香菇中抗氧化成分對消除自由基的效果研究*

張小蒙，孫 玲，李 鳳

（江蘇醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院 藥學(xué)院, 江蘇 鹽城 224005）

食用菌是一類可供食用的大型真菌類植物，其中富含人體所需的大量氨基酸及蛋白質(zhì)、脂肪、微量元素等，不僅具有較高的藥用價值，還是很好的營養(yǎng)保健食材。在對人體癌細(xì)胞、腫瘤、病毒等具有抑制作用，增強(qiáng)人們身體素質(zhì)增強(qiáng)免疫力。有研究結(jié)果表明，香菇中的多糖及部分糖蛋白分子對人體中的活性物質(zhì)進(jìn)行干擾，激發(fā)人體免疫功能，從而提高人體抗腫瘤、抗癌、降“三高”等功效。隨著科研技術(shù)的深入，香菇中的營養(yǎng)成分及藥用性能逐漸被開發(fā)，廣泛用于制藥及保健品的制作中，例如香菇多糖、金針菇多糖及靈芝多糖等，對抗氧化具有顯著效果。

超氧化物歧化酶（SOD）作為小鼠體內(nèi)含量最多的抗氧化酶，可通過清除自由基有效避免體內(nèi)自由基過多導(dǎo)致的細(xì)胞氧化。丙二醛（MDA）則表示體內(nèi)細(xì)胞遭受自由基氧化的程度。兩者存在較大差別，在實(shí)際進(jìn)行機(jī)體抗氧化能力檢測時，通常需對二者進(jìn)行聯(lián)合檢測。因小鼠繁殖能力較強(qiáng)，以小鼠為試驗(yàn)對象，試驗(yàn)效果較為顯著，并且小鼠與人同為哺乳動物，通過香菇對小鼠抗氧化的研究，對人而言，具有較高的參考價值。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

香菇粉、80只清潔度為ICR的雄性小鼠；足量的硫酸、濃硫酸、苦味酸、生理鹽水、肌糖元測定試劑盒、肝糖元測定試劑盒、丙二醛測定試劑盒、肌糖原測定試劑盒、甘肽過氧化物酶測定試劑盒、磷酸激酶測定試劑盒、超氧化物歧化酶測定試劑盒。

1.2 試驗(yàn)方法

購入的小鼠因采取適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d左右，按照小鼠體重差異分為4個試驗(yàn)小組，每組小鼠20只，一籠安置6只小鼠，對同組小鼠以方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，以防止小鼠間的體重差異。用含量為5%的苦味酸對每組小鼠進(jìn)行涂抹標(biāo)記，頭部1號，左前腿標(biāo)記為2號，左后腿標(biāo)記為3號，尾巴部分標(biāo)記為4號，右前腿標(biāo)記為5號，右后腿標(biāo)記為6號。在飼養(yǎng)方面以自由飲食喂養(yǎng)，以相同飼料及白開水為基礎(chǔ)。在試驗(yàn)過程中室溫保持恒溫26℃，室內(nèi)濕度保持在55%，每天在日光與暗室中分別放置12 h，每天早上08∶00，按照不同劑量的香菇粉及生理鹽水溶液混合后，對每組試驗(yàn)小鼠分別以灌胃的方式進(jìn)行喂養(yǎng)，對照組只喂養(yǎng)相等質(zhì)量的生理鹽水，不添加任何物質(zhì)，持續(xù)進(jìn)行28 d。在試驗(yàn)中對鼠籠每日換水及時更換鼠墊。詳細(xì)記錄每天小鼠體重的變化情況，飲水、飲藥、飼料消耗量的生活情況。

為保證各組小鼠的機(jī)體性能區(qū)域一致，每組小鼠按照此方式正常養(yǎng)殖28 d，在最后5 d以每天15 min的游泳進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練，在規(guī)格大小為1 m2，水深35 cm的鐵質(zhì)泳池中進(jìn)行，水溫保持在26℃，正負(fù)溫差不超過2℃，小鼠密度以50 cm2為宜進(jìn)行對比試驗(yàn)。

試驗(yàn)方法為： 用相同長度棉線系上金屬鐵絲環(huán)，離小鼠尾部2 cm～3 cm為宜；用已經(jīng)連續(xù)采取灌胃法飼養(yǎng)4周的小鼠，剩下的10只小鼠進(jìn)行最后灌胃，在最后1次灌胃30 min后，把小鼠放入泳池中進(jìn)行負(fù)重游泳50 min，游泳結(jié)束后撈出，等到撈出的小鼠休息20 min后，采取小鼠眼眶內(nèi)血液進(jìn)行化驗(yàn)，將小鼠眼眶內(nèi)的血液放置于室溫恒定的化驗(yàn)器材內(nèi)靜置30 min使其血液凝固，在以每分鐘3 000 r·min-1的速度冷凍分離15 min，在小鼠血液分離的血清樣本中，儲存在零下20℃待用。其中小鼠體內(nèi)SOD活性、 MDA含量的測定都按照試劑盒中的說明書進(jìn)行操作， 采用PASW statistics 18軟件進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)，其中平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）表示，以t為顯著性檢驗(yàn)表示，顯著性水平以P＜0.05。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 不同劑量香菇干粉對小鼠飼料食用量的影響

