鐵棒錘化學成分研究

邵成雷 孔倩倩

【摘要】目的：研究鐵棒錘生物堿類化學成分。方法：采用高分辨液質聯用法明確鐵棒錘主要生物堿類化學成分。結果：確定了鐵棒錘18個酯型生物堿成分。結論：鐵棒錘中生物堿成分的明確為其科學應用提供了依據。

【關鍵詞】鐵棒錘，薄層色譜，液質聯用

[中圖分類號]R284.1 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2019）17-0063-02

鐵棒錘為鐵棒錘（Aconitum pendulum Busch）和伏毛鐵棒錘（Aconitum flavum Hand-Mazz）的干燥塊根和幼苗，收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準（藏藥）》第一冊。資料記載，寧產鐵棒錘為道地藥材，主要為伏毛鐵棒錘。鐵棒錘資源豐富，分布廣泛，主要分布于四川、云南西北部，甘肅、西藏、陜西、青海、寧夏及內蒙古南部，生于2000-3000 m的山頂、山坡、草地或林下。

1鐵棒錘總生物堿的制備

1.1材料試藥：鐵棒錘;石油醚（60-90%沸程）、乙醇、二氯甲烷、甲醇、正己烷、乙酸乙酯、氨水、甲醇、稀碘化鉍鉀、鹽酸均為分析純。

儀器：電子分析天平、KQ5200B超聲波清洗器、旋轉蒸發儀。

1.2方法與結果

1.2.1總生物堿的制備總生物堿提取：取鐵棒錘藥材，加石油醚（60-90°C沸程）回流攪拌提取2次，第一次加石油醚8倍量（v/w），提取2h，第二次加石油醚6倍量（v/w1，提取1h。抽濾，藥渣，揮盡石油醚，加乙醇溫浸攪拌提取兩次，第一次加乙醇8倍量（v/w），溫度70%，提取2h，第二次加乙醇6倍量（v/w），溫度70%，提取1h，抽濾，乙醇液合并，低溫（40℃）減壓回收乙醇，得提取物A。加1%鹽酸10倍量，超聲溶解，用乙酸乙酯萃取2次，每次等倍量，合并乙酸乙酯液，低溫（35℃）減壓回收乙酸乙酯，備用。酸水液用氨水調PH%10，用乙酸乙酯萃取4次，每次等倍量，合并乙酸乙酯液，低溫（35℃）減壓回收乙酸乙酯，得鐵棒錘總堿提取物。

1.2.2生物堿成分的分離純化氧化鋁柱純化：取鐵棒錘總堿提取物，甲醇溶解，加中性氧化鋁（100-200目）3倍量，拌樣，過氧化鋁柱（拌樣硅膠：空白硅膠=10：1），用二氯甲烷-甲醇（70：30）洗脫，至流出液生物堿反應陰性。合并所有洗脫液，濃縮，低溫干燥，得濃縮樣品。氧化鋁柱再用甲醇洗脫，合并甲醇液，濃縮，備用。TLC檢測結果表明，總堿提取物經氧化鋁柱純化，二氯甲烷一甲醇（70：30）洗脫劑單一梯度可以將生物堿完全洗脫，雜質吸附在氧化鋁柱上，實現初步純化。MCI GEL柱純化：取氧化鋁柱所得二氯甲烷一甲醇（70：30）洗脫部分濃縮樣品，用稀甲醇適量溶解，濾過，上MCI GEL柱，依次用水→10%甲醇→30%甲醇→50%甲醇→70%甲醇→90%甲醇→甲醇→丙酮洗脫，收集不同流份得鐵棒錘生物堿純化后流份，用于HPLC-MS分析。

2.HPLC-MS分析

供試品溶液的制備：樣品溶液制備：取1.1.2項下鐵棒錘生物堿純化后流份，加適量甲醇溶解，用0.45um有機微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。儀器：德國Thermo FischerScientific高分辨液相色譜質譜聯用儀。色譜條件：WatersSymmetryCl8色譜柱（5um，250mm×4.6mm），柱溫：25%，流速800ul/min，檢測波長：230nm，進樣體積：5ul。流動相：以乙腈為流動性A，以0.1%氨水為流動性B，按下表規定進行梯度洗脫。

質譜條件：LTQ-Orbitrap XL型質譜，ESI離子源，鞘氣50arb，毛細管溫度275%，輔助氣lOarb，毛細管電壓25V，噴霧電壓4.0kV。正離子模式掃描，m/z掃描范圍100-1000。

3討論

鐵棒錘為常用毒性藥材，但通過炮制可以實現解毒增效。現代醫藥研究開發的藏成藥中，鐵棒錘亦為常用藥材，僅《中華人民共和國衛生部藥品標準》藏藥第1冊（1995年版）中收載的成藥方劑中，就有31個處方含有鐵棒錘，占藏成方的15.5%，如安神丸、三十五味沉香丸、二十五味肺病膠囊、十一味金色丸、二十九味能消散、青鵬軟膏等。鐵棒錘主物質主要毒性成分為為二萜生物堿，根據基本骨架所含的碳原子數不同，可分為c19-二萜生物堿、C20-二萜生物堿。前者是目前發現的最具毒性的植物成分之一，又稱烏頭堿型生物堿，其結構和活性密切相關，取代基種類、數目、位置的差異等均可導致藥理作用、毒性方面的差異。其中烏頭堿型雙酯堿>牛扁堿型酯堿>烏頭堿型單酯堿>C19及C20醇胺型堿>內酯型堿;雙酯型>單酯型>醇胺型。雙酯型烏頭堿c8位上的乙酰基水解，得到苯甲酰單酯型生物堿，其毒性為雙酯型烏頭堿的1/50～1/500本實驗采用高分辨液相色譜質譜聯用儀對鐵棒錘中生物堿成分進行檢測，確定18個酯型生物堿：去甲基尼奧靈、螺翠寧、heterophyllidine、尼奧靈、daphnezomine s、echivulgarine、歐烏頭堿、yuzurine、苯甲酰去氧烏頭堿、16-epi-pyroaconitine、去乙酰烏頭堿、阿替辛、philogaline、烏頭堿、daechuine-$3、14-O-vera/roylneoline、多裂烏頭堿D、苯甲酰烏頭原堿。