豬圓環(huán)病毒2型桿狀病毒載體滅活疫苗臨床免疫效果比較

劉國(guó)民 宋慶慶 劉玉梅 李紅炳 林文耀 張彥婷 娜仁高娃

1.金宇保靈生物藥品有限公司

2.云南生物科技有限公司

豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）是引起斷奶豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）的主要病原。被PCV2感染的患病豬只主要表現(xiàn)生長(zhǎng)遲緩、漸進(jìn)性消瘦、均勻度差等現(xiàn)象。除了上述癥狀以外，PCV2還與豬皮炎腎病綜合征（PDNS）、豬呼吸道疾病綜合征（PRDC）以及繁殖障礙等密切相關(guān)。因此，有學(xué)者將這些與PCV2有關(guān)的疾病統(tǒng)稱為豬圓環(huán)病毒病（PCVD）。目前，通過國(guó)內(nèi)外報(bào)道發(fā)現(xiàn)PCV2在豬群中的感染非常普遍。因此給養(yǎng)殖戶造成的直接或間接經(jīng)濟(jì)損失一直居高不下。疫苗免疫接種是有效預(yù)防該病的方法之一。目前，我國(guó)上市的豬圓環(huán)病毒疫苗有30多種，商品化的疫苗之多，以及制造工藝不同，這給養(yǎng)豬企業(yè)篩選優(yōu)質(zhì)的圓環(huán)疫苗帶來一些困難，為了觀察不同疫苗的臨床效果，我們進(jìn)行了本次實(shí)驗(yàn)。

一、材料與方法

1.材料

1）試驗(yàn)用疫苗。對(duì)照組：豬圓環(huán)病毒 2 型滅活疫苗（WH株），商品名：科圓寧。試驗(yàn)組：由金宇集團(tuán)揚(yáng)州優(yōu)邦公司生產(chǎn)商品名：圓立優(yōu)，圓立優(yōu)生產(chǎn)系沿用金宇口蹄疫多級(jí)全懸浮培養(yǎng)技術(shù)，采樣用sf9 昆蟲桿狀病毒載體表達(dá)，實(shí)現(xiàn)抗原的高效表達(dá)。豬圓環(huán)病毒Cap蛋白含量≥50ug/頭份，疫苗總蛋白含量＜300μg/mL，而且病毒培養(yǎng)物經(jīng)過先進(jìn)的多級(jí)純化工藝后獲得精制抗原，雜蛋白清除率超過99%。

2）試驗(yàn)豬場(chǎng)選擇。為了驗(yàn)證圓立優(yōu)的臨床使用效果，我公司在全國(guó)范圍內(nèi)開展了大規(guī)模的臨床試驗(yàn)，在試驗(yàn)期間我們分別對(duì)國(guó)內(nèi)、國(guó)外圓環(huán)病毒疫苗進(jìn)行了大量的對(duì)比實(shí)驗(yàn)（具體試驗(yàn)區(qū)域參考圖1），本試驗(yàn)數(shù)據(jù)是金宇在云南省開展的部份數(shù)據(jù)。選擇云南省1000以上的規(guī)模豬場(chǎng)做為試驗(yàn)對(duì)象，同時(shí)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均在相同的條件下飼養(yǎng)管理，不改變本場(chǎng)的免疫程序，按照各公司推薦的免疫程序進(jìn)行接種。試驗(yàn)組：金宇組推薦14日齡接種一頭份圓立優(yōu)；對(duì)照組：按照競(jìng)爭(zhēng)廠家推薦程序免疫進(jìn)行免疫。免疫后通過觀察生產(chǎn)指標(biāo)（日增重、料肉比、死亡率、排毒量、抗體水平等）進(jìn)行對(duì)比分析來評(píng)價(jià)疫苗使用效果，具體的試驗(yàn)方案如下。

圖1 圓立優(yōu)產(chǎn)品試驗(yàn)分區(qū)

2.方法

1）試驗(yàn)動(dòng)物分組方案。選取1胎初產(chǎn)母豬15窩，2胎以上經(jīng)產(chǎn)母豬20窩，每窩選出4頭公仔豬、4頭母仔豬,隨機(jī)分成A、B兩組，在免疫圓環(huán)疫苗前仔豬稱重，記錄每一頭仔豬重量，計(jì)算記錄每組均重；在60日齡時(shí)再次稱重，記錄平均體重，計(jì)算出增重，同時(shí)統(tǒng)計(jì)仔豬發(fā)病率及淘汰率。A組為現(xiàn)行疫苗對(duì)照組，B組為圓立優(yōu)試驗(yàn)組。

2）圓環(huán)疫苗接種方案。A組與B組疫苗接種方案如表1。

表1 豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗臨床免疫方案

3）樣品采集。在14d以前以及在免疫后30d、免后90d分別采血，同時(shí)采集糞樣。

4）圓環(huán)抗體、糞樣排毒量檢測(cè)。圓環(huán)病毒抗體由云南正大動(dòng)物保健中心檢測(cè)；圓環(huán)病毒糞樣檢測(cè)由揚(yáng)州優(yōu)邦公司檢測(cè)。

