核酸檢測法應用于血液標本內乙型肝炎病毒檢測的結果

王菲 李卓

[摘要]目的：分析核酸檢測法應用于血液標本內乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）檢測的結果。方法：研究時段自2016年10月至2018年10月，選定本院檢驗科收集的血液標本200例，分別采用HBV-DNA（核酸檢測法）、ELISA（酶聯免疫吸附法）檢測HBV病毒。對比兩種方法的檢測情況。結果：HBV-DNA法特異性（99.82%）、敏感性（98.25%）顯著高于EuSA法（91.05%、92u%），P<0.05（具統計學差異）：HBV-DHA法窗口期顯著低于ELISA法，P<0.05（具統計學差異）。結論：HBV-DNA檢測法在乙型肝炎HBV檢測中的特異性、敏感性較高，明顯減少了窗口期，臨床價值較高。值得借鑒。

[關鍵詞]核酸檢測法;血液標本;乙型肝炎;HBV

[中圖分類號]Rd40;R512.62 [文獻標識碼]A [文章編號H2096-5249（2019）06-0219-02

當前，臨床對于乙型肝炎HBV檢測主要有ELISA、HBV-DNA兩種，ELISA檢測窗口期較長，由于病毒變異、免疫沉默性感染、病毒滴度低、病毒感染存在窗口期等因素的影響，臨床輸血存在一定風險性。ELISA具有方便、可靠等優點，現己被臨床廣泛應用于血液篩查中，對于ELISA檢測法在乙型肝炎HBV檢測中的臨床價值目前報道相對較少。因此，本文選定2016年10月至2018年10月本院檢驗科收集的血液標本200例研究，目的是為乙型肝炎HBV檢測提供一種科學、安全的診斷方法，做出如下報道：

1資料與方法

1.1基線資料

研究時段自2016年10月至2018年10月，選定本院檢驗科收集的血液標本200例。

1.2方法

1.2.1儀器、試劑

血型血清離心機（型號：TD4ZB：生產企業：北京泰澤瑞達科技有限公司）、全自動生化分析儀（型號：PUXS-300：生產企業：南京舒普思達醫療設備有限公司）、全自動血培養儀（型號：Bact/ALERT3D;生產企業：濟南鑫井醫療器械有限公司）、高通量全自動核酸提取儀（型號：etP-968;生產企業：上海騰柔儀器設備有限公司）、全自動化學發光分析儀（型號：DXl800：生產企業：美國貝克曼爾特公司）、全自動免疫分析儀（型號：MD-IA-1000;生產企業：武漢明德生物科技股份有限公司）。ELISA試劑：北京萬泰生物藥業股份有限公司提供的HBV血清學標志物檢測試劑盒。HBV-DNA檢測試劑：由上海科華生物工程股份有限公司提供的人類免疫缺陷病毒核酸檢測試劑。

1.2.2方法

所有血液標本均應經過正定血型初篩，干化學檢測ALT（谷丙轉氨酸）。血液標本分別置于3個試管，其中2個試管采用ELISA法檢測，使用抗凝真空管;另一個試管采用HBV-DNA法檢測，使用分離膠抗凝真空管。所有試管粘貼唯一性條形碼，血袋標簽上的條形碼應與試管保持一致，離心處理血液標本，并置于4℃的冰箱中，所有檢測操作在2.d內完成。所有血液標本均進行梅毒、抗-HIV、抗-HCV、HBsAg（乙肝表面抗原）、ALT速率法檢測，陽性標本去除后，再行HBV-DNA檢測，如果HBV-DNA結果呈反應性，則應再次檢測HBV標志物，HBV標志物包括HBcAb（乙肝核心抗體）、HBeAb（乙肝e抗體）、rmeAg（乙肝e抗原）、HBsAb（乙肝表面抗體）。ELISA檢測陽性標準：S/CO大于等于1;HBV-DNA檢測陽性標準：采用8份混樣核酸標本，設定對照、室內質控，拆分測量結果為陽性，則可判定為NAT陽性，反之即為陰性。

1.3統計學方法

用SPSS22.0軟件展開數據處理，計量資料數據（窗口期），表達形式為，計算以t檢驗為主;計數資料數據（特異性、敏感性），表達形式為[n/（%），以x檢驗為主，P<0.05，具統計學差異。

2結果

2.1兩種檢測方法特異性、敏感性對比：

特異性、敏感性：HBV-DNA法的顯著高于ELISA法的，P<0.05（具統計學差異），見表1.

