擬南芥細胞周期基因AtCDC5的功能研究及抗體制備

徐金龍 梁爽 郁飛

摘要：MYB相關CDC5（Cell division cycle 5）蛋白對于細胞周期G2期的正常進行是必須的，但是在植物中對這種蛋白質的研究還較少涉及。本試驗測量比較野生型擬南芥（Col-0生態型）和AtCDC5 T-DNA插入缺失突變體（GK_278809）的主根生長速度和長度，利用瞬時表達AtCDCS-GFP研究AtCDC5在擬南芥葉片葉肉細胞中的定位，同時利用AtCDC5N端144個氨基酸在大腸桿菌中進行原核表達和純化，免疫家兔獲得針對AtCDC5的多克隆特異性抗體，從表型、細胞和蛋白質水平研究AtCDC5基因的功能。結果表明，GK_278809的主根因發育受到抑制而生長速度緩慢;AtCDC5-GFP融合蛋白主要定位于細胞核中：經過分離得到的AtCDC5蛋白抗血清能夠有效地檢測出10ng原核表達的AtCDC51_144抗原，并在原生質體AtCDC5過表達體系中檢測出1條分子量約為120 000的條帶，此條帶與AtCDC5-GFP大小相近。本研究成功制備出AtCDC5蛋白的多克隆抗體，為進一步研究AtCDC5蛋白影響細胞周期從而影響植物生長發育提供了研究基礎。

關鍵詞：細胞周期基因CDC5;亞細胞定位;原核表達;抗體制備;

中圖分類號：Q786 文獻標識碼：A 文章編號：1000-4440（2019）01-0026-07

細胞周期作為細胞生命活動的基本過程，在生物體生長發育進程中發揮著極其重要的功能。目前已發現與細胞周期調控有關的分子主要包括三大類：期蛋白、細胞周期蛋白依賴性激酶（cDK）以及細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑（CKI）。這三類因子相互作用，共同維護細胞周期的順利進行。在擬南芥中，AtCDC5屬于一種細胞周期蛋白，它是生物體進行正常生命活動的根本保證。AtCDC5表達主要在具有較高分裂活性的組織中，并且貫穿于整個胚胎形成過程。AtCDC5對于擬南芥G2/M期的轉換至關重要，AtCDC5功能缺失突變體表現為胚胎致死，該致死表型也限制了對AtCDC5功能的研究。