大葉鱗毛蕨的生藥學研究

1.昆藥集團股份有限公司藥物研究院，云南 昆明 650100；2.大理市鳳儀衛生院，云南 大理 671005

貫眾為常用中藥，現代藥理研究表明具有抗病毒、抗細菌、抗腫瘤及止血等作用，由于大葉鱗毛蕨形態特征、藥材的功效主治及應用與貫眾相似，同時全國各地又普存同名異物、地區性習慣用藥、人為摻假等現象，使其在云南民間常作貫眾的習用品入藥[1]。大葉鱗毛蕨具有清熱解毒、散瘀止血之功效，用于治斑疹毒、痢疾，金瘡、紅崩、帶下、產后出血、衄血等[2]。經查閱文獻資料，目前對本品的研究僅見有染色體數目的報道研究[3]，而對其進行生藥學研究尚未見報道，對大葉鱗毛蕨進行生藥學研究，為其鑒別、質量標準制定及深入研究和開發利用提供理論依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Nikon E100型生物顯微鏡、Nikon Eclipse 80i型高級研究用正置(明場微分干涉系統)生物數碼攝影顯微鏡、DXM1200超高品質顯微攝影數碼相機、Nikon D-3000數碼單反相機、Adobe Photoshop8.0簡體中文版圖形處理軟件、電熱恒溫水浴鍋DK-98-Ⅱ、NOVA NANOSEM 450 型掃描電鏡。

1.2 材料 水合氯醛試液、稀甘油試液、蒸餾水、(濃)鹽酸(A.R)(成都市欣海興化工試劑廠)、乙醇(A.R)(天津市風航化學試劑科技有限公司)、甲醇(A.R)(重慶川江化學試劑廠)、正丁醇(天津市博迪化工有限公司)、固綠、番紅、中性樹膠、固體石蠟。

實驗材料采自大理市漾濞縣，原植物經云南大學陸樹剛教授鑒定為鱗毛蕨科植物大葉鱗毛蕨Dryopterismarginata(C. B. Clarke) Christ.

2 方法

2.1 性狀鑒別 通過眼看、鼻聞和口嘗的方法，如眼看藥材形狀、大小、外表、斷面、顏色、質地。鼻聞和口嘗藥材氣味。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 根莖和葉柄 將采集的新鮮根莖和葉柄分開固定于FAA固定液中，用常規石蠟切片法即脫水、浸蠟、包埋、切片、脫蠟、染色、封片。(切片厚度8～12 μm，用不同濃度的二甲苯和二甲苯與無水酒精不同比例的混溶液脫蠟，番紅和固綠染色，加拿大樹膠封片)；鱗片及葉上下表皮用顯微鏡下觀察其組織構造、細胞特征及內含物特征，拍攝其顯微照片，圖片、數據處理分析。

2.2.2 鱗葉 取干凈的載玻片，中間滴一點清水，再將清理干凈的鱗片用鑷子放在水滴上，然后進行展平，之后壓上蓋玻片，制成臨時裝片(視鱗片的大小選擇一張裝片放幾個鱗片，通常3～5個鱗片)，體式顯微鏡下觀察，并用Nikon E100型生物顯微鏡拍照觀察，每個物種觀察同一部位3～5個鱗片。

2.2.3 葉上下表皮 取骨碎補類植物已固定的葉片中段，在水中反復沖洗后用開水浸泡，于Jeffery溶液中浸泡2～24 h，具體時間因材料而異，需要在浸泡過程中進行觀察，直至上下表皮能輕易分開為止。將材料放在清水中漂洗干凈，取干凈的載玻片于中央滴一滴清水，然后將分離后的葉表皮用解剖針挑起置于水滴中，吸走多余水分，表皮自動展平后蓋上蓋玻片。在Nikon Eelipse 80i生物數碼顯微鏡下觀察，拍照。

2.2.4 孢子 從野外采集的藥用骨碎補類植物，選擇有成熟孢子的標本，用解剖針刺破孢子囊獲取孢子，獲取一定數目(不少于50粒)的孢子，在光學顯微鏡下進一步檢查孢子的顏色、成熟情況等，選取成熟度好、顏色均勻、發育良好的孢子，均勻地撒在事先貼好雙面膠的樣品臺上。取樣過程中嚴格避免不同種間孢子的污染。每一個樣品采集完孢子后，完成所取材料的標本相關信息的記錄。將取好的孢子材料固定在樣品臺上，經噴金后置于NOVA NANOSEM 450型掃描電鏡下觀察。鍍金時長為30 s。鍍金結束后取出樣品臺，置于NOVA NANOSEM 450掃描電子顯微鏡下進行觀察。觀察過程中選擇發育良好、具有代表性的孢子對其裂縫情況、近極面和遠極面的紋飾情況進行拍照，同時每個樣品選取不少于20個孢子來測量其極軸長和赤道軸長。

