鐵線蓮屬蒙藥材薄層層析圖譜研究

羅彩神

關(guān)鍵詞：鐵線蓮屬;蒙藥材;薄層色譜

前言

鐵線蓮屬（Clematis L.）隸屬于毛茛科，為多年生木質(zhì)或草質(zhì)藤本，或?yàn)橹绷⒐嗄净虿荼荆植加谑澜绺鞯?，約300種，我國(guó)各地均有分布[1]。內(nèi)蒙古地區(qū)有16種6變種[2]，經(jīng)本草考證[2-5]，其中入蒙藥的植物有：芹葉鐵線蓮（Clematis aethusifolia）、黃花鐵線蓮（C. intricata）、短尾鐵線蓮（C. brevicaudata）、棉團(tuán)鐵線蓮（C. hexapetala） 長(zhǎng)瓣鐵線蓮（C. macropetala）和辣蓼鐵線蓮（C. mandshurica）（又名：東北鐵線蓮）。

以上6種鐵線蓮屬蒙藥，從藥性及功能主治方面，各有差異，不能等同。但由于來(lái)源于同科同屬不同種植物，親緣關(guān)系相近，原植物形態(tài)、藥材性狀及顯微特征方面相似，故臨床用藥混用、代用等現(xiàn)象較為嚴(yán)重.

現(xiàn)有資料報(bào)道的鐵線蓮屬藥材薄層研究主要以齊墩果酸或蘆丁作為對(duì)照品，單獨(dú)的對(duì)棉團(tuán)鐵線蓮、芹葉鐵線蓮、威靈仙進(jìn)行定性鑒別。而運(yùn)用薄層色譜法系統(tǒng)地對(duì)上述6種鐵線蓮進(jìn)行鑒別還未見(jiàn)報(bào)導(dǎo).本研究運(yùn)用硅膠薄層色譜法對(duì)上述6種鐵線蓮的薄層色譜圖譜進(jìn)行分析，對(duì)6種鐵線蓮進(jìn)行準(zhǔn)確、快速鑒別，從而為臨床安全用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1.儀器與試劑

燒杯數(shù)個(gè);量筒;冷凝回流裝置（數(shù)字恒溫水浴鍋，球形冷凝管，圓底燒瓶）;抽慮裝置（抽濾瓶，布式漏斗，抽慮泵，濾紙）;10ml容量瓶數(shù)個(gè);玻璃點(diǎn)樣毛細(xì)管（華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠）;層析缸;噴瓶;ZF-20D暗香式紫外分析儀（南京科爾儀器設(shè)備有限公司）;薄層層析硅膠GF254（青島海洋化工）;所用試劑均為分析純。

2.材料與實(shí)驗(yàn)方法

2.1材料

于2009～2011年藥材采收期采集6種鐵線蓮植物全草，置于陰涼通風(fēng)干燥處儲(chǔ)存。蒙藥材原植物均經(jīng)藥用植物學(xué)教研室李驍老師認(rèn)真鑒定。

2.2實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1樣品提取

分別精確稱取第一批材料樣品各三份，每份5g，適當(dāng)粉碎，分別用75ml蒸餾水、75ml70%乙醇， 75ml95%乙醇浸泡過(guò)夜。再分別將隔夜浸泡的藥材與溶劑轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶，加熱回流1h，趁熱抽慮，濾渣分別加入第一次所加溶劑65ml，回流0.5h，趁熱抽慮，合并兩次濾液，水浴蒸干得浸膏，浸膏中加少量（約6-8ml）無(wú)水乙醇溶解，定容至10ml容量瓶，備用。

2.2.2 提取方法選擇

取10cm×20cm硅膠板，分別點(diǎn)上第一批樣品10μL，預(yù)飽和15分鐘，橫向展開(kāi)（展開(kāi)系統(tǒng)甲苯：乙酸乙酯：甲酸=20：3：1），展距8cm;25%硫酸水溶液顯色，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰.

結(jié)果顯示，70%乙醇提取液展開(kāi)的點(diǎn)數(shù)目較多且斑點(diǎn)清晰，故優(yōu)先選用以70%乙醇溶液提取。

2.2.3 ?提取方法重復(fù)性與穩(wěn)定性研究

以70%乙醇提取芹葉鐵線蓮作重復(fù)性和穩(wěn)定性研究，分別稱取第一批芹葉鐵線蓮三份，每份5g，以70%乙醇浸泡，按2.2.1項(xiàng)下方法提取，存放時(shí)間分別為0h，24h，48h;取10cm×20cm硅膠板，點(diǎn)樣10μL，展開(kāi)劑石油醚：乙酸乙酯：丙酮=9：3：1，預(yù)飽和15分鐘，展開(kāi)，展距13.8cm，25%硫酸水溶液顯色，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰.

