分子病理學診斷技術在食管癌患者診斷中的應用

吳長發

【摘要】 目的：探討分子病理學診斷技術在食管癌患者中的診斷效果及與預后的相關性研究。方法：選取2016年5月-2017年5月本院食道癌患者64例，按照隨機數字表法分為對照組與研究組，每組各32例。對照組采用常規傳統的病理學診斷，研究組采用FISH檢測法。對兩組患者活檢組織中病理結果、病例等級、檢測的準確度、FISH的檢測結果進行分析檢測。結果：研究組患者病情程度顯著高于對照組（P<0.05），檢測結果表明食道癌與3號、17號染色體著絲粒異?？截愑嘘P（P<0.05）。結論：對于食管癌患者進行診斷時，采取更為敏感的FISH檢測，顯著提高檢測的準確度，3號與17號染色體著絲點可以作為診斷食道癌的探針，分子病理學診斷技術可以進一步推廣應用。

【關鍵詞】 分子病理學; 食管癌; 診斷效果; 相關性研究

【Abstract】 Objective：To investigate the effect of molecular pathology in the diagnosis of esophageal cancer and its correlation with prognosis.Method：Sixty-four patients with esophageal cancer in our hospital from May 2016 to May 2017 were selected and divided into control group and research group according to random number table method，32 cases in each group.Conventional pathological diagnosis was used in the control group and FISH was used in the study group.The pathological results，case grade，accuracy of detection and FISH detection results in biopsy tissues of the two groups were analyzed and detected.Result：The degree of illness in the study group was significantly higher than that in the control group（P<0.05）.FISH results showed that esophageal cancer could be associated with abnormal centromere copies of chromosomes 3 and 17（P<0.05）.Conclusion：For the diagnosis of esophageal cancer patients，more sensitive FISH detection can significantly improve the accuracy of detection.Chromosome 3 and 17 centromeres can be used as probes for the diagnosis of esophageal cancer.Molecular pathological diagnosis technology can be further promoted and applied.

【Key words】 Molecular pathology; Esophageal carcinoma; Diagnostic effect; Correlation study

First-authors address：Wuhan Hongshan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430070，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.13.035

食管癌屬于較為常見的消化道腫瘤，我國食道癌具有較高的發病率和死亡率，且該病的主要發病人群為40歲以上的中年[1]。食管癌的臨床癥狀表現為咽下困難，患者依次下咽的食物為干的食物、半流質食物，若病情逐漸惡化，則患者對水以及唾液難以下咽[2]。本院選取2016年5月-2017年5月本院食道癌患者64例，對其采用不同的診斷技術，對分子病理學診斷技術在食管癌患者中的診斷效果及與預后的相關性研究進行了探究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年5月-2017年5月本院收治的食道癌患者64例，按照隨機數字表法分為對照組與研究組，每組各32例。納入標準：（1）患者已診斷為食道癌。（2）患者精神正常。排除標準：患者患較嚴重的凝血功能障礙、嚴重的高血壓和糖尿病等全身性疾病[3]?；颊呔椴⑼獗狙芯?，且經過醫院倫理委員會批準。

1.2 方法 所有患者在手術前已診斷為食道癌，均采取纖維食管胃鏡進行檢查，同時在病變區使用標準活檢鉗，選取部分活檢組織[4]。對照組采用常規傳統的病理學診斷，研究組采用FISH檢測法，將新鮮活檢組織放置于載玻片上，25 ℃室溫環境下進行干燥處理，-80 ℃環境下進行存儲。分別采用橙色、綠色熒光對3號、17號染色體著絲粒進行標記，將其作為探針。探針以及相對應的試劑（雅培分子公司、美國）[5]。74 ℃環境下，采用70%甲酰胺液對活檢標本進行分解變性，該過程持續2 min后，將其依次放入70%，85%和100%的乙醇中，分別進行2 min梯度脫水操作[6]。待其自然干燥后，將其置于45 ℃電熱板上，首先進行5 min預熱處理，在標本標記區內滴入10 μL探針混合液，采用橡膠水泥進行密封，在42 ℃且較為潮濕的環境中，進行長達16 h的雜交處理[7]。將載玻片放入70 ℃的2XSSC溶液中進行洗滌，處理5 min后，再將其置入25 ℃的環境中的2XSSC溶液進行洗滌2 min。使用DAPI-II液（雅培分子公司）對細胞核進行染色同時封片處理[8]。采用熒光顯微鏡、特殊圖像采集分析系統（萊卡微系統公司，德國），對各染色體著絲粒信號進行統計，每個標本中包含100個細胞核，細胞核出現重疊、破損、未去除細胞質等情況時，不用被記錄其中。判定為陽性的原則為各細胞核中的高拷貝數大于10%時，采用雙盲式的方式進行FISH檢測[9]。

