半夏瀉心湯的工藝改進及藥效研究

黃 琨，王玲玲，楊若婧，周 芳

1.湖北麗益醫藥科技有限公司，湖北 武漢 430205；2.抗病毒藥物湖北重點實驗室，湖北 武漢 430205；3.武漢 大學化工與制藥學院，湖北 武漢 430205

我國慢性胃炎、胃潰瘍發病率較高，統計數據表明，發病率可達60%以上，為臨床上常見多發病［1］。現代醫學治療胃炎、胃潰瘍多對癥處理，藥物多為嗎丁啉和維酶素等，或針對主要致病因素——幽門螺桿菌（helicobacter pylori，HP）多種抗生素聯合治療，如采用質子泵抑制劑加克拉霉素加阿莫西林或甲硝唑三聯療法［2-3］。雖然取得一定療效，但愈后復發率高，且病程又長，服藥時間長，還帶來胃腸道不適、失眠、頭昏、頭痛等副作用，尤其是隨著抗生素的廣泛使用，HP 對常用抗生素的耐藥情況日益嚴重［4］。

中醫認為，胃居心下與脾互為表里，同居中洲，胃氣以下降為順，脾氣以上升為暢，脾升胃降，中焦氣機順暢，腐熟運化有常，故能行使機體后天之本。若因傷寒誤治，損傷脾胃、邪熱內陷，脾胃升降失職，病邪結于中焦，而成寒熱互結。或因素體中陽虧，脾胃虛弱，中陽不振，升降失職，加之飲食不節，情志不舒，勞逸失度，痰濕積滯，濕熱之邪乘虛而入，導致脾胃功能紊亂，陰陽失調，上下不通，氣機阻滯，寒熱互結，氣血運行不暢，胃之脈絡不通，而發生胃脘疼痛之癥［5-6］。半夏瀉心湯出自漢代著名醫家張仲景的《傷寒論》，由姜半夏、干姜、黃芩、黃連、黨參、灸甘草、大棗七味藥材組成，是和解劑的代表，可平調寒熱、和胃降逆、開解除痞［7］，現代臨床仍然廣泛用于各種急慢性胃炎、胃潰瘍的治療［8-9］。方中姜半夏、干姜、辛溫散結消痞，祛脾寒之氣以和陰，黃芩、黃連、苦寒降泄，清胃氣之熱以和陽，四藥互用，辛開苦降，陰陽得和，脾胃得調，為后世醫家辛開苦降法之始作。又佐以黨參、甘草、大棗甘平入脾胃，調和諸藥，補氣健脾，以固后天之本。即合《內經》“正氣存內，邪不可干”之旨。全方配伍嚴謹，祛邪補虛，融為一爐，為治療脾胃病的經典之作。大量臨床研究報道，此方具有和胃降逆，平調寒熱之功效，對治療脾虛胃熱證之胃脘痛，脘腹痞滿、呃逆噯氣、泛酸嘈雜、即見有上癥之慢性胃炎、消化性潰瘍有很好的療效［10］，對人體內的幽門螺桿菌也有很好地抑滅效果［11-12］。因此將其開發成新的治療慢性胃炎、胃潰瘍的中成藥對滿足臨床用藥顯得尤為重要。本研究旨在采用現代工藝技術，對有效部分進行藥效研究，為將古方制備成方便服用、質量可控、易保存的現代制劑提供技術及理論依據。

1 實驗部分

1.1 儀器及材料

T2K202 中試提取機組、2K00401 濃縮機組（江漢醫療制藥設備有限公司），2002 型旋轉蒸發儀（上海申勝生物技術有限公司），DZF6050 型真空干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司），CCPP-176聚丙烯層析柱（天津市德固特科技發展有限公司），Wistar 大鼠［（200±10）g，湖北中醫藥大學］，姜半夏、干姜、黃芩、黃連、黨參、灸甘草、大棗（湖北強康中藥飲片有限公司），AB-8 樹脂（安徽三星樹脂有限公司），質量分數95%乙醇（藥用級，湖南爾康制藥股份有限公司），水為注射用水（湖北科益藥業股份有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品1 水提對照樣品制備：稱取姜半夏4 kg、黃芩3 kg、干姜3 kg、黨參3 kg、炙甘草3 kg、黃連2 kg、大棗2 kg，煎煮2 次，每次2 h，第一次加水200 L，第二次加水160 L，合并提取液，孔徑為150 μm 篩過濾，減壓濃縮，60 ℃真空干燥，粉碎至細粉備用。

