某區(qū)120例男性不育患者的細(xì)胞遺傳學(xué)分析

鄢 磊* 張雪瑞 曹東華

（1 大連市婦幼保健院遺傳代謝實(shí)驗(yàn)中心，遼寧 大連 116001；2 大連市婦幼保健院遺傳代謝中心，遼寧 大連 116001）

近來隨人們社會壓力、環(huán)境污染及食品安全等多方面影響，使不孕不育的患者病發(fā)率呈大幅度的上升趨勢。給生殖醫(yī)學(xué)健康帶來許多問題。性染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常可引起性器官結(jié)構(gòu)或功能異常，可引發(fā)性器官發(fā)育不全，染色體病患的主要臨床特征一般發(fā)生病患的本身帶有先天性多發(fā)畸形，智力發(fā)育和生長發(fā)育都比較遲緩，還存在特殊性的改變皮膚紋理；內(nèi)外生殖器存在異常或畸形例如性腺的不良發(fā)育，第二特征不發(fā)育等[1-2]。不育癥作為全世界主要的一個醫(yī)學(xué)社會問題，在育齡階段約8%夫婦患不育病，但約多由男性因素引發(fā)。無精子癥作為男性不育首因。男性不育影響因素之一為生精障礙，臨床表現(xiàn)有無精子、嚴(yán)重少精子、弱精子。致男性不育原因很多，目前細(xì)胞遺傳學(xué)研究顯示染色體異常作為不孕不育的一個首要因素。在男性不育患者中病發(fā)率較高，據(jù)世界衛(wèi)生統(tǒng)計，已婚夫婦不育不孕癥占比達(dá)10%～15%，其中染色體異常率可以達(dá)到3.5%左右，逐年呈上升趨勢。目前治療染色體異常病尚未存在有效防治手段，且遺傳因素致男性不育臨床就診除做免疫、內(nèi)分泌及必要的常規(guī)檢查外，染色體相關(guān)檢查具有十分必要性，明確病因做好優(yōu)生及遺傳咨詢工作[3]。有效避免患者盲目治療，對指導(dǎo)患者選取可行的臨床輔助手段解決生育問題，預(yù)防染色體異常患兒出生，有助于促進(jìn)指導(dǎo)人們優(yōu)生優(yōu)育，大大提高生殖健康水平。

隨科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域不斷大力發(fā)展，人工授精、卵細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)單精子注射技術(shù)、胚胎移植等輔助生殖技術(shù)可有利于解決男性不育問題。男性生殖主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、下丘腦、垂體、睪丸性軸系內(nèi)分泌激素調(diào)節(jié)，經(jīng)精子發(fā)生、精子成熟、精子運(yùn)輸、精子獲能和精子頂體反應(yīng)等發(fā)生系列生理活動。精子發(fā)生因受諸多有序表達(dá)基因控制，染色體的結(jié)構(gòu)、數(shù)目畸變對這些基因功能造成影響。對嚴(yán)重少或弱精子癥、無精子癥者常規(guī)行染色體核型分析有助于臨床診斷與處理。對男性不育患者進(jìn)行細(xì)胞遺傳學(xué)分析明確不育病因，并運(yùn)用輔助生殖術(shù)為男性不育提供遺傳學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：在2014年～2017年末入我院的大連生殖醫(yī)學(xué)中心不孕不育優(yōu)生遺傳咨詢門診就診的不孕不育120例，不育男性患者作為本次的研究對象，均為在婚后未采取任何的避孕措施手段導(dǎo)致發(fā)生不孕或不育病患，年齡在23～41歲，平均年齡為（27±4.6）歲，不育時程最短為2年，最長達(dá)8年。均按WHO國際標(biāo)準(zhǔn)行CASA計算機(jī)輔助的精液分析檢查后確診，其精液檢查結(jié)果顯示其中存在無精子者45例，嚴(yán)重少、弱精子75例。所有患者均以排除生殖道梗阻發(fā)生可能性，精索靜脈曲張、附睪損傷、阻塞性無精癥、生殖道感染、內(nèi)分泌失調(diào)等因素致不育患者。經(jīng)AZF基因檢測AZFa微缺失4例，AZFb微缺失1例為Klinefelter綜合征患者。配偶方也進(jìn)行相關(guān)生殖檢查均顯示正常。

1.2 方法：主要通過染色體制備-外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞遺傳學(xué)檢查進(jìn)行分析。采用常規(guī)方法抽取患者外周靜脈血對其進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞遺傳檢查處于無菌條件下取其外周血1.5 mL，肝素抗凝，用肝素抗凝的外周血培養(yǎng)淋巴細(xì)胞72 h，接種于5 mL的1640培養(yǎng)基中，37 ℃常規(guī)行淋巴細(xì)胞培養(yǎng)72 h。在終止培養(yǎng)前1.5～2 h加入收獲前1.5 h加秋水仙素0.1 mL，促進(jìn)細(xì)胞分裂終止在中期，收集細(xì)胞。首先行染色體標(biāo)本制備制片，G顯帶染色體進(jìn)行核型分析（對某特殊核型需加做C顯帶）。在cytovision下計數(shù)15個核型，分析3～5個核型，數(shù)目異常核型計數(shù)100個，G顯帶合并C顯帶按“人類細(xì)胞學(xué)命名國際體制”予以染色體核型分析[3-4]。

2 結(jié) 果

從分析結(jié)果可知在120例檢查者中經(jīng)細(xì)胞遺傳檢查總共檢出性染色異常的核型有28例，經(jīng)計算異常發(fā)生率為23.3%（28/120），在發(fā)生性染色體異常核型中有18例屬于數(shù)目異常，占性染色異常核型的15%；可知主要為性染色體異常。

表1 男性性染色體異常核型

3 討 論

染色體為基因的一種遺傳物質(zhì)載體，也在遺傳性病中作為一個重要組成部分，染色體數(shù)目異常及結(jié)構(gòu)發(fā)生畸變均會導(dǎo)致不同的遺傳效應(yīng)，其發(fā)生病種中主要含常染色體異常、性染色體疾病及染色體多態(tài)性均是造成染色體病形成的根本原因。染色體異常控制機(jī)體性狀的各類基因極易造成基因異常使得其基因發(fā)生缺失、增加或其他方面的一些改變，最后對身體正常發(fā)揮功能造成一定影響，使其發(fā)生遺傳性病，而染色體性相關(guān)病患也會存在較嚴(yán)重或明顯的臨床癥狀。有報道稱Y染色體在體內(nèi)大約的長度為60 Mb。一般由染色體兩端部的擬常染色體區(qū)和男性特異性區(qū)域。在本次研究中顯示Y染色體的異常主要是結(jié)構(gòu)和數(shù)目異常。數(shù)目異常狀態(tài)主要包括無精子，精子少導(dǎo)致不育等癥狀[5]。染色體異常引發(fā)男性不育使用藥物治療無效，早期確診可有效避免盲目求治，減輕負(fù)擔(dān)及社會醫(yī)療壓力，因此，對患者進(jìn)行染色體檢查具有重要的臨床價值。

本文研究結(jié)果顯示染色體異常作為男性不育的首因。染色體畸變發(fā)生易致性器官發(fā)育不良及不良孕產(chǎn)間粗存在一定密切相關(guān)性。針對此類病患，不僅要從傳統(tǒng)上行常規(guī)醫(yī)院檢查，且還需在臨床上進(jìn)行細(xì)胞遺傳學(xué)檢查。因此，為明確遺傳學(xué)診斷有效避免盲目性采取治療措施，為更好的指導(dǎo)其采取輔助手段解決不育不育難題。