孵化期間淮南麻雞蛋殼鈣磷變化的研究

文│邱敬亭（安徽省池州市貴池區畜牧獸醫局）

種蛋能否正常發育，不僅取決于孵化條件的好壞，蛋內營養成分的吸收情況對其也有很重要的影響，所以探討種蛋各組成成分在孵化期間吸收轉移規律已受到許多人的關注。蛋殼的質量是衡量蛋雞生產成績好壞的一項十分重要的指標，它與種蛋的入孵率、孵化率、雞苗質量以及商品鮮蛋的質量、經濟效益密切相關。鈣是生物體內重要的元素之一，是影響胚胎發育的一個重要因素，禽類胚胎發育所需鈣來源于卵內容物和卵殼，但這兩部分對胚胎發育的供給在時間和量上存在不同，其中卵殼是禽類胚胎發育的主要鈣源。在生命活動代謝中，尤其是骨骼的生長發育，鈣、磷兩種元素存在密切的關系。

蛋殼是一種完美的生物材料，其質量對于蛋的孵化、貯存和運輸均有重要影響。鈣磷是雞體內含量最多的礦物質營養元素，也是孵化期間影響胚胎發育的重要因素。對孵化過程中胚胎發育的研究，主要集中在胚胎發育的形態學變化研究。目前大多集中在蛋殼超微結構的研究，有通過蛋殼超微結構的異同區分不同種類，也有從育種學的角度研究蛋殼的超微結構，但對孵化過程中蛋殼理化性質變化的研究則很少。本項目主要通過研究種蛋在孵化期間的鈣磷變化，為進一步研究胚胎的發育機理提供理論依據。

表1 淮南麻雞蛋殼顏色的測定結果與試驗分組（按b值大小）

一、材料與方法

1.材料。

（1）種蛋來源。選擇淮南市農業科學研究所提供的40周齡淮南麻雞所產的種蛋。種蛋入孵后分別于0天(入孵前）、6天、12天、18天、21天（出雛）取發育正常的種蛋，解剖分離蛋殼（包括外殼膜）用于鈣、磷測定。

（2）試驗用具、藥品與設備。試驗用具與藥品主要包括：100毫升培養皿、膠頭吸管、鑷子、甲醛、坩堝、容量瓶、電爐、甲醛、甲基紅、氨水溶液（1∶1）、醋酸溶液（1∶4）、4.2%草酸銨溶液、硫酸溶液（1∶3）、高錳酸鉀等；設備主要包括電子天平、CR-10型色差儀（JAPAN）、依愛牌模糊控制EIF/CDM4200型全自動孵化機、出雛器等。

2.試驗分組。選擇3 0 0枚淮南麻雞合格種蛋，用色差儀在同一基準值測量每枚種蛋鈍端的b值（黃度），按b值大小分成淺色組（6.4～20.8）、中色組（2 0.9～2 5.8）和深色組（25.9～34.3）三組，每組為100枚。

3.孵化管理。

（1）孵化條件。1～18天孵化溫度為37.8℃，相對濕度為55%，19～21天孵化溫度37.3℃，相對濕度70%；每2小時自動翻蛋1次，翻蛋角度為90°。第一次（入孵前）消毒和第二次（落盤時）消毒均采用甲醛、高錳酸鉀熏蒸消毒法。第6天照蛋除去無精蛋和死胚蛋；第11天和第18天照蛋除去死胚蛋；第19天落盤；第21天出雛，并進行稱重。

（2）孵化期間種蛋的剖檢。在入孵的第0、6、12、18、21天分別從蛋色組中取10枚發育正常種蛋進行測定蛋殼的鈣磷含量。

◎圖1 不同胚齡蛋殼重量的變化

◎圖2 不同胚齡蛋殼鈣含量變化

4.測定方法。中國農業大學主編《家畜飼養學實驗指導》中所述方法，其中鈣采用“高錳酸鉀法”，磷采用比色法。

（1）蛋殼中鈣含量的測定。試樣制備：在灰化后的坩堝灰分中加10毫升鹽酸（1∶3），用滴管滴幾滴濃HNO3，在電爐上煮沸后過濾至100毫升容量瓶中，用蒸餾水沖洗坩堝與漏斗濾紙，冷卻后定容。