1.2.2 樣品2 20%乙醇提取組分制備：稱取姜半夏4 kg、黃芩3 kg、干姜3 kg、黨參3 kg、炙甘草3 kg、黃連2 kg、大棗2 kg，用質量分數為20%乙醇（以下簡稱20%乙醇）加熱回流2 次，每次2 h，第1次加20%乙醇200 L，第2 次加20%乙醇160 L，合并提取液，孔徑為150 μm 篩過濾，將濾液減壓濃縮至相對密度為1.10 的濃縮液，濃縮液上AB-8 型大孔吸附樹脂柱（20 kg AB-8 樹脂裝柱，樹脂重量為藥材重量的1 倍），用20%乙醇85 L（為大孔吸附樹脂柱體積的5 倍）洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮，60 ℃真空干燥，粉碎至細粉備用。

1.2.3 樣品3 40%乙醇提取組分制備：稱取姜半夏4 kg、黃芩3 kg、干姜3 kg、黨參3 kg、炙甘草3 kg、黃連2 kg、大棗2 kg，用質量分數為40%乙醇（以下簡稱40%乙醇）加熱回流2 次，每次2 h，第1次加40%乙醇200 L，第2 次加40%乙醇160 L，合并提取液，孔徑為150 μm 篩過濾，將濾液減壓濃縮至相對密度為1.10 的濃縮液，濃縮液上AB-8 型大孔吸附樹脂柱（20 kg AB-8 樹脂裝柱，樹脂重量為藥材重量的1 倍），用40%乙醇85 L（為大孔吸附樹脂柱體積的5 倍）洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮，60℃真空干燥，粉碎至細粉備用。

1.2.4 樣品4 60%乙醇提取組分制備：稱取姜半夏4 kg、黃芩3 kg、干姜3 kg、黨參3 kg、炙甘草3 kg、黃連2 kg、大棗2 kg，用質量分數為60%乙醇（以下簡稱60%乙醇）加熱回流2 次，每次2 h，第1次加60%乙醇200 L，第2 次加60%乙醇160 L，合并提取液，孔徑為150 μm 篩過濾，將濾液減壓濃縮至相對密度為1.10 的濃縮液，濃縮液上AB-8 型大孔吸附樹脂柱（20 kg AB-8 樹脂裝柱，樹脂重量為藥材重量的1 倍），用60%乙醇85 L（為大孔吸附樹脂柱體積的5 倍）洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮，60 ℃真空干燥，粉碎至細粉備用。

1.2.5 樣品5 80%乙醇提取組分的制備：稱取姜半夏4 kg、黃芩3 kg、干姜3 kg、黨參3 kg、炙甘草3 kg、黃連2 kg、大棗2 kg，用質量分數為80%乙醇（以下簡稱80%乙醇）加熱回流2 次，每次2 h，第1次加80%乙醇200 L，第2 次加80%乙醇160 L，合并提取液，孔徑為150 μm 篩過濾，將濾液減壓濃縮至相對密度為1.10 的濃縮液，濃縮液上AB-8 型大孔吸附樹脂柱（20 kg AB-8 樹脂裝柱，樹脂重量為藥材重量的1 倍），用80%乙醇85 L（為大孔吸附樹脂柱體積的5 倍）洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮，60 ℃真空干燥，粉碎至細粉備用。

1.3 提取組分藥效試驗

1.3.1 對大鼠幽門結扎型胃潰瘍的抑制作用研究 取健康Wistar 大鼠，隨機分為正常對照組、樣品1～5 組，每組均10 只，雌雄各半。1～5 組的給藥劑量相同，即將干膏折算成生藥材的重量，按10 g 生藥材每1 kg 體重進行灌胃給藥，正常對照組給予等容量蒸餾水。試驗第一天上午各組分別灌胃1 次，下午開始禁食不禁水，第二、三天上午再分別灌胃1 次，第三天下午（即禁食48 h 后）開始手術。手術時，將大鼠用乙醚麻醉、沿腹中線切開腹壁，找出胃與十二指腸，用縫合線避開血管結扎胃幽門與十二指腸結合部，并由十二指腸再給藥一次，隨后縫合腹壁、碘酊消毒后放回籠中，同時禁食禁水。18 h 后，拉頸椎處死大鼠，剖腹取出胃并收集胃液，隨即向胃內注入質量分數為1%福爾馬林溶液10 mL，再將胃放入質量分數1%福爾馬林溶液中固定10 min 以上。然后沿胃大彎剪開胃，將其平展于玻璃板上，仔細觀察前胃部粘膜潰瘍的發生情況，并按下述標準進行潰瘍分級。0：無潰瘍；1：潰瘍點、出血點（＜1 mm）；2：1～5 個小潰瘍（＞1 mm，＜3 mm）；3：6 個以上小潰瘍或1 個大潰瘍（＞3 mm）；4：2 個以上大潰瘍；5：穿孔性潰瘍［13］。

