雞內金對功能性消化不良模型大鼠胃腸功能改善作用

沈 明 ，黃小強 ，阮美江

（1.福建中醫藥大學附屬第二人民醫院，福建 福州 350003；2.福建中醫藥大學藥學院，福建 福州 350122；3.福建中醫藥大學附屬第二人民醫院東二環分院，福建 福州 350011）

功能性消化不良（functional dyspepsia，FD）是以胃腸功能障礙為特征的嚴重疾?。?-2］，其主要特點是有腹痛、腹脹、食欲不振、早飽、嘔吐以及惡心等不適癥狀，在臨床上表現為胃排空和腸推進減慢，部分表現為胃液排空延遲［3］，但缺乏器質性病變［4］，其發病機制目前尚未闡明。雞內金性甘、平，歸脾、胃、小腸、膀胱經，具有健胃消食功效［5］。研究報道雞內金具有增加小腸推進率的作用［6］。故本研究采用功能性消化不良模型大鼠，探討雞內金對功能性消化不良大鼠模型大鼠胃腸功能的改善作用。

1 材 料

1.1 儀器 多功能酶標儀（奧地利Infinite公司）；高速臺式冷凍離心機（美國賽默飛世爾科技有限公司）；垂直電泳槽、多功能成像系統（美國Bio-Rad公司）

1.2 藥品與試劑 雞內金［同仁堂（亳州）飲片有限責任公司，批號：001006133］；多潘立酮（西安楊森制藥有限公司，批號：180345630）；水合氯醛（上海源葉生物科技有限公司，批號：Z03D6Y7011）；胃動素（MOT）和胃泌素（GAS）酶聯免疫吸附（ELISA）測定試劑盒（上海西塘生物科技有限公司，批號：1804081、1809071）；一抗水通道蛋白 4（AQP4）、內皮型一氧化氮合酶（eNOS）、β-肌動蛋白（β-actin）、二抗羊抗鼠和羊抗兔（美國CST公司，批號分別為：59678、5880、3700、14709、14708）；RIPA 裂解液、PMSF蛋白酶抑制劑、SDS-PAGE凝膠制備試劑盒、BCA蛋白濃度定量試劑盒和ECL發光劑（上海碧云天生物科技有限公司，批號分別為：P0013B、ST506、P0690、P0012、P0018FS）。

1.3 動物 60只SPF級SD大鼠，雌雄各半，體質量180～200 g，購自上海史萊克實驗動物中心，生產使用合格證：SCXK（滬）2018-0006，飼養于福建中醫藥大學動物實驗中心SPF級動物房，溫度21～23℃，相對濕度55%～75%，12 h晝夜循環，適應性飼養7 d后用于實驗。

2 方 法

2.1 藥物制備

2.1.1 雞內金水提物的制備 取雞內金藥材100 g，放置圓底燒瓶中，然后加入8倍量蒸餾水，浸泡30 min后，武火煮沸后轉文火煎煮20 min，抽濾；濾渣再加6倍量蒸餾水，武火煮沸后轉文火煎煮20 min，抽濾；合并2次濾液，60℃下減壓濃縮至0.4 g／mL適量，備用。

2.1.2 多潘立酮溶液的制備 將多潘立酮研成細粉末，溶于水中，制備成質量濃度0.000 4 g／mL的溶液，備用。

2.2 分組、造模與給藥 將60只大鼠適應性飼養1周后，隨機分為正常組，模型組，多潘立酮組［0.004／（kg·d）］，雞內金低、中、高劑量組［生藥材1、2、4／（kg·d）］，每組 10 只。 正常組大鼠灌胃給予常溫生理鹽水，其余各組大鼠給予0℃ 0.5 mol／L稀鹽酸（劑量1 mL／100 g體質量）誘導功能性消化不良模型［7］。 連續造模 14 d 后，按照 1 mL／100 g 體質量灌胃給藥，正常組、模型組大鼠給予常溫生理鹽水，其余各組大鼠給予相應濃度藥物，每天灌胃給藥1次。連續給藥7 d后采用10%水合氯醛（0.35 mL／100 g體質量）麻醉腹主動脈取血后處死，檢查各組大鼠胃排空和腸推進功能，并取胃組織液氮速凍后，保存于－80℃低溫冰箱，備用。

2.3 大鼠胃排空和小腸推進功能測定 大鼠禁食不禁水12 h后，給予半流質飼料和碳粉混合物，2 g／只，第 30 min給予水合氯醛 0.3 mL／100 g腹腔注射麻醉，大鼠腹主動脈取血處死；然后取胃組織在洗凈前后分別稱定質量，并計算胃內殘渣量（胃內殘渣量＝胃總質量-胃凈質量），以評價大鼠胃排空功能；取小腸平鋪，測量半流體飼料和碳粉混合物從胃幽門括約肌推動到回盲腸的距離，并計算小腸推進率（小腸推進率＝幽門至碳末前沿的長度／幽門至盲腸長度×100%）。

2.4 大鼠血清中GAS和MOT測定 取血后離心3 000 r／min，10 min，取上清，按照試劑盒說明書步驟，用ELISA法測定大鼠血清中GAS和MOT含量。

