雞肉組織中四環素類獸藥殘留檢測研究與分析

封紅瑞　田欣欣　李松濤　王孜軒　李雙江

摘要：為更詳細了解山東省德州市臨邑縣雞肉組織中四環素類獸藥殘留情況，本文對國家標準GB/T6682-2008采用的高效液相色譜一串聯質譜的測定方法進行了研究改良。采用固相萃取法對雞肉組織中的土霉素、四環素、強力霉素殘留同時進行提取、凈化、富集、檢測。

關鍵詞：雞肉;獸藥殘量;高效液相色譜法;檢測研究

四環素類抗生素是由放線菌產生的一類廣譜性抗生素，對大多數革蘭氏陽性菌和陰性菌可起到抑制殺菌的作用，因而被廣泛的用于治療各種感染性疾病，微量添加在飼料或動物飲水中則用于預防疾病，提高飼料的利用率，促進動物生長等。久用四環素類抗生素可引起畜禽等動物機體的正常菌群減少，導致動物體內維生素缺乏，后經食物鏈循環間接對人體健康造成潛在損害。因此，檢測雞肉組織中四環素類殘留量對保障人體健康有很重要的意義。本文根據四環素類抗生素的特性，采用HLB小柱作為固相萃取柱，用Mcllvaine-Na2EDTA緩沖溶液對雞肉組織進行低溫提取，并對GB/T6682-2008采用的高效液相色譜法進行研究改良，運用于雞肉組織的檢測，建立了一種加標回收率高、靈敏度更高、檢測結果更準確的檢測方法。

1.材料與方法

1.1樣品來源

本次研究于從臨邑縣不同地區市場隨機購買12只肉雞，每只肉雞體重為2.0～2. 5kg，屠宰后取肌肉組織置于封口袋內，逐一標記，并保存在3℃的恒溫保溫箱里待檢測。 1.2儀器設備 高效液相色譜儀、旋渦振蕩器、移液槍、固相萃取柱、0. 45 um微孔濾膜等。

1.3試劑

鹽酸土霉素、鹽酸強力霉素、鹽酸四環素、甲醇、乙二胺四乙酸二鈉、檸檬酸、磷酸氫二鈉氫氧化鈉等。

1.4限量標準

2.實驗方法

2.1 Mcllvaine-Na2EDTA緩沖溶液的配置

分別稱取1. 29g檸檬酸，1.09g磷酸氫二鈉，3.72g乙二胺四乙酸二鈉于燒杯中，用90mL去離子水溶解，并用氫氧化鈉調節pH=4.O±0.5，轉移至lOOmL容量瓶中，并定容至lOOmL，搖勻待用。

2.2標準溶液的配置

準確稱取50.Omg三種四環素類抗生素于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配置成1.O mg/mL的標準儲備液，然后梯度稀釋為lOOppm、lOppm后冷凍保存待用。

2.3流動相的配置

稱取7. 2g磷酸二氫鈉于燒杯，加入600mL蒸餾水，精密過濾，并用氫氧化鈉調節pH=2.5，超聲20min。

2.4樣品提取

取2.Og雞肉樣，置于50mL離心管中，加入8mL McllvaineNa2EDTA緩沖溶液，渦旋混勻4min，離心機轉速8000r/min離心lOmin，取上清液于另一離心管內。

2.5凈化

在HLB固相萃取柱中加入濾膜，后稱取0.5g HLB于固相萃取柱，依次用3mL甲醇、3mL水活化，加入上清液過柱，用3mL水淋洗、減壓抽干3min，后用3mL草酸甲醇溶液洗脫，將樣品洗到離心管中，用氮氣將離心管中溶液吹干，用移液槍移取甲醇補至1mL，后用高效液相色譜儀檢測雞肉組織中四環素類殘留量。

3.檢測與分析

圖3 2是加1 mL lOppm的四環素類的加標回收測的色譜圖，根據色譜可以計算出四環素的回收率。土霉素、四環素、強力霉素峰面積分別為4. 4867mAU.min、4.0267mAU.min、1. 4884mAU.min，測出量分別為9.72ppm、9.46ppm、8.29ppm，理論量都是10.OOppm，加標回收率分別為97. 2%、94. 6%、82. 9%，說明改良后的檢測方法可完全適用于雞肉組織中四環素類獸藥檢測。

4.結論

測定結果顯示，土霉素、四環素、強力霉素加標回收率分別為97. 2%、94. 6%、82. 9%，即結果說明抽檢的臨邑縣雞肉未檢測出四環素類獸藥殘留。恰印證前期調研結果：養殖場在不同品種雞的養殖過程中只使用中藥。綜上，隨著國家對獸藥的監管力度越來越大，養殖人員素質越來越高，雞肉超標事件愈來愈少，人們的食品健康安全也能夠得到更充分的保障。

5、方法的總結分析

本文采用HLB小柱為固相萃取柱，通過對提取液的選擇、色譜條件的優化建立了一種加標回收率高、準確度高的雞肉中3種四環素類抗生素的檢測分析方法，該方法相對于現有國標方法具有基質干擾少、適用性強、結果準確，重現性好等特點。

四環素類抗生素種類繁多，具有不穩定、流動性強等特點，目前，雖然經改良的高效液相色譜法檢測方法己能夠實現對四環素類抗生素的精準檢測，且選擇性強、分辨率高、假陽性低，但其樣品前處理較復雜，不適合現場實時篩查。相信隨著檢測分析技術的不斷發展，未來將有更多檢測手段使其不斷的完善，能夠更加快捷、高效的檢測出雞肉組織中的四環素類藥物殘留。

參考文獻

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