鈣沉淀：用20毫升的移液管準確移取20毫升試樣于250毫升燒杯中，加蒸餾水100毫升，加2滴甲基紅指示劑，用滴管滴加氨水溶液（1∶1）使溶液變成黃色，再用滴管滴加使溶液呈紅色，將燒杯放在電爐上加熱煮沸，緩慢加入10毫升4.2%草酸銨溶液。沖洗煮沸后取下，靜置12小時，將燒杯中草酸鈣無損地轉移到濾紙上，用熱蒸餾水沖洗燒杯和玻璃棒3～5次，然后用熱蒸餾水沖洗濾紙9～10次，將濾紙連同沉淀物重新放入原燒杯中。

滴定:在燒杯中加入10毫升硫酸溶液（1∶3），蒸餾水50毫升，在電爐上加熱至75～85℃，立即用0.052摩爾/升高錳酸鉀溶液滴定至溶液呈微紅色，30秒不褪色，記錄消耗高錳酸鉀的體積數。

空白測定：除不加試樣分解液外，其他操作同上。

（2）蛋殼中磷含量的測定。定容：用2毫升吸管準確吸取試樣分解液2毫升，放入25毫升比色管中，分別用吸管加2毫升鉬酸銨溶液，1毫升20%亞硫酸鈉溶液，1毫升0.5%對氫醌溶液，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，靜置（30分鐘）。

空白測定：除不加試樣分解液外，其他操作同上。

磷比色測定：在752N紫外可見分光光度計中，波長設定650納米，以空白液調零，測定并記錄試樣的吸光度。

5.數據處理。采用SPSS10.0軟件對試驗數據進行處理和顯著性檢驗。根據測定的蛋殼的重量、蛋殼鈣含量和磷含量換算成百分比的形式表示蛋殼的含鈣和含磷量。

二、結果分析

1.不同胚齡蛋殼重量的變化。從結果可知，在淺色組，0胚齡與6胚齡、12胚齡差異不顯著（P＞0.05），與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）；在中色組，0胚齡與6胚齡、12胚齡差異不顯著（P＞0.05），與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）；在深色組，0胚齡與6胚齡、12胚齡差異不顯著（P＞0.05），與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）。從不同蛋色組來看，在0、6、12、、18、21胚齡時，深色組與淺色組和中色組差異顯著（P＜0.05），淺色組和中色組差異不顯著（P＜0.05）。

由圖1可看出，在孵化期間，隨著胚齡的增加，不同蛋色組的平均蛋殼重量都是呈現降低的趨勢。不同胚齡、不同蛋色組之間，蛋殼重量明顯不同，從大到小依次是：深色組、淺色組、中色組。

2.不同胚齡蛋殼鈣含量的變化。從結果可知，在淺色組，0胚齡與6胚齡、12胚齡差異不顯著（P＞0.05），與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）；在中色組，0胚齡與6胚齡、12胚齡差異不顯著（P＞0.05），與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）；在深色組，0胚齡與6胚齡、12胚齡差異不顯著（P＞0.05），與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）。從不同蛋色組來看，在0、6、12、18、21胚齡時，深色組與淺色組和中色組差異顯著（P＜0.05），淺色組和中色組差異不顯著（P＜0.05）。

由圖2可看出，在整個孵化過程中，不同蛋色組在不同胚齡階段蛋殼的鈣含量總體呈現下降的趨勢。在0～12胚齡，蛋殼的鈣含量下降速度較慢；在12～21胚齡，蛋殼的鈣含量下降速度相對較快。從不同蛋色組蛋殼鈣含量情況來看，深色組蛋殼鈣含量顯著高于中色組和淺色組（P＜0.05），中色組和淺色組之間差異不顯著（P＞0.05）。

3.不同胚齡蛋殼磷含量的變化。從結果可知，在淺色組，0胚齡與6胚齡差異不顯著（P＞0.05），與12胚齡、18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05），其中，12胚齡與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）；在中色組，0胚齡與6胚齡、12胚齡差異不顯著（P＞0.05），與18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）；在深色組，0胚齡與6胚齡差異不顯著（P＞0.05），與12胚齡、18胚齡、21胚齡差異顯著（P＜0.05）。從不同蛋色組來看，在0、6、12、18、21胚齡時，深色組與淺色組和中色組差異顯著（P＜0.05），其中，淺色組和中色組差異顯著（P＜0.05）。

