烏司他丁抑制NF-κB通路對膿毒癥急性肝損傷的保護作用

劉肖君 曾敏 符秀虹 何楊利 王萍 陳積雄

膿毒癥是宿主感染細菌后引起的全身炎癥反應綜合征，肝臟在膿毒癥發生、發展過程中參與炎癥產物及細菌內毒素的清除，是膿毒癥早期易侵及損傷的器官之一[1]，臨床統計顯示15.6%～50.4%的膿毒癥患者會伴發急性肝損傷，臨床研究認為，急性肝損傷是膿毒癥患者死亡的一項重要的預警指標[2]。膿毒癥急性肝損傷的發病機制較為復雜，至今還沒有特效的治療手段，研究膿毒癥急性肝損傷的治療方案仍然是臨床工作者的重要任務[3]。烏司他丁(ulinastatin)是尿液中分離純化出來的一種糖蛋白，起到廣譜蛋白酶抑制劑的作用，在急性胰腺炎的臨床治療中發現烏司他丁具有顯著的抗炎作用，起到器官保護功能[4]，動物研究發現烏司他丁對膿毒癥急性肝損傷模型具有顯著的療效[5]。本研究探討了烏司他丁對膿毒癥急性肝損傷患者核因子κB(NF-κB)炎癥通路的影響，以及其相關的臨床效果。

資料與方法

一、臨床病例資料

收集我院2017年1月至2018年9月治療的膿毒癥急性肝損傷患者112例，膿毒癥診斷參照《國際膿毒癥定義會議關于膿毒癥診斷的新標準(2001)》[6]，急性肝損傷診斷：總膽紅素(TBil)>34 μmol/L，和(或)谷草轉氨酶( AST)、丙氨酸氨基轉移酶( ALT)>2倍正常值。排除對象：原發心、腎、肺等臟器嚴重功能障礙者，既往有慢性肝臟疾病者，伴發膽道疾病者，伴發腫瘤患者。使用隨機數表法將患者隨機分為觀察組和對照組，每組56例。從表1可見，兩組在性別組成、年齡分布、致病原因、致病菌類型上差異均無統計學意義(P>0.05)。

二、方法

(一)治療方法

對照組：抗感染、營養支持、液體復蘇、維持保持水和電解質平衡等常規治療；觀察組在對照組基礎上給予烏司他丁(廣東天普生化醫藥股份有限公司，生產批號：160114)10 萬單位治療，溶于100 mL 0.9%氯化鈉注射液靜脈滴注，2次/d，療程7 d。

(二) 外周血中p65、腫瘤壞死因子-α (TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)、TBil、AST和ALT的檢測

p65、TNF-α、IL-6、TBil、AST和ALT使用ELISA法檢測。操作簡述如下：治療前及治療后采集患者靜脈血2 mL，分離上層血清，置于-70℃冰箱保存待。ELISA檢測試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，標本交由檢驗科參照試劑盒說明書操作，并設立空白孔及樣品孔，加入相關試劑，顯色后用賽默飛世爾科技公司生產的Multiskan MK3酶標儀測定吸光度值，依據標準品繪制的標準曲線，計算p65、TNF-α、IL-6、TBil、AST和ALT表達水平。

三 、統計分析

選用SPSS 18. 0行數據統計，計量資料采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

一、 治療前、療程結束后p65、TNF-α和IL-6表達水平的變化

治療前對照組和觀察組p65、TNF-α和IL-6表達水平無顯著性差異(P>0.05)，療程結束后觀察組p65、TNF-α和IL-6分別為(15.25±3.26)、(43.64±8.71)和(30.72±7.26)μg/L，顯著低于對照組的(23.57±5.42)、(52.53±10.62)和(41.95±10.12)μg/L(P<0.05)。見表2。

二、 治療前、療程結束后TBil、AST和ALT的變化

治療前對照組和觀察組TBil、AST和ALT表達水平無顯著性差異(P>0.05)，療程結束后觀察組TBil、AST和ALT分別為(26.22±5.0)μmol/L、(64.58±14.36)U/L和(60.14±13.68)U/L，顯著低于對照組的(32.02±8.14)μmol/L、(64.58±14.36)U/L 和(60.14±13.68)U/L(P<0.05)。見表3。

表1 兩組臨床資料的比較

表2 兩組p65、TNF-α和IL-6表達水平的比較

注：治療后與治療前比較，**P<0.01。觀察組治療后與對照組治療后比較，▲P<0.05。

表3 兩組TBil、AST和ALT的比較

注：治療后與治療前比較，**P<0.01。觀察組治療后與對照組治療后比較，▲P<0.05。

三、 治療前、療程結束后急性生理與慢性健康狀況Ⅱ評分(APACHEⅡ)

治療前對照組和觀察組APACHEⅡ評分為(21.34±4.02)分和(21.28±4.06)分，兩組間無顯著性差異(P>0.05)，療程結束后觀察組APACHEⅡ評分為(8.82±3.14)分，顯著低于對照組的(11.13±3.65)分(P<0.05)。

討 論

肝臟雖有門靜脈和肝動脈雙重血液供應，但膿毒癥時平均動脈壓下降，肝動脈、胃腸道動脈等血流減少，胃腸道血流減少又會導致門靜脈血流減少，因此膿毒癥肝臟微循環血流明顯減少，缺血缺氧的肝細胞再受到細菌毒素和炎性因子的攻擊，極易伴發急性肝損傷，可見肝臟是膿毒癥侵犯較早且最易受損的靶器官。膿毒癥急性肝損傷臨床表現形式可為缺氧性肝炎或膽汁淤積( 高膽紅素血癥) ，容易引起臨床醫生的忽視，給早期的積極防治治療帶來困難[8]。

核因子κB(NF-κB)是一個常規的炎癥激活通路，經典的炎癥因子TNF-α和IL-6都受到該通路的調控，膿毒癥全身炎癥綜合征中已發現炎癥通路的激活[9]。邱榮宗等[10]使用白藜蘆醇治療膿毒癥模型大鼠，發現抑制NF-κB通路后可以顯著抑制模型鼠的全身炎癥反應，顯著改善模型鼠的預后。烏司他丁屬于廣譜蛋白酶抑制劑，能穩定溶酶體膜，抑制溶酶體酶的釋放，清除氧自由基，減少炎癥因子釋放，臨床使用中發現烏司他丁可以顯著降低膿毒癥患者的死亡率[11]。Cao等[12]的研究發現烏司他丁可以抑制NF-κB通路 發揮免疫調節作用，對膿毒癥模型大鼠起到治療作用。本研究觀察到烏司他丁下調了NF-κB通路中的關鍵活性分子P65蛋白，隨后的下游炎癥因子TNF-α和IL-6都獲得了顯著的減低。TBil、AST和ALT是臨床上肝功能主要的監控指標，本研究顯示觀察組治療后TBil、AST和ALT顯著低于對照組，說明了烏司他丁有利于膿毒癥急性肝損傷患者肝功能的恢復，本研究的結果提示了烏司他丁對膿毒癥急性肝損傷患者肝功能的保護作用可能是通過抑制NF-κB通路實現的。APACHEⅡ評分系統是臨床上常用的機體急性生理狀態進展程度的評估指標，本研究觀察到治療后觀察組APACHEⅡ評分顯著低于對照組，說明了觀察組有利于患者病情的緩解。

綜上所述，本研究顯示烏司他丁可以抑制膿毒癥急性肝損傷患者NF-κB炎癥通路，發揮對肝臟的保護作用，有利于患者病情的恢復。