1.3 觀察指標及評價標準 觀察兩組患者的活檢組織的病理結果、病例等級，對FISH的檢測結果中3號及17號染色體著絲粒異?？截?、假陰性等準確度進行分析。病理形態學分級標準：若鱗狀上皮出現輕度增生則為Ⅰ級，若出現輕度不典型增生為Ⅱ級，若出現中度不典型增生，但未出現癌變的狀況則為Ⅲ級。對患者的病理診斷標準，由專業醫師進行判定。

1.4 統計學處理 使用SPSS 18.0統計軟件進行分析，計量資料采用（x±s）表示，比較采用t檢驗，計數資料采用率（%）表示，比較采用字2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者基線資料比較 研究組年齡27～63歲，平均（45.5±8.4）歲。對照組年齡28～63歲，平均（46.4±7.5）歲。兩組患者一般資料比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。見表1。

2.2 兩患者活檢組織的檢測結果比較 研究組患者病情程度顯著高于對照組（P<0.05）。見表2。

2.3 兩組患者的檢測結果比較 檢測結果表明，食道癌與3號、17號染色體著絲粒異?？截愑嘘P（P<0.05）。見表3。

3 討論

分子病理學包括運用分子和遺傳學方法對腫瘤進行診斷和分類，設計和驗證對治療反應和病情發展的預測性生物標記物，不同的基因構成造成的對腫瘤的個人易感性，還有環境因素和生活方式對腫瘤發生的影響。食管癌是常見的消化道腫瘤，全世界每年約有30萬人死于食管癌，其發病率和死亡率各國差異很大[10]。食管癌典型的癥狀為進行性咽下困難，先是難咽干的食物，繼而是半流質食物，最后水和唾液也不能咽下。在食道癌高發區的糧食中可以分離出多種真菌，其中某些真菌存在致癌作用，對癌癥的發生起到促進[11]。食道癌患者的飲食中缺乏維生素A、維生素B2等，食道癌患者共同的特點為蔬菜、水果攝入量較低。且長期飲酒、抽煙，食用的食物過硬、過熱，導致患者出現慢性刺激、炎癥等情況。食道癌的臨床癥狀容易忽視，但當患者吞咽較硬的食物時，存在不同程度的不適感，但病程發展較為緩慢[12]。食管癌患病的中晚期臨床癥狀變現為進行性咽下困難，經常性地吐黏液樣痰，為下咽的唾液和食管的分泌物。患者逐漸消瘦、脫水。若患者出現持續性的胸痛、背痛，則表明癌發展為中晚期。若癌癥對喉返神經造成傷害，患者的聲音逐漸嘶啞[13]。對頸交感神經節產生壓迫，引發Horner綜合征的發生。本研究中，對兩組患者的檢測結果分析，對比兩組食道癌患者的鱗狀細胞癌、腺癌、黏液癌、小細胞癌等狀況的出現例數相比，差異均無統計學意義（P>0.05）。

目前對食道癌患者的治療手段有手術治療、化學治療、中醫中藥相結合的綜合治療，緩解食管癌患者癥狀，延長存活期。但那需要及時對患者的基本生理功能進行檢測，同時并注意藥物反應[14-17]。由于我國的食道癌發病率較高，我國開展專門的食管癌防治研究，在食道癌高發區建立研究點，向人們采取宣教食道癌的診斷方法與早期癥狀，盡量做到早期發現、早期治療，提高患者的治愈率[18-19]。本研究中，本院選取近三年食道癌患者64例，將其分為對照組與研究組。對照組采用常規診斷方法，研究組采用FISH檢測方法，對食管癌患者的診斷效果分別進行判斷。研究組FISH的檢測結果表明，食道癌可以與3號、17號染色體著絲粒異常拷貝有關（P<0.05），且病例中發生假陰性2例。

隨著醫療技術的不斷發展，分子病理學的主要研究方面為疾病的亞微觀。在分子病理學中對腫瘤進行診斷、分類，主要運用分子與遺傳學的方法，設定研究對治療反應、病情發展有關的標記物，不同的基因、環境因素、生活方式等對腫瘤的影響[20]。本研究中，兩組活檢組織采用檢測方法，對比兩組診斷方法的準確度，研究組患者的準確度顯著高于對照組（P<0.05），表明分子病理學診斷技術具有更高的準確度以及敏感度。

綜上所述，對于食管癌患者進行診斷時，采取更為敏感的FISH檢測，顯著提高檢測的準確度，3號與17號染色體著絲點可以作為診斷食道癌的探針，分子病理學診斷技術可以進一步推廣應用。

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（收稿日期：2018-10-18） （本文編輯：周亞杰）