3.統(tǒng)計(jì)分析

通過血清來檢測(cè)抗體水平，以確定母源抗體水平和免疫抗體水平整齊度；通過PCR方法檢測(cè)糞樣中的病毒，以監(jiān)測(cè)帶毒排毒狀況。對(duì)照組與試驗(yàn)組所有數(shù)據(jù)（體重、日增重、死亡率）用SPSS17.0軟件進(jìn)行系統(tǒng)分析，并進(jìn)行顯著性分析，最終綜合評(píng)估圓環(huán)疫苗免疫效果。

二、結(jié)果與分析

1.仔豬14日齡免疫圓環(huán)疫苗后進(jìn)行血清學(xué)抗體評(píng)估。試驗(yàn)A組、B組：免前14d、一免后30d、一免后90d抗體檢測(cè)數(shù)據(jù)具體檢測(cè)結(jié)果詳見表2、圖2。

從表2圖2中免前抗體數(shù)據(jù)分析可知：A組抗體陽性率高于B組，因?yàn)槊馇皵?shù)據(jù)是根據(jù)豬群實(shí)際情況隨機(jī)抽取的血樣，由于豬群個(gè)體的原因，免疫前不同仔豬的抗體水平有一定差異。為了體現(xiàn)金宇疫苗的優(yōu)勢(shì)，在分組過程中讓A組母源抗體好一些，而B做母源抗體稍低一些，但通過統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)A組與B 組之間母源抗體差異不顯著（P＜0.05）。

表2 云南某規(guī)模化豬場(chǎng)圓環(huán)抗體檢測(cè)結(jié)果比較

圖2 某規(guī)模化豬場(chǎng)圓環(huán)抗體（s/p值）檢測(cè)結(jié)果比較

從表2圖2中一免后30d抗體數(shù)據(jù)分析可知：B組變異系數(shù)與A組變系數(shù)比較差異不顯著（P＜0.05），但抗體平均值和抗體陽性率B組明顯優(yōu)于A組，而且差異顯著（P＜0.05）。從S/P值數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)B組抗體數(shù)據(jù)明顯優(yōu)于A組，而且差異顯著（P＜0.05）。

從表2圖2中一免后90d抗體數(shù)據(jù)分析可知：B組S/P明顯優(yōu)于A組數(shù)據(jù)，而且B組S/P穩(wěn)定1～1.5之間，抗體極差異顯著（P＜0.01），說明豬群免疫圓環(huán)疫苗后B組圓環(huán)抗體相對(duì)穩(wěn)定，從而間接說明B組疫苗質(zhì)量?jī)?yōu)于A組疫苗。

2.試驗(yàn)仔豬免疫前后圓環(huán)病毒排毒量監(jiān)測(cè)。從免疫前、免疫后30d、90d抗原檢測(cè)結(jié)果分析來看，仔豬出生2周時(shí)剛開始進(jìn)行疫苗免疫，本場(chǎng)存在豬圓環(huán)病毒2型野毒感染情況，但感染率并不高。本豬場(chǎng)免疫圓環(huán)疫苗后90d，對(duì)34頭仔豬進(jìn)行檢測(cè)，其中僅有3頭（A4、A16和B19）抗原檢測(cè)為明顯陽性，其余均為弱陽性，說明豬圓環(huán)病毒2型疫苗免疫后90d可以有效地清除體內(nèi)的抗原，使用疫苗后可以有效地遏制抗原的擴(kuò)散和感染。從表3、圖3～5中圓環(huán)病毒排毒量分析統(tǒng)計(jì)分析可知：免疫前A組與B組之間差異不顯著（P＞0.05）；一免后30d、90d B組排毒量明顯低于A組，而差異不顯著（P＜0.05），說明豬群免疫圓環(huán)疫苗后能有效地壓制圓環(huán)病毒的感染，而且從實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)B組疫苗好于A組疫苗。

表3 試驗(yàn)豬群免疫前后圓環(huán)病毒排毒統(tǒng)計(jì)情況

圖3 免前14d檢測(cè)圓環(huán)抗原情況 ，豬群有感染

圖4 免后5周檢測(cè)圓環(huán)抗原情況，豬群感染比例降低

3.試驗(yàn)豬群生產(chǎn)成績(jī)?cè)u(píng)估

1）免疫后30d體重增長(zhǎng)差異分析（結(jié)果見表4、表5）。從表4中可以看出單尾檢驗(yàn)和雙尾檢驗(yàn)均小于臨界值，即兩組仔豬的平均增長(zhǎng)體重?zé)o顯著差異，但免后30d B組平均增重高于A組0.27kg/頭。

