強直性脊柱炎患者血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平變化及其臨床意義

劉大棟

周口市中心醫(yī)院骨科，河南 周口 466000

強直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是以骶髂關節(jié)和脊柱附著點炎癥為主要病理改變的疾病[1]。病變特點為四肢大關節(jié)、椎間盤纖維環(huán)及其附近結締組織出現(xiàn)纖維化和骨化，或者出現(xiàn)關節(jié)強直等，是一種慢性炎性疾病[2]。該病起病比較隱匿，早期可無任何臨床癥狀，導致病情延誤，容易錯過最佳治療時機[3]。Dickkopf-1蛋白(DKK-1)不僅存在于扁骨中，在管狀骨中也有表達，其含量與骨密度呈負相關，血管內(nèi)皮細胞生長因子-A(VEGF-A)作為促進血管生成的物質，也參與軟骨生成，白細胞介素-17則主要與炎癥反應相關[4]。本研究選取我院收治的AS患者(AS組)、健康體檢對象(健康組)，分析血清DKK-1、VEGF-A、IL-17與AS患者紅細胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate，ESR)、C-反應蛋白(C-reactive protein，CRP)、強直性脊柱炎疾病活動指數(shù)(BASDAI)、巴氏強直性脊柱炎功能指數(shù)(BASFI)的關系。

1 材料和方法

1.1 臨床資料

選取我院2016年2月至2017年9月收治的AS患者40例(AS組)、健康體檢對象40名(健康組)。AS組：年齡18～65歲，平均(35.5±13.0)歲，男28例、女12例，平均病程(7.8±2.9)年。健康組：年齡18～65歲，平均(37.2±15.1)歲，男25例、女15例。兩組研究對象的年齡、性別比較，差異不具有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

納入標準：(1)強直性脊柱炎患者的診斷標準參考1997年美國風濕病協(xié)會制定的診斷標準；(2)患者年齡范圍18～65歲；(3)入院后經(jīng)X線、CT診斷檢測及病理學檢查確診；(4)患者未接受抗腫瘤壞死因子藥物治療；(5)本研究獲得醫(yī)學倫理委員會的批準。

排除標準：(1)結核、腫瘤；(2)血液系統(tǒng)疾病；(3)免疫功能缺陷性疾病；(4)嚴重的骨質疏松；(5)肝腎功能疾病；(6)近3個月使用糖皮質激素、抗骨質疏松藥物。

1.2 各項實驗室指標的檢測方法

檢測兩組的血清DKK-1、VEGF-A、IL-17、ESR、CRP水平。AS患者和健康體檢對象均于清晨取靜脈血5 mL，血樣離心后于-80 ℃條件下保存。DKK-1、VEGF-A、IL-17使用ELISA方法統(tǒng)一檢測，DKK-1 ELISA試劑盒來自于南京森貝伽生物科技有限公司，VEGF-A ELISA試劑盒則來自上海江萊生物科技有限公司。IL-17 ELISA試劑盒采購自上海樊克生物科技有限公司。DKK-1、VEGF-A、IL-17檢測步驟相同，首先解凍血清，用ELISA試劑盒里的稀釋液稀釋后，將其分別加入預包被96孔板內(nèi)(ELISA試劑盒提供)，再分別加入100 μL稀釋后的樣品和標準品，37 ℃條件下孵育90 min。除去上清液后，清洗3次左右，每孔加入100 μL親和素-過氧化物酶復合物，于37 ℃條件下孵育30 min，再次除去上清液，清洗5次后。每孔均加入100 μL TMB顯色液，在37 ℃避光反應30 min后，加入TMB終止液。通過標準曲線計算樣品中相應指標的濃度。

ESR采用溫氏法測定，枸櫞酸鈉(4∶1)抗凝血2 mL，用LENA血沉儀測定紅細胞沉降率。CRP通過膠體金法測定，即CRP檢測試劑盒(生產(chǎn)廠家：基蛋生物科技股份有限公司)測定，取少量血清樣本，通過產(chǎn)品說明書操作后，與上海凱創(chuàng)醫(yī)藥生物科技有限公司KD-I型金標讀數(shù)儀配套使用進行測定。

1.3 強直性脊柱炎疾病活動指數(shù)、巴氏強直性脊柱炎功能指數(shù)

BASDAI：該量表主要是對患者過去一周脊柱疼痛、疲勞感、關節(jié)疼痛感、肌腱附著點局限性壓痛、晨僵5種癥狀的持續(xù)時間、疼痛程度進行評估，評分越高表示疾病活動程度越強。

BASFI：主要采用視覺模擬評分法，對患者完成日常生活活動的情況進行自主評分。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1 兩組研究對象的血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平比較

AS組患者的血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平顯著高于健康組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

組別例數(shù)DKK-1VEGF-AIL-17AS組401663.9±182.0328.1±23.332.8±8.9健康組401310.4±121.7292.4±19.512.6±4.1t值10.212 7.431 13.038 P值0.000 0.000 0.000

2.2 兩組研究對象的ESR、血清CRP水平比較

AS組患者的ESR、血清CRP水平顯著高于健康組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

組別例數(shù)ESR/(mm/h)CRP/(mg/L)AS組4029.5±7.827.9±14.8健康組4011.0±4.23.8±1.2t值13.208 10.265 P值0.000 0.000

