miR-200b-3p在潰瘍性結腸炎患者血清中的表達及意義

潰瘍性結腸炎(UC)易復發，若治療后腸黏膜愈合則可降低住院率和手術相關風險[1-2]。目前，臨床常通過評估腸道炎性反應來判斷腸黏膜的愈合狀況，但存在一定的不足。UC活動指數、Mayo評分及Truelove-Witts分級等臨床評分可反映UC患者的主觀癥狀和總體幸福感，此外，部分緩解期UC患者仍可能存在持續的黏膜炎性反應[3]。部分血清學標志物反映的是全身性的炎性反應狀態，對腸道炎性反應狀態的判斷缺乏特異性[4]。腸鏡是判斷UC患者腸道黏膜狀況的金標準[5]，但其屬于侵入性檢查，耗時較長且不能實時評估UC患者的黏膜病變情況[6]。

UC相關黏膜發育異常(UC-DYS)是UC患者的遠期并發癥，隨著UC患者的病程延長，UC-DYS的發病率逐漸升高。目前臨床常用普通白光內鏡檢查UC患者的黏膜病變情況，容易忽視多灶性損傷，致使UC-DYS的篩查率較低，隨著UC-DYS患者病程延長易進展為UC相關結直腸癌。微RNA(miRNA)是一類由20～25個核苷酸組成的非編碼RNA，主要負責調控細胞的增殖、分化、轉移及凋亡等，參與機體多種生理活動[7-8]。近年來有研究顯示，miR-200b-3p在UC-DYS組織中高表達，但并未闡明miR-200b-3p與UC內鏡下狀態及嚴重程度的關系[9]。本研究通過比較UC患者與健康者血清miR-200b-3p的相對表達量，以期闡明miR-200b-3p與UC內鏡下狀態、嚴重程度及UC-DYS的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年8月至2018年9月監利縣人民醫院收治的92例UC患者(UC組)作為研究對象。根據《炎癥性腸病診斷與治療的共識意見(2012年·廣州)》[10]進行UC診斷，并經內鏡及組織病理學檢查確診。納入標準：(1)年齡18～70歲；(2)臨床資料完整；(3)簽署知情同意書。排除標準：(1)合并嚴重感染；(2)合并腫瘤及自身免疫性疾病；(3)嚴重肝、腎功能不全；(4)服用非甾體抗炎藥物。另擇36例同期健康體檢者(對照組)及44例經病理活組織檢查確診的UC-DYS患者(UC-DYS組)作為對照。UC組男性48例，女性44例，平均年齡(45.22±9.74)歲；內鏡下緩解期患者35例，內鏡下活動期患者57例，其中輕、中度患者37例，重度患者20例。對照組男性22例，女性14例，平均年齡(46.07±9.16)歲。UC-DYS組男性25例，女性19例，平均年齡(47.30±10.28)歲；37例(84.09%)低度異型增生，7例(15.91%)高度異型增生。3組受試者在性別(χ2=0.896，P=0.639)、年齡(F=0.680，P=0.508)方面的差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 信息收集 收集受試者的性別、年齡、內鏡下狀態、疾病嚴重程度等信息。

1.2.2 內鏡下活動度分級及潰瘍性結腸炎內鏡下嚴重度指數 采用潰瘍性結腸炎內鏡下嚴重度指數(UCEIS評分)對UC患者受累腸段病變嚴重處進行評分，從血管紋理、出血情況、糜爛和潰瘍這3個方面對受累腸段進行評估。血管紋理評分范圍為0～2分，出血情況為0～3分，糜爛和潰瘍為0～3分，分數越高代表越嚴重。內鏡下緩解期UC患者的UCEIS評分為0～1分，0分為腸鏡下未見異常，表示黏膜愈合；1分為鏡下炎性細胞浸潤，表示黏膜病變。內鏡下活動期UC患者的UCEIS評分為2～8分，其中輕、中度患者的UCEIS評分為2～6分，重度患者的UCEIS評分為7～8分[11]。

1.2.3 RT-qPCR法檢測血清miR-200b-3p的相對表達量 抽取受試者肘靜脈血10 mL，3 500 r/min離心15 min，提取血清至EP管中，低溫環境下保存待檢。采用miRNAesy Kit試劑盒(購自英國Qiagen公司)提取總RNA，若OD260/280范圍在1.75～1.95之間，則進行后續操作。將2 μg總RNA置于逆轉錄試劑盒中合成cDNA。取cDNA進行實時熒光定量PCR反應，反應條件為90 ℃ 15 min預變性；95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 20 s，共40個循環。△△Ct=(Ct目的基因-Ct內參基因)實驗組-(Ct目的基因-Ct內參基因)對照組，采用2-△△Ct表示miR-200b-3p的相對表達量。引物序列見表1。

表1 引物序列

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 3組的血清miR-200b-3p表達

對照組、UC組和UC-DYS組血清miR-200b-3p的相對表達量分別為1.24±0.40、3.49±1.02和4.80±0.91，差異有統計學意義(P<0.001)。UC組的血清miR-200b-3p相對表達量高于對照組，但低于UC-DYS組，差異均有統計學意義(P均<0.05)。