2.5 大鼠胃組織中AQP4和eNOS蛋白表達檢測取胃組織，采用液氮研磨法，以1∶10比例（0.1 g組織∶1 mL 裂解液），12 000 r／min 離心 10 min， 取上清液，用BCA試劑盒進行蛋白定量，制備樣品；采用SDS-PAGE凝膠制備試劑盒制備10%分離膠和5%濃縮膠，上樣，電泳，PVDF轉膜，5%脫脂奶粉封閉2 h后加一抗，其中內參 1∶5 000，其他抗體 1∶1 000，過夜，TBST 沖洗 3 次，加入二抗 1∶5 000，TBST沖洗3次，ECL發光液顯影。

2.6 統計學方法 采用SPSS 20.0軟件進行分析處理。計量資料符合正態分布的以（）表示，采用單因素方差分析檢驗。

3 結 果

3.1 6組大鼠胃排空功能的影響 見表1。

表1 6組大鼠胃排空功能的影響（）

表1 6組大鼠胃排空功能的影響（）

注：與正常組比較，1） P＜0.01；與模型組比較，2） P＜0.01，3） P＜0.05。

組別正常組模型組多潘立酮組雞內金低劑量組雞內金中劑量組雞內金高劑量組n 10 10 10 10 10 10胃內殘渣量／g 0.83±0.15 1.70±0.121）1.27±0.142）1.67±0.11 1.56±0.13 1.47±0.143）

3.2 6組大鼠小腸推進功能的影響 見表2。

3.3 6組大鼠血清中GAS和MOT的影響 見表3。

表2 6組大鼠小腸推進功能的影響（）

表2 6組大鼠小腸推進功能的影響（）

注：與正常組比較，1） P＜0.01；與模型組比較，2） P＜0.01。

組別正常組模型組多潘立酮組雞內金低劑量組雞內金中劑量組雞內金高劑量組n 10 10 10 10 10 10小腸推進率／%67.05±7.61 43.87±5.701）61.42±4.702）46.55±6.18 51.85±5.192）56.16±5.192）

表3 6組大鼠血清中GAS和MOT的影響（）pg／mL

表3 6組大鼠血清中GAS和MOT的影響（）pg／mL

注：與正常組比較，1） P＜0.01；與模型組比較，2） P＜0.05，3） P＜0.01。

組別正常組模型組多潘立酮組雞內金低劑量組雞內金中劑量組雞內金高劑量組n 10 10 10 10 10 10 GAS 188.41±20.71 109.85±14.301）152.52±23.402）116.95±12.85 128.65±15.823）142.76±16.102）MOT 107.69±14.34 58.57±8.581）80.21±8.742）61.90±6.01 69.18±8.473）77.42±11.072）

3.4 6組大鼠胃組織中AQP4和eNOS蛋白表達的影響 見圖1和表4。

圖1 6組大鼠胃組織中AQP4和eNOS蛋白表達

表4 6組大鼠胃組織中AQP4和eNOS 蛋白表達的影響（）

表4 6組大鼠胃組織中AQP4和eNOS 蛋白表達的影響（）

注：與正常組比較，1） P＜0.01；與模型組比較，2） P＜0.05，3） P＜0.01。

組別正常組模型組多潘立酮組雞內金低劑量組雞內金中劑量組雞內金高劑量組n 10 10 10 10 10 10 AQP4／β-actin 1.00±0.18 0.68±0.141）0.86±0.182）0.76±0.18 0.89±0.172）0.92±0.233）eNOS／β-actin 1.00±0.26 1.89±0.431）1.16±0.353）1.47±0.452）1.21±0.313）0.91±0.233）

4 討 論

據統計，全球范圍內FD的發病率約為10%～30%［8］，其發病因素與腦腸軸失衡、胃腸運動功能障礙、內臟過敏、慢性炎癥、幽門螺桿菌感染、精神和心理因素有關［9-10］，其中胃腸運動功能障礙是FD的主要病理生理學基礎，研究發現高達50%以上的FD患者都存在胃腸動力障礙［11］，因此胃腸動力障礙在FD發生中起著重要作用，提示增加胃動力藥物成為FD的主要治療方案之一。GAS主要由胃竇G細胞分泌，可刺激胃酸的分泌，調節胃腸運動功能，是一種可興奮胃腸運動的腦腸肽［12］。MOT是一種促進和影響胃腸蠕動及胃腸道對水、電解質運輸的消化道激素，可以直接促進胃腸的肌纖維收縮，防止內容物反流［13］，提示GAS和MOT在治療FD患者中發揮重要作用。

AQP4蛋白廣泛分布于胃組織細胞中，對胃酸分泌、水分轉運和滲透壓調節起到重要作用［14］。內皮型eNOS以L-精氨酸為底物合成NO，NO具有調節血管、抑制血小板凝聚、保護內皮細胞等作用［15］。曹峰等［16］在茯苓甘草湯對功能性消化不良大鼠的調節研究中發現功能性消化不良的改善與胃組織中AQP4和eNOS蛋白表達有關，說明FD發病與AQP4和eNOS表達有關。

本研究結果顯示：雞內金可以增強FD模型大鼠胃排空和小腸推進率，提高血清中GAS和MOT水平，上調胃組織中AQP4蛋白表達和降低胃組織中eNOS表達水平，從而改善FD模型大鼠胃腸功能。