香蕉根結線蟲卵的分離與孵化試驗初報

李春　趙東興　張建春　李芹

摘? ?要? ?采用直接解剖分離法和粉碎篩分法分離香蕉根結線蟲，并利用濾液和蒸餾水（對照）在室溫和26 ℃恒溫培養箱中培養，研究香蕉根結線蟲卵的分離和孵化情況。結果表明：1）粉碎篩分法具有簡單、快速的特點，能較快獲取所需線蟲卵的懸浮液;2）26 ℃恒溫培養卵孵化率比室溫條件下孵化率高，且用濾液培養的卵孵化率高于蒸餾水培養的孵化率。3）在26 ℃恒溫條件下加入濾液和蒸餾水培養10 d，卵的孵化率分別為84.21%和58.36%;室溫條件下培養10 d，線蟲的孵化率分別為43.22%和27.55%。4）粉碎篩分法是一種較簡單的從香蕉根中分離得到根結線蟲卵的方法，且在26 ℃用濾液培養10 d能使多數線蟲卵孵化。

關鍵詞? ? 香蕉;根結線蟲卵;分離;孵化;粉碎篩分法

中圖分類號：S432.4+5;S668.1? ? 文獻標志碼：A? ? DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.19.012

香蕉根結線蟲病（Meloidogyne incognita）是由根結線蟲屬（Meloidogyne spp.）的線蟲引起的，是為害香蕉的重要病害之一，各香蕉種植區均有發生，發病率一般為20%～30%，嚴重的達60%以上。香蕉被線蟲為害后，植株表現為葉黃、矮小，早衰，抽蕾困難，產量減少。有些蕉園由于根結線蟲的影響，有一半以上的香蕉樹不能結出有商品價值的果實[1-5]。根結線蟲的侵染導致香蕉嚴重減產，極大地影響了香蕉產業的可持續發展[6-7]。

目前，國內外對香蕉根結線蟲的研究主要集中在防治方面[8-13]，而對于香蕉根結線蟲卵的分離與孵化研究較少，僅見劉志明等[14]研究了不同香蕉品種根滲出物對南方根結線蟲卵孵化的影響，但未涉及線蟲卵的分離。因此，有必要對香蕉根結線蟲卵的分離以及卵的孵化進行研究。本試驗采用直接解剖分離法和粉碎篩分法分離香蕉根結線蟲，并利用濾液和蒸餾水對照在室溫和26 ℃恒溫培養箱中培養，計算卵的孵化率，以期為香蕉根結線蟲的進一步研究提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 儀器

顯微鏡、體視鏡、3.5 cm培養皿、200目和500目標準分樣篩。

1.1.2 材料

試驗用香蕉根采自于云南省紅河熱帶農業科學研究所香蕉種植基地。

1.2 試驗方法

1.2.1 香蕉根結線蟲卵的分離

1.2.1.1直接解剖分離法

將采集的香蕉根洗凈，選取帶根結病根在體視鏡下直接挑取線蟲卵粒。

1.2.1.2粉碎篩分法

將采集的香蕉根洗凈，收集帶根結病根，將病根剪成0.5～1.0 cm大小，置于植物粉碎機中粉碎，過濾，收集500目篩子中的卵，離心后配成300個卵/mL的根結線蟲卵懸浮液。

1.2.2 根結線蟲卵的孵化

在無菌培養皿（直徑為3.5 cm）中加入根結線蟲卵懸浮液0.2 mL，即線蟲卵約60個，再加入根結濾液0.8 mL，分別置于室溫和26 ℃恒溫培養箱中培養，以蒸餾水為對照，每個處理重復3次。在0， 2， 4， 6， 8， 10 d時于顯微鏡下觀察培養皿內孵化出的二齡幼蟲（J2）數，并計算線蟲孵化率。以上試驗重復3次。