連續(xù)28 d對各香菇試驗(yàn)組內(nèi)的小鼠喂食低、中、高劑量的香菇干粉。同時，生理鹽水對照組與各香菇試驗(yàn)組小鼠每天的飼料喂食量需保持一致。排除浪費(fèi)的飼料量，記錄每天各組中小鼠的飼料食用量，并提取其中第1天、第14天、第28天的數(shù)據(jù)，結(jié)果見表1。

表1 各組小鼠的飼料食用量Tab.1 Feed consumption of mice in each group

由表1可知，各組中小鼠每天的進(jìn)食量并無明顯差異，即不同劑量的香菇干粉均未對小鼠的食量產(chǎn)生明顯影響。

2.2 不同劑量香菇干粉對SOD活性的影響

通過連續(xù)28 d對小鼠喂食不同劑量的香菇干粉，并檢測各小鼠體內(nèi)SOD的活力，與對照組進(jìn)行比較，具體數(shù)據(jù)見表2。

表2 不同劑量香菇干粉對超氧化物歧化酶活性的影響Tab.2 Effect of different treatment of dried Lentinus edodes on the activity of superoxide dismutase

由表2可知，3種不同劑量的香菇干粉試驗(yàn)組小鼠體內(nèi)SOD的活性均明顯高于生理鹽水對照組，且劑量為2.1 g·kg-1最為顯著。經(jīng)過顯著性水平計(jì)算后得出以下結(jié)論：各劑量下的香菇干粉試驗(yàn)組均可極為顯著地提高血清中SOD的活性；僅高劑量的香菇干粉試驗(yàn)組可在一定程度上提高腦中SOD的活性；此外，通過對肝臟中SOD的活性分析發(fā)現(xiàn)，中劑量的香菇干粉便可對SOD活性產(chǎn)生一定的促進(jìn)作用，而高劑量的香菇干粉將極為顯著地提高SOD活性。

2.3 不同劑量香菇干粉對丙二醛（MDA）含量的影響

連續(xù)喂食28 d不同劑量香菇干粉及對照組的小鼠體內(nèi)MDA的含量，主要檢測部位包括小鼠的血清、腦及肝臟，結(jié)果見表3。

表3 不同劑量香菇干粉對MDA含量的影響Tab.3 Effect of different treatment of dried Lentinus edodes on content

由表3可知，與對照組相比，從攝入中等劑量的香菇干粉開始，血清及腦中的MDA含量便開始逐漸降低，當(dāng)攝入高劑量的香菇干粉時，MDA的含量將呈現(xiàn)出較大幅度的降低；而對于肝臟而言，當(dāng)攝入中等劑量的香菇干粉開始，其MDA含量便可產(chǎn)生極為顯著降低。香菇干粉劑量達(dá)到2.1 g·kg-1時，可顯著降低機(jī)體MDA含量，即香菇可較好的降低體內(nèi)細(xì)胞的氧化程度。

3 結(jié)語

自由基具有攻擊生物分子的功能，較高的氧化水平，會發(fā)生超氧化化學(xué)反應(yīng)，從而破壞細(xì)胞作用及其組織。當(dāng)自由基清除能力由于其他因素而減小或增大時，也會破壞自由基的組成。許多人體與動物試驗(yàn)表明，疲勞運(yùn)動會使身體形成很多自由基，提高脂質(zhì)過氧化水平，從而發(fā)生運(yùn)動倦怠的現(xiàn)象，更嚴(yán)重的則會引發(fā)多種疾病。過量的形成自由基已超過機(jī)體的抗氧化水平，MDA成分大幅度增多，導(dǎo)致SOD、GSH-px的活性大幅度減小，削弱了機(jī)體抗氧化水平。自由基導(dǎo)致的運(yùn)動倦怠與人體病理變化、脂質(zhì)過氧化緊密相關(guān)。

對動物試驗(yàn)進(jìn)行研究，分析了香菇的抗氧化水平，研究了香菇對小鼠抗氧化水平的作用與影響。試驗(yàn)結(jié)果表明：灌洗后4周，采用不相同劑量的香菇，低、中、高劑量組可以在一定程度上增加SOD的活性，提升肝臟與血清中的氧化酶活性，減少大腦、肝臟與血清中的MDA成分。表明了香菇采用提升身體的總抗氧化水平，除去體內(nèi)形成大量的自由基，并提高分解有害成分的化學(xué)反應(yīng)速率，更好地預(yù)防或避免機(jī)體由于自由基引起的氧化損害，具有抗氧化的功效。