高效液相色譜法測(cè)定痰咳凈片中咖啡因的含量

韓 璐

（吉林省四平市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 四平 136000）

痰咳凈片是由桔梗、苦杏仁、遠(yuǎn)志、五倍子、冰片、甘草、咖啡因等藥物組成的復(fù)方制劑，具有通竅順氣，消炎鎮(zhèn)咳，促進(jìn)排痰。用于急慢性支氣管炎、胸悶、咽喉炎、肺氣腫等引起的咳嗽多痰，氣促，氣喘等癥，療效顯著。在產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中，咖啡因含量測(cè)定采用的是間接碘量法，該方法操作麻煩，影響因素較多，誤差較大[1]。本文根據(jù)實(shí)驗(yàn)中影響因素，做了很多實(shí)驗(yàn)，建立了高效液相色譜法對(duì)痰咳凈片中的咖啡因含量進(jìn)行測(cè)定，具體如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀U3000（美國戴安）；電子天平型號(hào)BS224S，感量0.1 mg（北京塞多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；電子天平型號(hào)BT25S，感量0.01 mg（北京塞多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；咖啡因?qū)φ掌罚?hào)為171215-201211（中國藥品研究院）；所有試劑為分析純；痰咳凈片（批號(hào)為170201、180101、170801）；規(guī)格：每片重0.2 g，含咖啡因20 mg，由四平正和制藥有限公司提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)條件的選擇

2.1.1 HPLC法的確立依據(jù)：該復(fù)方制劑中的咖啡因采用C18柱，反相高效液相色譜法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，而且操作簡單，其他成分沒干擾。

2.1.2 檢測(cè)波長的確定：咖啡因在216 nm有最大吸收，其他成分不干擾，檢測(cè)的靈敏度符合檢測(cè)要求。另外了參考文獻(xiàn)中該類制劑的色譜條件，采用216 nm為檢測(cè)波長[2]。

2.1.3 色譜條件。色譜柱：Diamonsil C18（2） 5u 250×4.6 mm ；流動(dòng)相：甲醇-水（40∶60）；進(jìn)樣量：20 μL；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長：216 nm；柱溫：25 ℃。

2.1.4 溶液的配制

2.1.4.1 對(duì)照品溶液的配制：精密稱取咖啡因?qū)φ掌芳s15 mg，置50 mL量瓶中，加乙醇振搖溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2.5 mL，置25 mL量瓶中，加水稀釋制成每1 mL中含咖啡因約為0.03 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.4.2 供試品溶液的配制：取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于咖啡因15 mg，置50 mL量瓶中，加乙醇振搖溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2.5 mL，置25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.1.5 測(cè)定：精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μL，分別注入高效液相色譜儀中，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算，即得。

2.1.6 處方中其他成分吸收峰的檢測(cè)：按處方比例，精密稱取無咖啡因的陰性樣品適量，按供試品溶液的配制方法配制，吸取20 μL，注入高效液相色譜儀中，觀察色譜圖。處方中其他成分在216 nm無干擾。

2.2 方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密稱取咖啡因?qū)φ掌芳s15 mg，置50 mL量瓶中，加乙醇振搖溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1、2、3、4、5 mL，分別置25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。分別吸取20 μL，注入高效液相色譜儀中，檢測(cè)，記錄峰面積，得咖啡因標(biāo)準(zhǔn)曲線。 回歸方程為Y=1.417X+0.005（r=0.999）。

2.2.2 回收率試驗(yàn)：精密稱取咖啡因約10 mg，置已知含量的痰咳凈片中，按供試品溶液項(xiàng)下配制，進(jìn)樣，計(jì)算其回收率。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3 樣品的測(cè)定：取3批痰咳凈片各20片，精密稱定，研細(xì)，按供試品溶液項(xiàng)下制備樣品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算。結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定

3 討 論

本法操作簡單、快捷、結(jié)果準(zhǔn)確，測(cè)定時(shí)不受輔料的影響，誤差較小。