大連地區豬細小病毒病精液帶毒情況分析

趙景利/遼寧省大連市長海縣動物衛生監督所

豬細小病毒病又稱豬繁殖障礙病，臨床癥狀主要以懷孕母豬發生流產、死胎、木乃伊胎為主，對生豬養殖造成重大危害。大連地區作為生豬養殖的重點區域，養殖數量大，種類多，雖然進行了多年的疫苗免疫，但豬細小病毒病對大連地區養豬業的威脅依舊存在，而帶毒精液則是豬細小病毒傳播的重要途徑。

根據豬細小病毒精液傳播的特點，如何在傳播途徑上對豬細小病毒進行控制，就成為豬細小病毒防控的另一種思路。基于這一觀點，大連市動物疫病預防控制中心對大連區域內21家種豬場進行了精液采集，對采集的精液進行了豬細小病毒的病原檢測，現將檢測情況報告如下。

一、材料與方法

1.精液樣品。從大連地區21家種豬場采集了精液樣品750份，其中原精液450份，經1：5稀釋16～18℃保存不超過3d的精液300份，均-70℃保存。

2.試劑。豬細小病毒核酸（PPV）檢測試劑盒（批號：20171114）：中山大學達安基因股份有限公司；核酸提取試劑盒（產品批號20180503）：上海拜諾生物科技有限公司。

3.主要儀器。熒光定量PCR儀（型號QuantStudio5）：美國Thermo Fisher科技公司；高速冷凍離心機（型號3K-15）：德國SIGMA公司；核酸提取儀（型號King Fisher Flex）：美國Thermo公司。

4.試驗過程

1）將采集的精液樣品放置在-70℃和37℃的環境中反復凍融3次，用高速冷凍離心機以13000r/min離心3min，取上清液。

2）按核酸提取盒中的操作說明進行核酸提取。取50uL上清液加入到已經配好試劑的sample板中，按順序放入到核酸提取儀中，提取完成后，取出elution板。板內液體即為核酸。

表1 檢測結果

3）將提取的核酸按PPV核酸檢測試劑盒進行熒光PCR檢測。

4）當陰性質控品FAM檢測通道無擴增曲線，且陽性質控品FAM檢測通道有擴增曲線，同時Ct值≤32時，實驗結果成立。當檢測樣品有典型擴增曲線，并且Ct值≤38時，可判為樣品PPV核酸陽性，如樣品Ct值＞38或無Ct值時，可判為樣品PPV核酸陰性。

二、結果與分析

1.結果。對采集的750份精液進行檢測其結果為：在450份原始精液中，檢出陽性樣品13份，陽性率為2.9%；在300份稀釋精液中，沒有檢出陽性樣品（見表1）。

2.分析。通過對采集的750份精液進行免疫情況調查，了解到這21家種豬場豬細小病毒病免疫使用的都是豬細小病毒滅活苗，所以排除了因為疫苗免疫而造成的假陽性結果。經分析出現這一結果的原因可能有以下幾點：1）在原精中的陽性檢出率較低，而在稀釋后的精液中沒有檢出陽性樣品。2）由于對豬細小病毒病的免疫較為重視，日常疫苗接種及時有效，免疫效果較好。3）在稀釋精液中，由于稀釋液中含有抑制或殺滅病原微生物的成分，所以在稀釋精液中，沒有檢出豬細小病毒病原陽性樣品。

三、討論與小結

大連地區長期以來對豬細小病毒病的防控采取以免疫為主，結合實驗監測、流行病學調查等措施，從而防止了豬細小病毒病大規模的暴發和流行。可是由于豬細小病毒病的流行和傳播特點，還是難以從根本上消除豬細小病毒病，但是隨著近幾年大連地區對養殖戶的宣傳教育，接種疫苗、自繁自養的理念被廣大養殖戶采納接受，通過實驗可知，在種豬精液中攜帶豬細小病毒病的精液數量較少，豬細小病毒病通過精液傳播的風險性大大降低。