2.2 不同UC內鏡下狀態及嚴重程度的患者的血清miR-200b-3p表達

內鏡下活動期的UC患者血清miR-200b-3p的相對表達量為4.03±0.78，高于內鏡下緩解期者(2.60±0.71)，差異有統計學意義(t=-8.845，P<0.001)。在內鏡下活動期UC患者中，重度患者血清miR-200b-3p的相對表達量為4.73±0.47，高于輕、中度患者(3.65±0.64)，差異有統計學意義(t=-6.619，P<0.001)。

2.3 miR-200b-3p與UCEIS的相關性分析

UC組患者血清miR-200b-3p的相對表達量與UCEIS呈正相關關系(rs=0.912，P<0.001)。見圖1。

圖1 血清miR-200b-3p的相對表達量與UCEIS的相關性分析

2.4 miR-200b-3p診斷UC內鏡下狀態、嚴重程度及UC-DYS的效能

miR-200b-3p診斷UC內鏡下狀態、嚴重程度及UC-DYS的ROC曲線下面積(AUC)分別為0.911(95%CI：0.834～0.961)、0.914(95%CI：0.809～0.972)和0.824(95%CI：0.750～0.884)。當miR-200b-3p>3.57時診斷UC內鏡下狀態有較高的準確度，其敏感度和特異度分別為77.19%和88.57%。當miR-200b-3p>4.08時診斷活動期UC嚴重程度具有較高的準確度，其敏感度和特異度分別為100.00%和72.97%。當miR-200b-3p>3.81時診斷UC-DYS有較高的準確度，其敏感度和特異度分別為95.45%和58.70%。見圖2和表2。

圖2miR-200b-3p診斷UC內鏡下狀態、嚴重程度及UC-DYS的ROC曲線AUC內鏡下狀態B活動期UC嚴重程度CUC-DYS

表2 miR-200b-3p診斷UC內鏡下狀態、嚴重程度及UC-DYS的效能

3 討論

miR-200b-3p參與機體多種生理活動，有研究表明其可參與調節單核細胞及巨噬細胞的分化[12]。此外，有多項研究表明miR-200b-3p與前列腺癌、結直腸癌、乳腺癌、口腔鱗狀細胞癌及膠質瘤等發生有關[13-17]。miR-200b參與炎癥性腸病(IBD)腸上皮細胞的生長，其在IBD病變的黏膜中表達量降低[18]。miR-200b-3p屬于miR-200b的一員，但有研究表明其在UC-DYS患者的病變黏膜中呈高表達[9]。本研究選取92例UC患者和44例UC-DYS患者作為研究對象，通過分析兩組患者血清miR-200b-3p的表達水平，以期闡明miR-200b-3p與UC發生、發展的關系。

本研究結果顯示，對照組、UC組和UC-DYS組的血清miR-200b-3p相對表達量的差異均有統計學意義。UC組的血清miR-200b-3p相對表達量高于對照組，但低于UC-DYS組。但Lewis等[9]的研究表明，UC患者與UC-DYS患者的血清miR-200b-3p表達量差異無統計學意義，這可能與樣本量、人種及個體差異有關，需進一步研究驗證。此外，本研究比較了內鏡下不同狀態及不同嚴重程度的UC患者血清miR-200b-3p的相對表達量，結果顯示內鏡下活動期UC患者的血清miR-200b-3p相對表達量高于內鏡下緩解期者；而在內鏡下活動期UC患者中，重度患者的血清miR-200b-3p相對表達量高于輕、中度患者。上述結果表明miR-200b-3p與UC發生、發展密切相關。

目前臨床上常用Mayo內鏡評分和UCEIS評分評價UC患者的黏膜病變程度，但由于Mayo內鏡評分以黏膜脆性為分級標準，容易受到臨床醫師的主觀影響，致使各醫師對UC患者的評估結果并不一致[19]。而UCEIS主要從血管紋理、出血情況、糜爛和潰瘍這3個方面評價黏膜病變情況，對黏膜病變程度的評價更為細致、全面[20]。另有研究表明，UCEIS評分在評價UC患者臨床轉歸及遠期預后方面的準確度高于Mayo內鏡評分[11]。此外，本研究表明miR-200b-3p評價UC內鏡下狀態、嚴重程度及UC-DYS均有較高的臨床價值。本研究的樣本量偏小，且為單中心研究，可能因樣本量小及個體差異等原因導致研究結果出現偶然性和隨機性。后續需擴大樣本量，進行多中心研究，同時進行多因素回歸分析以進一步闡明miR-200b-3p與UC內鏡下狀態、嚴重程度及UC-DYS的關系。

綜上所述，miR-200b-3p與UC的發生、發展密切相關。檢測UC患者血清miR-200b-3p的表達量有助于了解其UC內鏡下狀態、嚴重程度及UC-DYS的發生情況。