由圖3可看出，在整個孵化期間，不同蛋色組蛋殼磷含量隨著胚齡的增加呈現逐漸降低的趨勢。在0～6胚齡和12～18胚齡，蛋殼磷含量下降緩慢；在6～12胚齡蛋殼磷含量下降速度最快。從不同蛋色組蛋殼磷含量情況來看，淺色組蛋殼磷含量顯著高于中色組和深色組（P＜0.05），以中色組蛋殼磷含量最低。

◎圖3 不同胚齡蛋殼磷含量的變化

三、討論與小結

1.孵化過程中蛋殼鈣含量的變化。試驗研究結果表明，在整個孵化過程中，不同蛋色組在不同胚齡階段蛋殼的鈣含量總體呈現下降的趨勢。在0～12胚齡，蛋殼的鈣含量下降速度較慢；在12～21胚齡，蛋殼的鈣含量下降速度相對較快。從不同蛋色組蛋殼鈣含量情況來看，深色組蛋殼鈣含量顯著高于中色組和淺色組（P＜0.05），中色組和淺色組之間差異不顯著（P＞0.05）。孵化早期胚胎處于卵裂和器官初步形成期，所需鈣數量較少，主要由卵內容物供給；中后期胚胎發育處于器官形成和生長發育期，尤其是骨骼的快速生長發育，形成了對鈣的大量需求。蛋殼是雞胚胎發育的重要鈣源，提供了鈣總需求量的89.12%，約為每克卵內容物提供胚胎鈣量的7.19倍。早期胚胎處于卵裂和組織器官的初步形成期，所需鈣量較少，主要由卵內容物供給，中、后期是器官形成和生長發育期，尤其是骨骼的生長，再加上出雛前卵黃對鈣的富集作用，形成了對鈣源的大量需求，僅靠卵內容物中的鈣就滿足不了胚胎發育的需要，卵殼就成為主要的鈣源。詳細機理尚需進一步研究。

2.孵化過程中蛋殼磷含量的變化。試驗研究結果表明，不同蛋色組蛋殼磷含量隨著胚齡的增加呈現逐漸降低的趨勢。在0～6胚齡和12～18胚齡，蛋殼磷含量下降緩慢；在6～12胚齡蛋殼磷含量下降速度最快。從不同蛋色組蛋殼磷含量情況來看，淺色組蛋殼磷含量顯著高于中色組和深色組（P＜0.05），以中色組蛋殼磷含量最低。磷含量的急劇降低是從9胚齡開始，而早于鈣，到12胚齡達到高峰。孵化期間各階段蛋殼中鈣、磷比例看，淮南麻雞發育階段對鈣、磷的吸收利用情況不同于胚后發育，這主要是因為胚胎期重點在組織器官的形成，而胚后發育重點在于個體生長。

磷含量低會降低產蛋率，影響蛋殼質量，降低種蛋的孵化率，但日糧中的磷含量過高時，也會影響蛋殼質量。磷孵化前期變化不明顯，中期較為明顯，后期趨于穩定。該研究符合禽類胚胎發育規律。從蛋色組來看，深色組無論是在蛋殼重量上，還是鈣磷含量上，都要比淺色組和中色組要高，但是隨著孵化的進行，三個蛋色組在蛋殼重量、鈣磷上都呈現規律性變化。中期是胚胎各種組織器官的形成、發育時期，而磷除了參與骨骼的形成外，還參與各種代謝活動，尤其是生物膜的形成、遺傳信息的傳遞、能量的供應等，所以中期磷的供給尤為重要。但卵內物質含磷量較高，在供給胚胎發育需要的時間量上與卵殼有何互補關系。詳細機理尚需進一步研究。

四、結論

在整個孵化過程中，不同蛋色組在不同胚齡階段蛋殼的鈣、磷含量總體呈現下降的趨勢，其中：深色組蛋殼鈣含量最高，淺色組蛋殼磷含量最高。