表4 免疫后30d體重增長(zhǎng)差異分析

2）免疫后90d體重增長(zhǎng)差異分析。從表5中可以看出單尾檢驗(yàn)和雙尾檢驗(yàn)均小于臨界值，即兩組仔豬的平均增長(zhǎng)體重?zé)o顯著差異，但免后90dB組平均增重高于A組9.29kg/頭，即疫苗免疫后90d B組的平均增重每頭高于A組9.29kg，結(jié)合當(dāng)前豬肉價(jià)格預(yù)計(jì)每頭可增加150元左右（按16元/kg計(jì)算）。且B組仔豬體重離散度低、體重較均一。

表5 免疫后4周體重增長(zhǎng)差異分析

三、討論

1.仔豬免疫圓環(huán)病毒疫苗后血清學(xué)檢測(cè)和病毒血癥。豬群的健康是規(guī)模化豬場(chǎng)穩(wěn)定生產(chǎn)的前提，而豬圓環(huán)病毒病控制的好壞直接關(guān)系到整個(gè)豬群的健康狀況。通過流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，幾乎所有的豬場(chǎng)都存在豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）感染，而且保育仔豬和生長(zhǎng)育肥豬感染率最高，很多豬場(chǎng)達(dá)100%，而圓環(huán)陰性場(chǎng)全國(guó)屈指可數(shù)，因此PCV2防控非常嚴(yán)峻。疫苗免疫能降低豬群母源抗體的下降速度,在一定程度上可減少群體向外排毒的機(jī)會(huì),降低整個(gè)豬群和環(huán)境中的PCV2感染壓力,達(dá)到預(yù)防PCVD的目的。目前，對(duì)于圓環(huán)病毒抗體水平雖然說法不一，但肯定越高越好。姜平研究表明，PCV2抗體水平越高，病毒血癥水平越低，抗體含量與病毒攻毒保護(hù)成正相關(guān)。刑剛研究也表明，圓環(huán)病毒疫苗效果可以分析抗體水平變化進(jìn)行初步評(píng)估，仔豬母源抗體產(chǎn)后1周左右達(dá)到峰值，6周開始降到保護(hù)線以下，8周則是圓環(huán)病毒的感染高峰期，在8周進(jìn)行監(jiān)測(cè)能夠真實(shí)反映圓環(huán)病毒疫苗免疫抗體的水平。從本次抗體檢測(cè)結(jié)果分析可知，B組一免后30d、90d抗體數(shù)據(jù)明顯優(yōu)于A組數(shù)據(jù)，而且差異顯著（P＜0.05），從抗體數(shù)據(jù)和排毒量數(shù)據(jù)綜合分析說明B組疫苗質(zhì)量?jī)?yōu)于A組疫苗。綜合考慮B組疫苗免疫效果明顯優(yōu)于A組疫苗。

2.生產(chǎn)性能評(píng)估與經(jīng)濟(jì)效益分析。目前，圓環(huán)疫苗臨床效果評(píng)價(jià)還存在一定爭(zhēng)議，但現(xiàn)階段大部養(yǎng)豬場(chǎng)通過實(shí)驗(yàn)室手段，同時(shí)統(tǒng)計(jì)成活率、出欄天數(shù)、飼料轉(zhuǎn)化率、用藥成本、豬群整齊度和經(jīng)濟(jì)效益分析等指標(biāo)來綜合評(píng)價(jià)圓環(huán)病毒疫苗效果。臨床研究也表明，商品化的PCV2疫苗能有效的控制圓環(huán)病毒相關(guān)疾病，接種PCV2疫苗可減輕病毒血癥，增加日增重。從本次試驗(yàn)結(jié)果可知，在整個(gè)試驗(yàn)階段B組豬的均勻度、死亡率好于A組豬群而且差異顯著；從保育階段數(shù)據(jù)分析可知，B組平均重比對(duì)照A組多9.29kg。對(duì)于一個(gè)年出欄1萬頭豬場(chǎng)來講，平均每頭豬增重9.29Kg其經(jīng)濟(jì)收入是可觀的。因此，對(duì)于規(guī)模化豬場(chǎng)來講選擇一個(gè)高性價(jià)比的圓環(huán)疫苗，對(duì)提高豬場(chǎng)的生產(chǎn)成績(jī)及整體效益非常關(guān)鍵。

綜上所述，從抗體數(shù)據(jù)、病毒排毒量、生產(chǎn)數(shù)據(jù)綜合分析可知，B組明顯優(yōu)于試驗(yàn)對(duì)照組，而且B組在免疫后90d能明顯的降低病毒血癥，豬群感染比例明顯低于對(duì)照A組。目前，對(duì)于市面銷售的圓環(huán)病毒疫苗來講，有全病毒疫苗、真核表達(dá)的亞單位疫苗、原核表達(dá)的亞單位疫苗，其臨床效果排序，真核表達(dá)的亞單位疫苗好于全病毒疫苗和原核表達(dá)的亞單位疫苗。