3 結果

3.1 性狀鑒別 干燥根莖呈長圓柱形或棱柱狀，多彎曲，上端稍大。長10～25 cm，直徑5～8 cm。表面密被深棕色的鱗片，脫去鱗片之表面呈黃綠色。具葉柄殘基及須根，表面呈瘤狀分歧。質硬，不易折斷，斷面多為黃褐色，可見多數黃白色小點(分體中柱)，排成不規則環狀。氣微弱而特異，味微澀。(如圖1)

3.2 顯微鑒別

3.2.1 根莖橫切面 不規則形。鱗片基著生于表皮層深凹陷處，由3～5列細胞構成，細胞長方形或多角形。外層為數列厚壁細胞，棕褐色。基本薄壁組織細胞類圓形或不規則形，壁略波狀彎曲。內皮層外側一列細胞的內壁增厚為7～10 μm，可見孔溝。內皮層為一列長方形細胞，可見凱氏點。周韌型維管束(分體中柱)21～28個，類圓形或長橢圓形，直徑125～586 μm，不規則排列，在分體中柱外側有較多的葉跡維管束。木質部由多角形管胞及非木化纖維狀細胞構成，管胞直徑25～83.4 μm。見圖2、圖3和圖4。

3.2.2 葉柄橫切面 類橢圓形，直徑約為6.5 mm，中部一處深陷明顯。表皮細胞類圓形，長方形，排列較平整，外被角質層。下皮為5～14列多角形厚壁細胞。基本薄壁組織細胞類圓形或多角形。類圓形周韌維管束(分體中柱)4～6個，直徑120～540 μm，呈“U”字型排列，近深陷明顯腹面兩個較大。每一維管束內皮層外側一列細胞內壁稍增厚。內皮層細胞為一列扁小的細胞，可見凱氏點。木質部由管胞和非木化纖維構成。見圖5。

3.2.3 鱗片 長圓形，先端漸尖，長2.3～3.6 cm，基部寬8～12 mm。深棕色，邊緣全緣。鱗片細胞類長方形，長85～220 μm，寬40～65 μm，壁略彎曲或平直。見圖6、圖7、圖8。

3.2.4 葉上下表皮 上下表皮細胞大小不均，形狀不規則，細胞垂周壁呈深波狀。氣孔分布于下表皮，氣孔器以長軸方向平行均勻分布，主脈處的氣孔長軸方向與葉脈處走向相同，氣孔器是由2個大小相等的副衛細胞包圍2個腎形的保衛細胞組成，保衛細胞與副衛細胞長軸方向一致，屬于平列型氣孔器。見圖9、圖10。

3.2.5 孢子囊及孢子 孢子囊呈橢球形，靠近孢子囊柄的一端較小，另一端較大；環帶隆起，類型為垂直環帶或縱行環帶，環帶與孢子囊相連。孢子呈類橢圓形，大小為26.03 μm×34.03 μm。孢子表面瘤狀、雞冠狀突起，具球形或近球形較大的突起，均勻分布在孢子表面或相連在一起。

4 討論

通過來源鑒別、性狀鑒別、顯微鑒別方法研究大葉鱗毛蕨的生藥學特征，結果顯示有顯著的性狀及顯微鑒別特征：藥材具葉柄殘基及須根，表面呈瘤狀分歧；根莖橫切周韌型維管束(分體中柱)21～28個，類圓形或長橢圓形，不規則排列，在分體中柱外側有較多的葉跡維管束；葉柄橫切周韌維管束(分體中柱)5個，呈“U”字型排列；鱗片長圓形，先端漸尖，深棕色，邊緣全緣；葉下表皮的氣孔器是由2個大小相等的副衛細胞包圍2個腎形的保衛細胞組成；孢子囊環帶類型為垂直環帶或縱行環帶，孢子類橢圓形，孢子表面瘤狀、雞冠狀突起，具球形或近球形較大的突起。大葉鱗毛蕨的藥材形狀和顯微形態特征，可作為該藥材真偽鑒別及質量標準制訂的理論依據。

為確定大葉鱗毛蕨根莖和葉柄的分體中柱數量，分別對不同植株，不同粗細根莖及葉柄制作了徒手切片，對照觀察并統計得出：根莖分體中柱為21～28個。葉柄分體中柱為4～6個，且靠近根莖端較多。大葉鱗毛蕨根莖和葉柄的分體中柱個數、形狀和排列方式是鑒別的重要形態特征之一。