慢性阻塞性肺疾病不同階段血漿微纖絲相關蛋白4水平變化及其臨床意義

王保貴，閔生萍，徐曉玲

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一種以持續氣流受限為特征的慢性肺部疾病，氣流受限多呈進行性發展，且具有極高的發病率和致殘率［1］。肺功能檢查是目前診斷COPD的“金標準”，但其可能導致部分患者誤診［2］。因此，臨床工作中還需要尋找一些新的、無創傷、經濟實用的指標輔助診斷COPD。微纖絲相關蛋白4（MFAP4）是一種在肺內呈高表達的細胞外基質糖蛋白［3］，免疫組織化學及免疫電子顯微鏡發現其存在于肺血管彈性纖維組織、肺泡間隔、血管外膜、支氣管黏膜下層［4-5］。目前，細胞外基質相關物質被認為是一種評估呼吸系統疾病活動性、嚴重程度的參考指標。本研究旨在分析COPD穩定期、慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）患者血漿MFAP4水平變化及其臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年4月—2017年4月在阜陽市人民醫院門診就診的COPD穩定期患者50例作為A組，呼吸科收治的AECOPD患者30例作為B組，均符合《慢性阻塞性肺疾病診治指南（2013年修訂版）》［2］中COPD及AECOPD的診斷標準。另選取同期體檢健康者30例作為對照組。三組受試者年齡、性別、吸煙指數比較，差異無統計學意義（P＞0.05，見表1），具有可比性。本研究經阜陽市人民醫院醫學倫理委員會審核批準，所有患者對本研究知情并簽署知情同意書。

表1 三組受試者一般資料比較Table 1 Comparison of general information in the three groups

1.2 排除標準 （1）合并其他部位感染者；（2）合并免疫系統疾病、血液系統疾病、糖尿病及腫瘤者；（3）有其他肺部疾病者；（4）合并心、腦、肝、腎功能不全者。

1.3 觀察指標 比較對照組與A組受試者入院時肺功能指標〔包括第1秒用力呼氣容積占預計值百分比（FEV1%perd）、第1秒用力呼氣容積與用力肺活量比值（FEV1/FVC）〕、6分鐘步行距離（6MWD）、改良版英國醫學研究會呼吸困難量表（mMRC）評分及血漿MFAP4水平；記錄A組患者治療3、6、9、12個月血漿MFAP4水平；比較B組患者入院時及治療1個月后肺功能指標、mMRC評分、血漿MFAP4水平及炎性反應指標〔包括白細胞計數（WBC）、C反應蛋白（CRP）〕。

1.4 檢測方法 （1）肺功能指標：要求受試者吸入硫酸沙丁胺醇0.5 mg，15 min后采用日本CHEST HI-801肺功能儀檢測FEV1%pred、FEV1/FVC。（2）6分鐘步行試驗：選擇一條長50 m的僻靜平直走廊，備好急救藥品，折返處設置錐形標記，起始處設置紅色線條標記，記錄受試者6 min內在自己體能允許范圍內盡快走的距離。（3）采用mMRC評估患者呼吸困難程度，評分越高提示患者呼吸困難越嚴重［6］。（4）MFAP4：取受試者靜脈血5 ml并置于乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管中，3 000 r/min離心20 min（離心半徑8 cm），留取上清液并置于-80 ℃冰箱中保存待測，采用人MFAP4酶聯免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒檢測血漿MFAP4水平。（5）炎性反應指標：采用流式熒光染色法檢測WBC，所用儀器為邁瑞BC-6900血液分析儀；采用免疫比濁法檢測CRP，所用儀器為西門子生化分析儀。

1.5 統計學方法 采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據處理，計量資料以（±s）表示，組間比較采用成組t檢驗，組內比較采用配對t檢驗；血漿MFAP4水平與COPD穩定期患者入院時FEV1%pred、6MWD及同期FEV1%pred的相關性分析采用Pearson相關分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對照組和A組受試者入院時肺功能指標、6MWD、mMRC評分及血漿MFAP4水平比較 A組患者入院時FEV1%pred、FEV1/FVC低于對照組，6MWD短于對照組，mMRC評分和血漿MFAP4水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05，見表2）。

