一種提升豬腸道黏膜免疫力的微生態制劑臨床試驗觀察

陸新章，洪永權，朱永軍，衛秀余

（1.上海市農業科學院，上海 奉賢 201415；2.上海市奉賢區動物疫病預防控制中心，上海 奉賢 201400）

腸道黏膜是動物體內最大的黏膜免疫器官，機體有70%的感染發生在黏膜上，黏膜接觸抗原后局部可產生各類抗體并分泌于分泌液中，形成抗原抗體復合物，阻礙有害菌與腸上皮細胞受體結合，刺激腸道黏膜黏液分泌并加速黏液層的流動，有效阻止有害菌的附著定植，完整健全的腸道黏膜免疫系統在對抗病毒侵染和轉移方面能夠發揮更大的作用。腸道黏膜受損造成黏膜免疫系統的不健全，腹瀉病毒極易侵染腸道表皮細胞，大量的有害菌也附著于腸道表皮細胞形成定植現象，并釋放出腸毒素，二者會干擾正常細胞的生長增殖，刺激細胞脫水釋放胞內離子和水分，最終導致腹瀉。為提高母豬和仔豬的免疫力，減少腹瀉，提高仔豬成活率，國內外研究者在藥物治療、營養調控、基因育種等方面進行了大量的研究，發現從根本上提高母豬和仔豬免疫力，就需要從改善腸道環境，保證母豬腸道微生物區系平衡，促進仔豬腸道正常發育來著手[1]。

因此，我們以具有黏膜免疫增強型乳酸菌“BLC-001”、特異性免疫功能乳酸菌“LP-11”、維生素、有機微量元素和葡萄糖等為主要成分的微生態制劑為研究對象，研究其對母豬和仔豬免疫力的影響，以及其在母豬上使用后是否可以減少母豬臨產前的腹瀉疫苗免疫次數，是否能夠在一定程度上降低仔豬的腹瀉率。

1 材料與方法

1.1 微生態制劑

特異性黏膜免疫微生態產品“安度”（以下簡稱安度）由山東寶來利來生物工程股份有限公司提供，主要成分是具有黏膜免疫增強型乳酸菌“BLC-001”、特異性免疫型植物乳桿菌“LP-11”、抗菌肽、枯草芽孢桿菌、凝結芽孢桿菌、丁酸梭菌、乳酸片球菌等有益微生物及其代謝產物，有機酸、生物活性因子等。“BLC-001”和“LP-11”乳桿菌轉入了特異性抗原基因片段，在腸道黏膜代謝產生樹突細胞誘導肽、白介素、細胞因子、腫瘤壞死因子等免疫物質并刺激機體產生特異性抗體[2]。

試驗豬由上海市農業科學院莊行試驗場提供。

病毒性腹瀉二聯弱毒疫苗由福州大北農生物科技有限公司提供。

試驗時間為2017年11月至2018年3月。

1.2 試驗豬的選擇與分組

選擇胎次和身體健康狀況相近的產前50 d左右的母豬100頭，按隨機區組設計分成兩組，每組50頭。試驗組母豬于產前40 d不進行病毒性腹瀉二聯弱毒疫苗的注射，在產前25 d進行“安度”的拌料飼喂，每頭10 g，并于產前20 d進行病毒性腹瀉二聯弱毒疫苗的注射；對所產仔豬在出生4 h后，每頭灌服“安度”2.5 g。對照組產前40 d和產前20 d均進行病毒性腹瀉二聯弱毒疫苗的注射，其他飼養管理條件一致。試驗從母豬產前45 d開始至哺乳期結束。母豬和仔豬營養水平見表1、表2。

表1 不同試驗階段母豬營養水平

表2 仔豬營養水平

1.3 飼養管理

試驗豬均采用相同的飼養管理和環境條件，試驗期間按豬場正常程序注射疫苗、驅蟲等，消毒和清潔衛生工作按豬場常規程序進行。

1.4 測定指標

1.4.1 母豬身體健康狀況測定 腹瀉頭次，采食量，母豬體況評分：在母豬斷奶時，由5名工作人員按1～5分對母豬的膘情進行評定，1分為極度消瘦，2分為消瘦，3分為適度，4分為肥胖，5分為過肥。

1.4.2 仔豬生長性能及健康狀況測定 記錄仔豬初生個體重與斷奶個體重，仔豬腹瀉狀況的評定：參照Kelly推薦的方法，觀察并記錄試驗期間每頭試驗豬每天的腹瀉情況，根據評分標準（表3），分別計算各組試驗豬的腹瀉指數，腹瀉指數=觀察記錄分數總和/觀察總天數。