2.2兩種檢測方法窗口期對比：

HBV-DNA法窗口期為（20.06±3.25）d;ELISA法窗口期為（38.99±6.17）d，兩組比較HBV-DNA法顯著較ELISA法低，P<0.05（具統計學差異）。

3討論

乙型肝炎病毒是引起乙型肝炎的主要病原體，包括禽嗜肝DNA病毒屬、正嗜肝DNA病毒屬，正嗜肝DNA病毒是引起感染的主要菌屬，HBV感染是當前全球性的一種公共衛生問題。乙型肝炎病毒生物學特征主要有以下兩點：1.形態、結構：由核衣殼、包膜組成，包膜含細胞脂肪、糖蛋白、HBsAg，核心顆粒包括HBV-DNA多聚酶、環狀雙股HBV-DNA、HBcAg（核心顆粒內含核心蛋白），是病毒的一種完整形態，存在感染性。病毒生活周期：HBV通過低親和力受體，例如蛋白多糖、硫酸乙酰肝素，吸附到肝細胞表面，通過病毒受體結合大包膜蛋白的PreSl區，介導細胞對病毒的內吞作用，NTCP（鈉離子-牛磺膽酸供轉運多肽）是建立感染、介導HBV進入細胞的重要受體，在吞體膜融合、內吞體病毒包膜將衣殼釋放入細胞質，運送衣殼至核孔復合體內部的病毒基因組rcDNA釋放入細胞核。乙肝病毒主要以血液傳播為主，我國是一個乙肝發病率較高的國家，對獻血人群進行乙肝病毒檢測對于控制乙肝傳播極為重要。HBV-DNA反映了HBV的復制活躍程度，也可反映出HBV-DNA病毒的傳染性，是指導抗病毒藥物治療、觀察抗病毒藥物治療效果、預后的重要指標。定量檢測突破了免疫學方法，通過對病毒核酸水平進行檢測，進而反映出機體的病毒水平。近年來，隨著我國醫療科技、基因檢測技術的不斷發展，基因診斷在疾病的治療中發揮著重要作用，提取核酸是基因診斷成功的關鍵所在。

乙型肝炎病毒的傳染源主要是乙型肝炎病毒攜帶者、慢性乙肝患者、急性乙肝患者，乙型肝炎病毒不論是在慢性期、急性期、潛伏期，血液均具有一定的傳染性，HBsAg陽性大于6個月，無肝炎體征，肝功能指標均正常，血清AST以及ALT均在正常范圍內，肝組織檢查示：無明顯異常，則被稱為“乙型肝炎病毒攜帶者”，病毒攜帶者、慢性患者作為傳染源的意義最大，傳染性與體液中乙肝病毒的DNA含量、病毒復制呈正相關性。HBV的主要傳播途徑是血液傳播，包括血制品和輸血兩方面，其次是母嬰傳播，即在分娩前后，母體攜帶HBV，并將HBV傳染給新生兒，母乳喂養也會傳播HBV。慢性乙型肝炎匯總，母嬰傳播占到了40%-50%，其次是密切接觸傳播，例如陰道分泌物傳播或者精液傳播，最后是醫源性傳播，包括不安全注射以及消毒不徹底等。肝細胞的受損程度與患者機體免疫應答的強弱有著極為密切的聯系，HBV會導致免疫病理損害，具體表現為病毒降低機體免疫應答、病毒變異出現耐藥、抗體介導免疫病理損害、細胞介導免疫病理損害等。HBsAg（表面抗原）、抗HBs（表面抗體）、HBeAg（e抗原）、抗HBe（e抗體）、抗HBc（核心抗體）被稱為是乙肝五項，是HBV感染常用的檢測指標。

ELISA法是臨床檢測乙肝病毒常用的一種方法，HBsAg是主要的檢測指標，具有快捷、方便、簡單等一系列優點，但是ELISA法也存在一定不足，例如HBV感染存在窗口期，明顯增加了漏診率，具有一定的局限性。HBV-DNA法屬于生物學診斷方法，檢測原理是有效測定HBV-DNA（HBV病毒），進而反應機體HBV感染情況，具有較高的靈敏度，現己被香港、日本、歐美等國家應用于獻血者的血液篩查中。其次HBV-DNA法可有效縮短HCV、HBV、HIV的窗口期，降低病毒經血液傳播的風險，安全性更高，有效彌補了ELISA法的不足。且臨床有研究顯示：在乙肝HBV感染早期，ELISA法檢測不出，但HBV-DNA法可檢測出。本研究顯示：HBV-DNA法特異性、敏感性顯著高于ELISA法，HBV-DNA法窗口期顯著低于ELISA法，P<0.05.說明HBV-DNA法在乙肝HBV病毒檢測中的有效性、可靠性，應當作為乙肝患者HBV檢測的首選方法。

綜上所述乙肝患者HBV檢測中采用HBV-DNA法檢測，可有效提高檢測特異性、敏感性，減少窗口期，提高檢測安全性，值得臨床信賴，并進一步推廣。