因rs2234693(PvuⅡ)位點基因型以CT最多(70例，42.7%)，其次為TT(66例，40.2%)，CC最少(28例，17.1%)；其C型等位基因頻率為38.4%，T型等位基因頻率為61.6%(見表1).rs9340799(XbaⅠ) 位點基因型以AA最多(109，66.5%)，其次為AG(40例，24.4%)，GG最少(15例，9.1%)；其A型等位基因頻率為78.7%，G型等位基因頻率為21.3%(見表2).

表1 云南梁河傣族育齡婦女ERα 基因 rs2234693(PvuⅡ)多態性分布頻率與不同種族人群的結果比較

表2 云南梁河傣族育齡婦女ERα基因 rs9340799A/G 多態性分布頻率與不同種族人群的結果比較

3 討論

傣族為云南特有的少數民族,其育齡婦女人群雌激素受體基因多態性少見報道.本研究檢測云南梁河傣族育齡婦女人群的ERα基因 rs2234693(PvuⅡ)、rs9340799(XbaⅠ) 位點的基因型頻率和等位基因頻率的分布特征，分析該人群ERα基因多態性的分布特征及與其他種族差異，以期為進一步研究該人群ERα基因多態性與女性育齡期疾病及女性退性行疾病相關性提供基礎數據，亦為提升少數民族婦女生殖健康的相關工作提供借鑒.

本研究通過對164例云南梁河傣族育齡婦女ERα基因rs2234693(PvuⅡ)、rs9340799(XbaⅠ) 位點多態性的檢測，并把檢測結果與通過查閱文獻收集到其他民族女性和其他人群的ERα基因多態性分布頻率進行比較有以下發現：

rs2234693位點基因型分布頻率與云南白族育齡婦女[7]、新疆墨玉維吾爾族婦女[8]、寧夏回族婦女[9]、寧波漢族婦女[10]比較差異無統計學意義(P>0.05)，基因型分布頻率均為以CT型最多，CC型最少；與巴巴多斯的加勒比海人群、非洲人群、英格蘭和蘇格蘭人群比較差異有統計學意義(P<0.05),這些地區人群基因型分布頻率均以CT型最多、TT型最少[11]；與中國南方漢族和中國傣族、美國人群、東亞人群、南亞人群比較差異無統計學意義(P>0.05)[11](表1).

ERα基因rs2234693位點等位基因頻率與云南白族育齡婦女[7]、新疆墨玉維吾爾族婦女[8]、寧夏回族婦女[9]、寧波漢族婦女[10]比較差異無統計學意義，都是T型等位基因出現頻率較高(P>0.05) ;與非洲人群、巴巴多斯的加勒比海人群、英格蘭和蘇格蘭人群比較差異有統計學意義(P<0.05)，這些地區人群都是C型等位基因出現頻率較高[11]；與中國南方漢族和中國傣族、美國人群、東亞人群、南亞人群比較差異無統計學意義(P>0.05)[11](表1).

云南梁河傣族育齡婦女ERα基因rs9340799位點基因型分布頻率與新疆墨玉維吾爾族婦女[8]、寧波漢族婦女[10]比較差異有統計學意義(P<0.05)；與云南白族育齡婦女[7]、寧夏回族婦女[9]比較差異無統計學意義(P>0.05);與中國南方漢族、非洲人群、美國人群、巴巴多斯的加勒比海人群、南亞人群、英格蘭和蘇格蘭人群比較差異有統計學意義(P<0.05)[12];與東亞人群、中國傣族比較差異無統計學意義(P>0.05)[12](表2).

云南梁河傣族育齡婦女ERα基因rs9340799位點等位基因頻率與文獻報道的新疆墨玉維吾爾族婦女[8]比較差異有統計學意義(P<0.05)，與云南白族育齡婦女[7]、寧夏回族婦女[9]、寧波漢族婦女[10]比較差異無統計學意義(P>0.05 );與美國人群、巴巴多斯的加勒比海人群、南亞人群、英格蘭和蘇格蘭人群比較差異有統計學意義(P<0.05)[11]；與中國南方漢族人群、中國傣族、非洲人群、東亞人群比較差異無統計學意義(P>0.05)[12](表2).

本研究屬首次對梁河傣族育齡婦女的ER基因多態性進行研究，由于該地區其他少數民族育齡婦女人群和該民族其他地區育齡婦女人群ERα基因rs2234693(PvuⅡ)、rs9340799(XbaⅠ) 位點多態性未見報道，因此本研究得出的ERα基因rs2234693(PvuⅡ)、rs9340799(XbaⅠ) 位點多態性結果無法與不同地區同一民族的育齡婦女和同一地區不同民族的育齡婦女結果相比較.

4 結語

隨著社會的不斷發展，人民生活水平在不斷提高，優生優育及生殖健康的理念越來越被廣泛認可和接受.但由于相關基礎研究工作的相對滯后，還不能很好的支持和指導這些科學理念的推廣和貫徹.因此，相關基礎研究是必須且應加大力度的，尤其針對云南落后地區的少數民族的相關研究，更是必要和迫切.云南梁河傣族育齡婦女ERα基因的相關研究工作，是本研究小組針對云南特色世居少數民族育齡婦女進行的系列基礎調查研究工作之一，目的是對云南落后地區少數民族育齡婦女進行相關生殖資料的研究積累，希望能對相關科學理念的推廣和貫徹有一定的支持和幫助.