飼料中四環素和土霉素測定方法的研究

張艷艷 黃玉舟 李麗 韋石 趙國帥

摘 要：本試驗通過較為簡單的前處理，并利用HLB凈化柱進行快速處理飼料樣品，采用液相色譜串聯質譜儀對育成牛精補飼料、育成牛濃縮飼料、奶牛預混合飼料等飼料樣品中四環素、土霉素的含量進行了測定，并探討方法的可行性。

關鍵詞：飼料;液相色譜串聯質譜;四環素;土霉素

0 引言

四環素和金霉素同屬于四環素類抗生素藥物，除對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌以及厭氧菌均有好的抑制作用外，多數立克次體屬、支原體屬、衣原體屬、非典型分枝桿菌屬、螺旋體也對四環素類藥物十分敏感，是一種高效的廣譜抗生素，是十分普遍的生產和臨床使用的抗生素類藥物。

1 材料與方法

1.1 儀器設備

液相色譜串聯質譜儀（美國waters）;天平（Techcomp）;高速離心機（湖南湘儀）;固相萃取儀;HLB凈化柱。

1.2 試劑

甲醇（色譜純，Fisher）;乙腈（色譜純，Fisher）;鹽酸（分析純，國藥）;甲酸（分析純，國藥）;四環素標準品;土霉素標準品;0.4mol/L鹽酸溶液：準確稱取32.8mL鹽酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻;0.01mol/L草酸甲醇溶液：準確稱取草酸1.26g，用甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中;準確稱取適量四環素和土霉素標準品，分別配制成1mg/mL的標準儲備液。

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理

準確稱取3.0g樣品，置于50mL具塞錐形瓶，加入甲醇10mL，旋渦混勻1min，加入鹽酸溶液30mL，渦旋混勻1min，超聲20min，移至50離心管中，5000r/min離心10min，取上清液，待凈化。

1.3.2 最佳儀器條件的選擇

對儀器各項參數進行調試，以確定最佳的儀器測定參數。

色譜條件：C18柱，100mm×2.1mm，粒徑1.7μm;柱溫，40℃;流動相，乙腈+甲醇+甲酸=18+4+78;進樣量，10μL。

質譜條件：離子源，電噴霧離子源;掃描方式，正離子模式;檢測方式，多反應監測（MRM）;電噴霧電壓，碰撞電壓等條件調諧至最優。

2 結果與分析

2.1 標準曲線

用標準儲備液配制成含有四環素和土霉素各0，20，50，100，200，500，1000ng/mL濃度標準工作液，以峰面積為縱坐標，標準工作液的濃度為橫坐標繪制標準工作曲線，結果表明其線性關系較好。

2.2 加標回收率結果

從表1，表2，表3可見，3種樣品的加標回收率在75.0%～95.6%。表明該方法具有良好的準確性。

3 結論

本試驗利用HLB凈化柱對育成牛精補飼料、育成牛濃縮飼料和奶牛預混合飼料進行了處理，利用液相色譜串聯質譜法對其四環素及土霉素的含量進行了分組多平行測定，結果表明該方法在準確性，重復性、平行性及精密度方面表現良好，多濃度添加回收率均在75.0%～95.6%之間，兩種重復性試驗中相對標準偏差分別均在3.08%～4.66%和2.75%～4.03%之間，且前處理方法較為簡單，適合對大批量飼料樣品進行四環素及土霉素的測定。

參考文獻：

[1]張天姝，楊慧杰，孫世峰.飼料中4種四環素類藥物的檢測——高效液相色譜法[J].現代畜牧獸醫，2016（10）.