表3 仔豬腹瀉程度的評分系統

仔豬皮毛發育狀況的評定：在仔豬斷奶前1 d，按1～5分對試驗豬的皮毛發育狀況進行評定，1分為皮毛非常粗糙，2分為皮毛粗糙，3分為皮毛較光滑，4分為皮毛光滑，5分為皮毛非常光滑并有光澤。

1.4.3 仔豬血清PEDV-IgA抗體檢測測定 分別于仔豬1、3、7、14日齡時在各組隨機選取100頭仔豬（每窩隨機2頭）采其前腔靜脈血液，進行仔豬PEDV-IgA抗體水平的檢測。

1.4.4 仔豬糞便菌群的測定 選擇仔豬腸道菌群中具有代表性的乳酸桿菌、大腸埃希氏菌進行培養和計數。分別于21 d和25 d在對照組和試驗組中選取50頭仔豬（每窩隨機1頭），對其新鮮的糞便進行收集。

1.5 統計分析

用SPSS軟件進行顯著性分析，結果用平均值±標準差來表示。

2 結果與分析

2.1“安度”對母豬健康狀況的影響

由表4可知，試驗組與對照組在母豬腹瀉頭次和斷奶后膘況上差異不顯著，每頭母豬在哺乳期的采食量試驗組比對照組提高 7.50%（P＜0.05），差異顯著。

表4 母豬健康狀況

2.2“安度”對仔豬生長性能及健康狀況的影響

由表5可知，對照組與試驗組仔豬初生個體重相差不大，試驗組比對照組在哺乳期日增重增加13.55%（P＜0.05），腹瀉指數降低 17.46%（P＜0.05），斷奶個體重提高 11.11%（P＜0.05），試驗組仔豬在哺乳期的存活率提高1.92個百分點。

表5 仔豬生長性能及健康狀況

2.3“安度”對仔豬血清PEDV-IgA抗體含量的影響

由表6可知，仔豬初生后第1天和第3天所有血清中均含有PEDV-IgA抗體，但試驗組仔豬體內PEDV-IgA抗體的含量均高于對照組，分別提高65.75%和 10.67%，均差異顯著（P＜0.05）；在第 7 天，所取樣品對照組有20頭豬未含有PEDV-IgA抗體，且試驗組比對照組PEDV-IgA抗體含量提高25.00%（P＜0.05）；仔豬 2 周齡，所取樣品對照組有50頭仔豬未含有PEDV-IgA抗體，試驗組均含有PEDV-IgA 抗體，且含量遠高于對照組（P＜0.05），也高于第3天和第7天試驗組本身仔豬體內PEDVIgA抗體含量。

表6 仔豬血清PEDV-IgA抗體含量

2.4“安度”對仔豬糞便菌群的影響

由表7可知，21 d時，對照組仔豬糞便大腸桿菌數顯著高于試驗組，高出 5.09%（P＜0.05）；乳酸桿菌數試驗組高于對照組，但差異不顯著（P＞0.05）；乳酸桿菌與大腸桿菌比例試驗組顯著高于對照組，高出 7.69%（P＜0.05），說明試驗組仔豬腸道更為健康。25 d時，對照組大腸桿菌數略高于試驗組，乳酸桿菌略低于試驗組，但都差異不顯著（P＞0.05），乳酸桿菌/大腸埃希氏菌差異不顯著（P＞0.05）。

表7 微生態制劑對仔豬糞便菌群的影響

3 討論

3.1 飼喂安度對母豬健康狀況的影響

腸道具有免疫作用，腸道菌群的區系平衡與腸道黏膜免疫力能否發揮作用息息相關，黏膜免疫增強型乳酸菌可在腸道分泌免疫因子，介導腸道黏膜免疫，全面激活免疫細胞、吞噬細胞、自然殺傷性細胞、T和B淋巴細胞等免疫細胞，發揮著提高機體免疫力，防止疾病發生的作用[3]。

通過在母豬產前飼喂微生態制劑，激活母豬的腸道黏膜免疫系統，使母豬在妊娠后期和哺乳期免疫機能得到提升，可以顯著提高生產后母豬的健康狀況，并有效提高其采食量。益生菌在其生長代謝過程中產生大量的物質，如細菌素、維生素、多糖、小分子肽類及酸性代謝產物等。這些物質有的具有直接的抗病毒活性[3]，有的可以拮抗、抑制病原微生物的生長；有的可以促進或提高宿主的免疫功能；有的可以為宿主直接利用，促進宿主對營養物質的消化吸收[4]。