表2 對照組和A組受試者入院時肺功能指標、6MWD、mMRC評分及血漿MFAP4水平比較（±s）Table 2 Comparison of index of pulmonary function，6-minute walking distance，mMRC score and plasma MFAP4 level between control group and A group at admission

注：FEV1%pred=第1秒用力呼氣容積占預計值百分比，FEV1/FVC=第1秒用力呼氣容積與用力肺活量比值，6MWD=6分鐘步行距離，mMRC=改良版英國醫學研究會呼吸困難量表，MFAP4=微纖絲相關蛋白4

MFAP4（U/ml）對照組 30 91.37±5.03 86.60±7.04 598.33±48.78 0.17±0.38 5.94±0.76 A 組 50 51.58±16.68 51.26±11.89 408.30±69.45 2.10±1.08 10.64±2.92 t值 -16.697 -12.691 -14.333 9.492 8.593 P 值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01組別 例數 FEV1%pred（%）FEV1/FVC（%）6MWD（m）mMRC評分（分）

2.2 相關性分析 Pearson相關分析結果顯示，血漿MFAP4水平與COPD穩定期患者入院時FEV1%pred、6MWD呈負相關（r值分別為-0.948、-0.744，P＜0.05，見圖1～2）。A組患者治療3個月血漿MFAP4水平為（10.77±8.66）U/ml，治療6個月為（10.92±8.79）U/ml，治療9個月為（11.02±8.94）U/ml， 治 療 12個 月 為（11.56±9.53）U/ml。Pearson相 關分析結果顯示，血漿MFAP4水平與COPD穩定期患者同期FEV1%pred呈負相關（r=-0.949，P＜0.05，見圖3）。

圖1 血漿MFAP4水平與COPD穩定期患者入院時FEV1%pred關系的散點圖Figure 1 Scatter plot for correlation between plasma MFAP4 level and FEV1%pred in patients with stable COPD at admission

圖2 血漿MFAP4水平與COPD穩定期患者入院時6MWD關系的散點圖Figure 2 Scatter plot for correlation between plasma MFAP4 level and 6-minute walking distance in patients with stable COPD at admission

2.3 B組患者入院時及治療1個月后肺功能指標、mMRC評分、血漿MFAP4水平及炎性反應指標比較 B組患者入院時及治療1個月后FEV1/FVC比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；治療1個月后B組患者FEV1%pred和血漿MFAP4水平高于入院時，mMRC評分及WBC、CRP低于入院時，差異有統計學意義（P＜0.05，見表3）。

表3 B組患者入院時及治療1個月后肺功能指標、mMRC評分、血漿MFAP4水平及炎性反應指標比較（±s）Table 3 Comparison of index of pulmonary function，mMRC score，plasma MFAP4 level and inflammatory reaction indicators in group B at admission and 1 month after treatment

表3 B組患者入院時及治療1個月后肺功能指標、mMRC評分、血漿MFAP4水平及炎性反應指標比較（±s）Table 3 Comparison of index of pulmonary function，mMRC score，plasma MFAP4 level and inflammatory reaction indicators in group B at admission and 1 month after treatment

注：WBC=白細胞計數，CRP=C反應蛋白

時間 FEV1%pred（%） FEV1/FVC（%） mMRC評分（分） MFAP4（U/ml） WBC（×109/L） CRP（mg/L）入院時 41.13±11.01 44.30±11.22 2.67±0.16 9.26±2.08 11.81±2.22 62.90±21.71治療 1 個月后 47.70±9.84 48.70±11.01 2.20±0.72 11.09±2.06 6.82±1.23 6.61±2.21 t配對值 -2.436 -1.533 2.311 -3.420 10.747 14.131 P值 0.018 0.131 0.024 0.001 ＜0.01 ＜0.01

3 討論

COPD是中老年人群的常見病、多發病，其發病機制復雜，可能由多種因素相互作用所致。近年來隨著環境污染加重及人們不良生活習慣增多，COPD發病率呈現逐年上升趨勢，已引起臨床高度重視［7-8］。目前，臨床醫生主要依據患者臨床癥狀、肺功能檢查結果、血氣分析結果、mMRC評分等評估COPD嚴重程度，尚缺乏操作簡單、易行、無創傷的生物學標志物。

