奶牛綠膿桿菌的分離與鑒定

買(mǎi)爾哈巴·吾恩阿里比

（伊寧市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，新疆伊寧 835000）

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

2019年5月15日，伊寧市某奶牛場(chǎng)一頭奶牛于清晨4時(shí)開(kāi)始陰門(mén)流出大量血液，但牛無(wú)臨產(chǎn)癥狀，獸醫(yī)對(duì)牛進(jìn)行了引產(chǎn)，該牛產(chǎn)下一母犢為死胎，產(chǎn)后該牛飲食欲廢絕，至5月14日胎衣未下，且陰門(mén)流出紅褐色血液。14日晚12時(shí)該牛出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸困難，且有疼痛表現(xiàn)，獸醫(yī)對(duì)牛進(jìn)行了強(qiáng)心補(bǔ)液及抗生素治療，在輸液過(guò)程中牛因心衰竭呼吸困難而死亡。

2 剖檢變化

肺、子宮子葉嚴(yán)重感染，出血性壞死，顏色發(fā)黑，切開(kāi)肺流出黑褐色的液體，小腸黏膜充血、出血嚴(yán)重。其他器官基本正常。

3 病料采集

無(wú)菌采取病死牛的病理變化明顯的肺、子宮子葉等器官進(jìn)行分離鑒定。

4 病原菌分類(lèi)與鑒定

4.1 病原菌的分離培養(yǎng)

4.1.1 組織涂片

取病牛的肺及子宮子葉組織分別涂片，革蘭氏、瑞特氏、堿性美藍(lán)染色，鏡檢。在肺組織革蘭氏染色涂片中可見(jiàn)大量?jī)啥蒜g圓，無(wú)芽孢及莢膜、單在或成對(duì)革蘭氏陰性中等大小桿菌，美蘭染色可見(jiàn)著色不均的顆粒或兩端濃染中等桿菌。子宮子葉組織革蘭氏染色可見(jiàn)大量革蘭氏陰性大、中等桿菌，革蘭氏陽(yáng)性球菌及大桿菌[1]。

4.1.2 增菌培養(yǎng)

將采集的肺、子宮子葉組織分別接種于普通肉湯、厭氣肝湯，37℃培養(yǎng)24小時(shí)，觀察生長(zhǎng)情況。結(jié)果肺組織的肉湯培養(yǎng)物渾濁、在表面形成初期為綠色后期變成淡褐色的薄膜，培養(yǎng)物發(fā)綠，染色鏡檢培養(yǎng)物可見(jiàn)革蘭氏陰性中等桿菌。在對(duì)子宮子葉厭氣肝湯培養(yǎng)物的染色鏡檢中可見(jiàn)大量革蘭氏陰性大、中等桿菌，革蘭氏陽(yáng)性球菌及大桿菌。

4.1.3 純培養(yǎng)及分離培養(yǎng)

取肺組織肉湯培養(yǎng)物在普通培養(yǎng)基上劃線進(jìn)行純培養(yǎng)。取子葉培養(yǎng)物在鮮血瓊脂上用焦性沒(méi)食子酸法進(jìn)行厭氧純培養(yǎng)和在普通瓊脂上劃線進(jìn)行需氧菌的純培養(yǎng)。染色鏡檢，可見(jiàn)四株菌，即革蘭氏陰性大，中等桿菌，革蘭氏陽(yáng)性球菌及大桿菌。無(wú)菌取上述四株菌的單個(gè)菌落分別接種于普通瓊脂，鮮血瓊脂，SS瓊脂，普通肉湯，厭氣肝湯，37°C培養(yǎng)24小時(shí)，肺組織的培養(yǎng)物在普通瓊脂上長(zhǎng)出，較大、光滑、扁平、濕潤(rùn)、邊緣整齊的菌落，培養(yǎng)物發(fā)綠色，肉湯培養(yǎng)物渾濁呈黃綠色。子葉培養(yǎng)物在SS培養(yǎng)基上長(zhǎng)出粉紅色、較大、隆起邊緣整齊的菌落。在普通培養(yǎng)基上長(zhǎng)出針尖大小的灰白色菌落，在鮮血培養(yǎng)基上進(jìn)行的厭氧培養(yǎng)長(zhǎng)出不容血且邊緣不整齊的較大菌落。

4.2 生化鑒定

取上述致死小白鼠菌株的普通瓊脂培養(yǎng)物進(jìn)行氧化酶實(shí)驗(yàn)，結(jié)果為陰性。取培養(yǎng)物接種ATB EXPRESSION細(xì)菌自動(dòng)鑒定及藥敏測(cè)試儀ID32E試條上37℃培養(yǎng)24h，上機(jī)鑒定，其結(jié)果見(jiàn)表1。

表1

5 防制

（1）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，立即停止飼喂發(fā)霉麩皮，避免因不斷攝入發(fā)霉飼料產(chǎn)生的有毒物質(zhì)引起中毒，為綠膿桿菌的感染提供機(jī)會(huì)。

（2）牛舍內(nèi)應(yīng)用福爾馬林徹底消毒，搞好環(huán)境衛(wèi)生。

（3）本實(shí)驗(yàn)室的藥敏結(jié)果顯示，該菌對(duì)環(huán)丙沙星最敏感，其次為羧芐青霉素、諾氟沙星。氧氟沙星，慶大霉素效果不明顯。對(duì)頭孢拉定、氨芐西林、青霉素等藥物不敏感。