高效液相色譜法測定調肝靈片中大黃素和大黃酚的含量

劉玉斌

【摘要】 目的 建立以高效液相色譜法測定調肝靈片中大黃素、大黃酚含量的方法。方法 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相：甲醇-0．1%磷酸溶液(85:15)為流動相；流速：1．0 ml/min；檢測波長：254 nm；柱溫：30℃，進樣量10 μl。結果 大黃素和大黃酚分別在0．005 6~0．028 μg之間和0．011 2~0．056 μg(r=0．999 8)之間成線性關系。大黃素、大黃酚總量平均回收率為100．13%(RSD＝2．53%，6例)。結論 本方法簡便、準確 、重現性好。

【關鍵詞】調肝靈片；高效液相色譜法；大黃素、大黃酚；含量測定；色譜法

Determination of emodin and chrysophanol in tiaoganling pills by HPLC

LIU Yu-bin.Heilongjiang University of Chinese Medicine，Heilongjiang 150040,China

【Abstract】 Objective To establish a quality standard of Tiaoganling pills.Methods Hypersil C₁₈was used with methanol-0．1%phosphoric acid as mobile phase(85:15).The flow rate was 1．0 ml/min,detective wavelength was 254 nm,column temperature was 30℃ and injection valume was 10 μl.Results Emodin and chrysophanol showed a good linear relationship in the range of 0．005 6~0．028 μg and 0．011 2~0．056 μg(r=0．999 8).The average recovery was 100．13%(RSD=2．53%,6).Conclusion The methods is simple,accurate and reproducible.

【Key words】Tiaoganling pills; HPLC; Emodin; Chrysophanol; Contant determination

調肝靈片是在原調肝靈丸的基礎上進行的中藥改劑劑型，有清熱解毒，疏肝行滯的功能。用于肝郁氣滯。建立以高效液相色譜法測定調肝靈片中大黃素、大黃酚含量的方法，對提高中藥制劑質量監控，完善質量標準體系具有實際應用意義。

1 儀器與試藥

1．1 儀器 美國Watets 6000E 高效液相色譜儀，Millennidm 32數據處理系統。

1．2 試藥 對照品:大黃素、大黃酚批號：0756-200711中國藥品生物制品檢定所，調肝靈片(黑龍江中醫藥大學中醫藥研究院自行研制，批號080925)。甲醇(液相用)為色譜純，所用其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件^[1]色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Kromasil色譜柱(4．6 mm×200 mm，5 μm)。流動相：甲醇-0．1%磷酸溶液(85C∶C15)為流動相；流速：1．0 ml/min；柱溫：30℃。檢測波長：254 nm；進樣量10 μl。

2．2 對照品溶液的制備 分別精密稱取大黃素和大黃酚對照品適量，加甲醇制成每1 ml含大黃素2 μg、大黃酚3 μg的混合溶液，即得。

2．3 線性關系考察 分別精密吸取“2．2”項下對照品溶液，2、4、6、8、10 μl,分別按“2．1”項下色譜條件進樣，測定峰面積，以濃度為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，進行線性回歸，得到線性方程(n=6)。大黃素Y=4 566 258．7X+450．γ＝0．999 8；大黃酚Y=8 544 660．7X-3 367．2，γ＝0．999 8。試驗證明大黃素和大黃酚分別在0．005 6~0．028 μg之間和0．011 2~0．056 μg之間成線性關系。并通過原點。

2．4 穩定性試驗 取同一批號調肝靈片(批號：080925)10片，除去薄膜衣，研細，取粉末0．25 g，精密稱定，按“2．8”項下方法操作，再精密吸取供試品溶液10 μl，根據設定間隔時間0、1、2、3、4、5 h，按“2．1”項下色譜條件進樣，測定峰面積。結果，大黃素平均峰面積值為96 024(RSD=1．0%，6例)；大黃酚平均峰面積值為215 545(RSD＝0．9%，6例)。大黃素和大黃酚在5 h內穩定。

2．5 精密度試驗 取同一批號調肝靈片(批號：080925)10片，除去薄膜衣，研細，取粉末0．25 g，精密稱定，按“2．8”項下方法操作，再精密吸取供試品溶液10 μl，按“2．1”項下色譜條件連續進樣6次，每次10 μl，測定峰面積。結果，大黃素平均峰面積值為66 977(RSD=1．4%，例)；大黃酚平均峰面積值為233 930(RSD＝1．1%，6例)。本方法精密度良好。

2．6 重現性試驗 取同一批號調肝靈片(批號：080925)10片，除去薄膜衣，研細，取粉末0．25 g，精密稱定6份，按“2．8”項下方法操作，再精密吸取供試品溶液10 μl，按“2．1”項下色譜條件連續進樣，每次10 μl，測定峰面積。計算大黃素、大黃酚含量。結果，大黃素、大黃酚總含量為0．247 mg/g(RSD＝3．31%，6例)。重現性較好。

2．7 回收率試驗 取同一批號調肝靈片(批號：080925)10片，除去薄膜衣，研細，取粉末0．125 g，精密稱定，分別加入已配制好的混合對照品(大黃素0．123 mg/ml，大黃酚0．181 mg/ml)0．1 ml，混勻，按“2．8”項下供試品溶液的制備方法操作，精密吸取供試品溶液10 μl，按“2．1”項下色譜條件進樣，測定峰面積。計算回收率。結果，大黃素、大黃酚總量平均回收率為100．13%(RSD=2．53%，6例)。

2．8 樣品含量測定^[2]取重量差異項下的調肝靈片10片，除去薄膜衣，精密稱定，研細，取粉末0．25 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加甲醇30 ml，密塞，稱定重量，置水浴上加熱回流1 h，放冷，用甲醇補足減失的重量，濾過，精密量取續濾液20 ml，置燒瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇-鹽酸(10C∶C1)溶液15 ml，置水浴中加熱水解1 h，立即冷卻，轉移至分液漏斗中，用氯仿強力振搖提取4次，每次15 ml，合并氯仿液，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇溶解，定量轉移至10 ml量瓶內，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，棄去初濾液，收集續濾液，即得。結果見表1。

3 討論

3．1 本實驗通過對調肝靈片中大黃素大黃酚總量的測定，達到有效的控制制劑質量的目的。調肝靈片是在原調肝靈蜜丸的基礎上進行的劑型改革，對于改革后的劑型片劑，要遵循服用劑量相等于原調肝靈蜜丸劑型的服用劑量的原則，所以在工藝上作相應的改革，因此在質量控制過程中，通過對制劑中大黃素、大黃酚總量測定結果考察，驗證了改革后的提取方法行之有效。

3．2 制訂適合改革后的劑型質量標準，達到控制新劑型質量的目的。本方法快速，準確，行之有效。

參考文獻

［1］ 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(一部).化學工業出版社，2005.

［2］ 陳發奎，等.常用中草藥有效成分含量測定.人民衛生出版社，1997：112.