圖3 血漿MFAP4水平與COPD穩定期患者同期FEV1%pred關系的散點圖Figure 3 Scatter plot for correlation between plasma MFAP4 level and FEV1%pred in patients with stable COPD during corresponding period

MFAP4主要位于血管外基質纖維，其含有一個能與整合素結合及具有激活能力的N端引入RGD序列［9-10］，可直接與彈性蛋白、肌原纖維蛋白、膠原蛋白結合［11］，但其生物學功能尚不完全明確。既往研究表明，MFAP4與動脈粥樣硬化、主動脈瘤、肺動脈高壓、肝硬化等發生發展有關［10，12-13］。肺動脈高壓患者MFAP4水平升高，但穩定期動脈粥樣硬化患者MFAP4水平降低［14］。MFAP4在肺部呈高表達，可存在于肺彈性纖維、肺泡組織、支氣管黏膜下層及肺血管中，但其在COPD發病機制中的具體作用尚未十分清楚。既往研究發現，MFAP4可使血管外平滑肌細胞活化、增殖，導致血管狹窄、彈性纖維聚集及肺氣腫［10，15］，但其是否可以作為COPD不同時期生物學標志物尚存在爭議。

本研究結果顯示，A組患者入院時FEV1%pred、FEV1/FVC低于對照組，6MWD短于對照組，mMRC評分和血漿MFAP4水平高于對照組，提示COPD穩定期患者肺功能及心肺耐力降低，血漿MFAP4水平升高。FEV1%pred和6MWD是目前評估COPD嚴重程度的經典臨床指標，因此本研究僅分析血漿MFAP4水平與COPD穩定期患者入院時FEV1%pred、6MWD的相關性，結果顯示，血漿MFAP4水平與COPD穩定期患者入院時FEV1%pred、6MWD呈負相關，提示血漿MFAP4水平與COPD穩定期患者病情嚴重程度有關。既往研究表明，隨著年齡增長，肺容量呈下降趨勢，機體各個臟器、組織趨于萎縮，肺功能也不斷減退，而COPD患者肺功能減退更明顯［16］。筆者還發現，治療3、6、9、12個月COPD穩定期患者血漿MFAP4水平有升高趨勢，進一步行Pearson相關分析結果顯示，血漿MFAP4水平與COPD穩定期患者同期FEV1%pred呈負相關，提示血漿MFAP4水平與COPD穩定期患者肺功能進行性減退有關，可作為評估COPD穩定期嚴重程度的新指標。

因考慮到AECOPD患者安全性，因此未測量6MWD。本研究結果顯示，治療1個月后B組患者FEV1%pred和血漿MFAP4水平高于入院時，mMRC評分及WBC、CRP低于入院時，提示治療1個月后AECOPD患者肺功能明顯改善及炎性反應明顯減輕，但血漿MFAP4水平卻出現升高情況，與血漿MFAP4水平與COPD穩定期患者病情嚴重程度及肺功能進展有關不同，分析其原因可能為AECOPD患者伴有的炎性反應影響血漿MFAP4水平［17］，故AECOPD患者血漿MFAP4水平反而較COPD穩定期患者降低，但具體原因尚有待進一步研究探索。

綜上所述，COPD穩定期患者血漿MFAP4水平升高，而AECOPD患者血漿MFAP4水平較COPD穩定期降低；血漿MFAP4水平與COPD穩定期患者肺功能呈負相關，可作為評估COPD穩定期嚴重程度的新指標；但本研究樣本量較小，入組前患者治療情況及合并癥可能影響研究結果，且AECOPD患者血漿MFAP4水平降低原因尚未明確，仍有待大樣本量、多中心前瞻性研究進一步證實。

作者貢獻：王保貴進行文章的構思與設計，結果分析與解釋，負責撰寫論文，對文章整體負責，監督管理；徐曉玲進行研究的實施與可行性分析；王保貴、閔生萍進行數據收集、整理、分析；閔生萍負責文章的質量控制及審校。

本文無利益沖突。