2.3 AS患者血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平與患者疾病活動程度的關系

AS組患者的BASDAI評估值為(52.91±10.62)分、BASFI評估值為(55.81±9.70)分。AS患者血清DKK-1、IL-17水平與ESR、血清CRP水平BASDAI評分、BASFI評分呈顯著正相關關系(P<0.05)；AS患者血清VEGF-A水平與ESR、血清CRP水平BASDAI評分、BASFI評分無顯著的相關性(P<0.05)，見表3。

表3AS患者血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平與患者疾病活動程度的關系

Table3Relationship between serum DKK-1, VEGF-A and IL-17 levels and disease activity in AS patients

指標BASDAIBASFIESRCRPDKK-1 r值0.671 0.704 0.663 0.528 P值0.000 0.000 0.000 0.000VEGF-A r值0.204 0.152 0.091 0.127 P值0.084 0.291 0.421 0.336IL-17 r值0.711 0.615 0.639 0.577 P值0.000 0.000 0.000 0.000

3 討論

強直性脊柱炎屬于風濕病的范疇，是一種慢性疾病，也是自身免疫疾病，該病主要以脊柱為病變部位，病變涉及骶髂關節(jié)，引起脊柱僵硬和纖維化，并引起眼、肺、肌肉和骨骼的病理變化[5]。患者早期不一定會有癥狀出現(xiàn)，也有部分病人早期出現(xiàn)乏力、消瘦、長期或間斷低熱、厭食、輕度貧血等現(xiàn)象[6]。早期病變部位關節(jié)存在炎性疼痛，伴有關節(jié)周圍肌肉痙攣、僵硬，在清晨較為明顯，它也可以表現(xiàn)為夜間疼痛，隨著疾病發(fā)展，關節(jié)的疼痛減輕，脊柱節(jié)段和關節(jié)的運動受到限制和變形，并且后期整個脊柱和下肢出現(xiàn)僵硬和向前屈曲[7]。AS治療的目的在于控制炎癥，進而起到減輕或者緩解癥狀的作用，同時為了防止畸形，要注意在日常生活中保持正確姿勢，治療的藥物主要包括非甾體類抗炎藥、柳氮磺胺吡啶、甲氨蝶呤、腎上腺皮質激素、雷公藤多甙、生物制劑，使用何種藥物主要根據(jù)患者的實際情況，對脊柱嚴重變形的患者，在其情況穩(wěn)定后可采取手術治療[8]。

經(jīng)典型的Wnt信號通路是成骨細胞增殖、分化以及成熟的必需通路，而DKK-1是一種抑制骨形成過程相關通路的關鍵性因子，在抑制Wnt信號通路中具有重要意義[9]。VEGF-A是一種體內(nèi)含量較多且功能強大的促血管生長因子，該因子參與軟骨和骨的生成，其水平還與脊柱病變程度存在關聯(lián)，其含量越高提示脊柱病變越嚴重[10]。IL-17是T細胞誘導的炎癥反應的早期啟動因子，主要通過促進釋放前炎性細胞因子來激發(fā)炎癥反應，IL-17與受體結合后可通過MAP激酶途徑和NF-kB途徑發(fā)揮其生物學作用，加劇體內(nèi)炎癥程度[11]。AS組患者的血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平顯著高于健康組，差異具有統(tǒng)計學意義，該結果說明DKK-1、VEGF-A、IL-17與骨的形成、脊椎病變及炎癥反應之間存在密切聯(lián)系，因AS患者的脊柱病變和體內(nèi)炎癥反應明顯強于正常人群，因此各指標較正常人群高。

機體受到感染或組織損傷時血漿中CRP會急劇上升，進而激活補體和加強吞噬細胞功能，除去體內(nèi)的病原微生物及損傷、壞死及凋亡的細胞，在機體的天然免疫過程中發(fā)揮重要的作用[12]。臨床上常用ESR作為紅細胞間聚集性的指標，可用來反映身體內(nèi)部的某些疾病，當機體出現(xiàn)炎癥反應時，其含量呈現(xiàn)上升趨勢[13]。AS組患者的ESR、血清CRP水平顯著高于健康組，差異具有統(tǒng)計學意義，因AS患者體內(nèi)含有較多的炎癥因子，使機體出現(xiàn)強烈的炎癥反應及免疫應答，故與炎癥反應相關的ESR、CRP較正常人群高。

AS組患者的BASDAI評估值為(52.91±10.62)分、BASFI評估值為(55.81±9.70)分，上述評估值代表了患者其疾病活動程度處于較高的水平；AS患者血清DKK-1、IL-17水平與ESR、血清CRP水平BASDAI評分、BASFI評分呈顯著正相關關系，提示可通過血清DKK-1、IL-17水平反映疾病活動程度，檢測上述指標有助于判斷治療后的療效；AS患者血清VEGF-A水平與ESR、血清CRP水平BASDAI評分、BASFI評分無顯著的相關性，可能是因為VEGF-A水平的影響因素較多，故未明顯顯示各指標之間的相關性。

綜上所述，AS患者血清DKK-1、VEGF-A、IL-17的水平較健康人群顯著升高，其中血清DKK-1、IL-17水平還能反映患者的疾病活動程度，可將其用于患者的臨床病情判斷。