3.2 飼喂安度對仔豬生長性能的影響

母豬的腸道黏膜免疫功能與下代有遺傳聯系和供長特性，即使胎兒階段腸道是無菌的，但后天建立的腸道菌群取決于胚胎時期腸道的健康形成[5]，而仔豬腸道免疫系統一般在4～7周齡時能基本發育成熟，哺乳期的仔豬自身的免疫力是極其有限的。腸道免疫功能在動物胎兒時期開始形成，應該從母體開始進行加強，保證母體腸道微生物區系平衡才能保證仔豬哺乳期的健康成長，降低腹瀉發生率和死亡率。

仔豬剛出生時腸道是處于無菌狀態的，隨著出生后與外界環境的接觸，細菌逐漸進入腸道，經過黏附和定植，從而建立了自身的腸道菌群平衡。仔豬出生后立即灌服一定劑量以乳酸菌為主的微生態制劑，可使有益菌及早地占據腸道的有效位點，定植于黏膜上皮細胞，產生定植抗力，可以有效防止致病菌的侵入，保護腸道的健康，減少腹瀉等疾病的發生[6-7]。本試驗研究表明，妊娠母豬產前飼喂添加微生態制劑，同時其所產仔豬于初生后飼喂微生態制劑的試驗組，仔豬的日增重顯著提高，哺乳期仔豬的腹瀉發病率有所下降、成活率有所提高，說明其健康狀況得到一定程度的改善。一方面因為試驗組母豬健康狀況和泌乳性能得到改善，使哺乳仔豬得到充足的營養；另一方面由于哺乳仔豬灌服了微生態制劑后，乳酸菌等有益菌得以在腸道定植繁殖，降低了腸道pH，防止有害菌的侵入，進而為仔豬的后續生長發育奠定了較好的基礎。

3.3 飼喂安度對哺乳仔豬血清PEDV-IgA抗體的影響

一般來說，仔豬流行性腹瀉在7日齡內最易感且損失最大，而仔豬產生免疫力至少需要7～10 d，還未等仔豬產生免疫力時仔豬已經感染死亡。因此，通過免疫仔豬獲得免疫力的主動免疫基本行不通。只有通過免疫母豬，使母豬獲得抵抗力，然后通過母乳將抵抗力傳遞給仔豬[8-13]。母豬初乳中IgG和IgA的量達到最高水平，這個水平能持續6 h，此后乳中IgG和IgA的數量急劇下降。仔豬血清中PEDV-IgA抗體是通過母乳傳遞給仔豬[14]，產前母豬口服安度，通過誘導黏膜免疫，激活體液免疫，使疫苗誘導的體液免疫應答更迅速、敏感，分泌更高含量的免疫球蛋白。因此本試驗中試驗組仔豬血清中的PEDV-IgA抗體有效水平可維持到14日齡以上，更好地保護仔豬抵御PEDV的感染。

3.4 飼喂安度對仔豬腸道菌群數量的影響

健康仔豬腸道中有害菌和有益菌應該處于一個動態平衡狀態，研究發現，在仔豬斷奶階段應用以乳酸菌為主的單一或復合益生菌能夠干預并糾正腸道微生態體系失衡現象，促進其生長發育[13-14]。Bon等研究發現，飼糧中添加釀酒酵母和乳酸菌可顯著減少糞便中大腸桿菌數量。Dong等研究發現，飼喂仔豬益生菌可以顯著降低糞便中大腸桿菌的數量，提高生長性能和免疫力。通過本試驗檢測發現，試驗組仔豬21 d乳酸桿菌與大腸桿菌比例顯著高于對照組，高出 7.69%（P＜0.05），益生菌在其生長代謝過程中產生大量的物質，這些物質有的可以促進或提高宿主的免疫功能；有的可以為宿主直接利用，促進宿主對營養物質的消化吸收[15-17]。試驗組仔豬腸道益生菌含量更高，說明試驗組仔豬腸道更健康，發生腸道疾病的風險更低。

4 小結

試驗結果表明，“安度”能夠提高母豬腸道黏膜免疫力，在減少病毒性腹瀉疫苗免疫次數的情況下、仍然給哺乳仔豬提供了較高水平的母源PEDV-IgA抗體，與對照組差異顯著；同時還能改善仔豬腸道益生菌分布，提升哺乳仔豬的免疫力，降低仔豬腹瀉率，提高仔豬存活率，對哺乳仔豬腸道微生態平衡系統的建設有很好促進作用。