線蟲孵化率（%）=孵化線蟲數/線蟲卵數×100

2 結果與分析

2.1 香蕉根結線蟲卵的分離

根結線蟲卵的分離方法有直接解剖分離法、粉碎篩分法等。試驗對比了直接解剖分離法和粉碎篩分法2種方法分離線蟲卵的效果。直接解剖分離法能獲得較純凈的線蟲卵，但需在體視顯微鏡下操作，對操作者的技術熟練程度要求較大，且耗費大量的時間。通過查閱大量的文獻，參考王鑫鵬等[15]的辦法，將香蕉根洗凈，收集帶根結病根，將病根剪成0.5～1.0 cm大小，置于植物粉碎機中粉碎，過濾，收集500目篩子中的卵，離心后得到大量的線蟲卵。通過此法可簡單、快速分離得到試驗所需的線蟲卵。因此，試驗所需的線蟲卵均為此法獲得。

2.2 不同條件下香蕉根結線蟲卵的孵化率

根結線蟲具有親水性。在試驗的前期，發現根結線蟲在濾液中浸泡8 d后，還有大量線蟲活著，并且隨著時間增加，二齡線蟲的數量呈增加趨勢。因此，試驗研究濾液、培養溫度及蒸餾水培養對根結線蟲卵的孵化率影響，不同培養條件下香蕉根結線蟲卵的孵化率見表1。

從表1中可看出，在室溫條件下，加入濾液的線蟲卵孵化率10 d后達到43.22%，而蒸餾水對照的線蟲孵化率為27.35%;從時間上來看，與蒸餾水對照處理相比，在所記錄的各個時間，加入濾液的線蟲孵化率均比對照處理的孵化率高。

在26 ℃恒溫培養箱中培養，加入濾液線蟲卵孵化率10 d后達到84.21%，而蒸餾水對照的線蟲孵化率為58.36%;另外，與蒸餾水對照處理相比，在所記錄的各個時間，加入濾液的線蟲孵化率均比對照處理的孵化率高。

通過表1中的數據可以看出，恒溫培養的卵孵化率比室溫培養的卵孵化率高，這可能是因為溫度對卵的孵化有影響。南方根結線蟲是云南省河口地區香蕉根結線蟲的優勢種群[16-17]，而南方根結線蟲的適宜孵化溫度為25～35 ℃。另外，加入濾液后，在26 ℃恒溫培養10 d，線蟲卵孵化率為84.21%，卵孵化率高出對照的25.85%，這是因為濾液是由香蕉根粉碎后沖洗過濾所得，里面可能中含有線蟲發育需要的營養成分。

3 小結與討論

試驗通過對比了直接解剖分離法和粉碎篩分法分離香蕉病根中根結線蟲的效果，結果為粉碎篩分法具有簡單、快速的特點，能較快獲取所需線蟲卵的懸浮液，可用于香蕉病根中線蟲卵的分離與富集。

試驗分別研究了室溫培養和26 ℃恒溫培養條件下用濾液培養和蒸餾水培養線蟲卵的孵化率。結果表明，在室溫條件或恒溫條件下，用濾液培養的卵孵化率高于蒸餾水培養的孵化率，室溫條件下培養10 d，線蟲的孵化率分別為43.22%和27.55%;26 ℃恒溫培養10 d，線蟲的孵化率分別為84.21%和58.36%。這可能是因為試驗是在2018年11月至2019年1月進行，空氣溫度較低，未達到線蟲卵的適宜孵化溫度造成的。據報道，云南省河口地區香蕉根結線蟲的優勢種群為南方根結線蟲[16]，而離體條件下，南方根結線蟲的卵適宜孵化溫度為25～35 ℃，最適溫度為27 ℃和26 ℃[17]。另外，濾液培養的卵孵化率高于蒸餾水培養的孵化率，有可能是濾液由香蕉根粉碎后沖洗過濾所得，里面可能中含有線蟲發育需要的營養成分。

試驗通過研究香蕉根結線蟲的分離和培養，得到了簡單快速的線蟲卵分離和人工孵化方法，為香蕉根結線蟲的進一步研究提供了基礎。

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（責任編輯：敬廷桃）