1.3.2 抗炎作用研究 取健康Wistar 大鼠，隨機分為正常對照組、樣品1～5 組，每組均10 只，雌雄各半。進行灌胃給藥，正常對照組給予等容量蒸餾水。連續3 d，每天灌胃一次，最后一次灌胃后0.5 h，從大鼠左后肢足趾皮下注射新鮮蛋清0.1 毫升/只致炎。致炎前測量一次踝關節周長，并于致炎后2 h分別測量一次踝關節周長，計算關節腫脹率［14］。

1.3.3 抗幽門螺桿菌（HP）作用研究 幽門螺桿菌（HP）是一種革蘭陰性需氧螺桿菌，目前全世界超過50%的人受其感染，是導致胃炎、胃潰瘍的一種最常見致病因素，WHO 將其定為胃的Ⅰ類致病因子［15］。本試驗將考察不同分離部位對HP 的殺滅效果。取健康Wistar 大鼠，隨機分為正常對照組、無治療藥物組、樣品1～5 組、每組均10 只，雌雄各半。除正常對照組外其余各組連續10 天空腹灌胃食醋2.5 mL/只；第11 天，采用空腹束縛水浴6 h；從第12 天起，上述隔天空腹灌胃HP 混懸液（1×109 CFU/mL）1.5 mL/只，共3 次；第16 天除正常對照組和無治療藥物模型對照組外其余各組灌胃給藥，連續給藥10 天。第25 天下午所有組動物禁食過夜，次日將各組動物脫頸椎處死，在無菌的條件下，取胃粘膜快速進行尿素酶試驗和HP 接種培養，同時直接涂片觀察HP 陽性率。

2 結果與討論

2.1 提取組分對大鼠幽門結扎型胃潰瘍的抑制作用藥效結果

各提取組分對大鼠幽門結扎型胃潰瘍的抑制作用藥效試驗結果用t 值法進行統計分析，結果見表1。

表1 各提取組分大鼠幽門結扎型胃潰瘍的抑制作用Tab.1 Inhibition of each extract on rat pyloric ligation type stomach ulceration

藥效結果顯示，采用40%乙醇提取和洗脫得到的提取組分（樣品3）對大鼠幽門結扎型胃潰瘍具有顯著的抑制作用，效果略優于傳統水煎，表明該分離部位對胃潰瘍有較好的治療作用。

2.2 提取組分抗炎作用藥效結果

各提取組分抗炎作用藥效試驗結果見表2。

試驗結果表明，采用40%乙醇提取和洗脫得到的提取組分（樣品3）具有較好的抗炎作用，其藥效與水煎相似。

2.3 提取組分對幽門螺桿菌殺滅作用

各提取組分對HP 殺滅作用藥效試驗結果如表3 所示。

結果表明，樣品1～5 組提取物均有一定殺滅HP 的效果，其中40%乙醇提取及洗脫部位（樣品3），和60%乙醇提取及洗脫部位（樣品4）效果較好，與水煎工藝相似。

表2 各提取組分對蛋清致大鼠足趾腫脹的抑制作用Tab.2 Inhibition of each extract on rat metatarsal swelling induced by albumen

表3 各提取組分殺滅感染大鼠體內HP 的作用Tab.3 Bactericidal effects of each extract on rat infectious HP

3 結 論

本研究對半夏瀉心湯提取方法進行工藝改進，采用不同濃度的乙醇提取和純化，得到不同的提取組分，通過藥效試驗考察各提取組分抑制胃潰瘍、抗炎以及殺滅HP 的作用，并與古代水煎工藝進行對比。結果表明，采用質量分數為40%乙醇提取，并通過AB-8 樹脂富集，5 倍量樹脂體積的40%乙醇洗脫得到的提取組分對胃炎、胃潰瘍有良好的治療作用，在不影響藥效的前提下，大大減少了患者的服用量，為將古方制備成方便服用、質量可控、易保存現代制劑（顆粒、片劑、膠囊、口服液等）提供了技術和理論依據。