結(jié)果顯示，斑點(diǎn)數(shù)目及清晰度一致，說(shuō)明該提取方法重復(fù)性和樣品穩(wěn)定性良好。故按2.2.1方法以70%乙醇提取第二批藥材。

2.2.4 ?展開(kāi)系統(tǒng)選擇

以70%乙醇提取物為標(biāo)準(zhǔn)，分別實(shí)驗(yàn)了如下種展開(kāi)系統(tǒng)：

1.石油醚：乙酸乙酯：丙酮=9：3：1;

2.環(huán)己烷：乙酸乙酯：冰乙酸=12：3：1;

3.苯：丙酮=3：1;

4.三氯甲烷：甲醇：水=15：3：0.5

5乙酸乙酯：甲醇：甲酸：水=8：1：1：1

經(jīng)檢視后發(fā)現(xiàn)石油醚：乙酸乙酯：丙酮=9：3：1和三氯甲烷：甲醇：水=15：3：0.5系統(tǒng)可明顯區(qū)別出六種藥材，故以這兩展開(kāi)系統(tǒng)作為優(yōu)先展開(kāi)系統(tǒng)。

2.3 藥材薄層圖譜鑒別

將兩批樣品點(diǎn)于同一張薄層板上（10cmX20cm），展開(kāi)劑石油醚：乙酸乙酯： 丙酮=9：3：1展開(kāi)，展距8.0cm，噴25%硫酸水溶液后加熱至色點(diǎn)清晰，日光下檢視。

再以氯仿：甲醇：水（15：3：0.5）為展開(kāi)劑，將兩批藥材點(diǎn)于同一張薄層板上（20cm×20cm），展距17.0cm， 25%濃硫酸水溶液顯色后于365nm紫外燈下檢視。

3.結(jié)果

以石油醚：乙酸乙酯：丙酮（9：3：1）為展開(kāi)劑，得圖3，圖譜中可以看到Q點(diǎn)為辣蓼鐵線蓮所獨(dú)有色點(diǎn)， Q點(diǎn)Rf=0.86，從而可以鑒別出辣蓼鐵線蓮;再以三氯甲烷：甲醇：水（15：3：0.5）為展開(kāi)劑，得圖4，圖中可以看到，芹葉鐵線蓮獨(dú)有A色點(diǎn)，長(zhǎng)瓣鐵線蓮比芹葉鐵線蓮只少了A色點(diǎn)，棉團(tuán)鐵線蓮獨(dú)有B，F(xiàn)，G色點(diǎn)，短尾鐵線蓮缺C色點(diǎn)，黃花鐵線蓮C，D點(diǎn)都有，辣蓼鐵線蓮D，E，F(xiàn)，G點(diǎn)不明顯，經(jīng)過(guò)分析對(duì)比，從而辨別出了芹葉鐵線蓮，黃花鐵線蓮，短尾鐵線蓮，棉團(tuán)鐵線蓮，長(zhǎng)瓣鐵線蓮和辣蓼鐵線蓮。各色點(diǎn)比移值：A點(diǎn)Rf=0.65;B點(diǎn)Rf=0.56;C點(diǎn)Rf=0.49;D點(diǎn)Rf=0.43;E點(diǎn)Rf=0.32;F點(diǎn)Rf=0.24;G點(diǎn)Rf=0.16.

4.討論

實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，鐵線蓮屬蒙藥材中，棉團(tuán)鐵線蓮成分最為特殊和復(fù)雜。有多種獨(dú)有成分。芹葉鐵線蓮和長(zhǎng)瓣鐵線蓮成分最為相似。作為同屬蒙藥材，鐵線蓮屬蒙藥化學(xué)成分多有相同，但是也有區(qū)別，相互之間的替代使用還需要符合藥理事實(shí)依據(jù)，因此我們?cè)诒ＷC用藥安全的同時(shí)， 合理利用藥材資源， 綜合開(kāi)發(fā)，合理的替代，以達(dá)到藥材資源的永久持續(xù)利用。本研究主要進(jìn)行了藥材鑒別的薄層色譜方法學(xué)研究，摸索出適合于鐵線蓮屬6種蒙藥材鑒別的薄層色譜方法，并運(yùn)用該方法鑒別出6種蒙藥材;該方法快速，簡(jiǎn)便，重復(fù)性好。

5.不足之處：

1.由于難以找到適合標(biāo)準(zhǔn)品，本研究未對(duì)藥材成分進(jìn)行定性分析。只是用薄層色譜比較了他們之間的區(qū)別。

2本研究提取樣品所含化學(xué)成分較復(fù)雜，展開(kāi)效果常被其他成分干擾而影響檢視效果，猜測(cè)利用萃取方法先對(duì)樣品溶液進(jìn)行萃取，再對(duì)不同萃取部位點(diǎn)樣分析效果可能會(huì)更加明顯。

參考文獻(xiàn)

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