AL患者血清鐵調素、Treg細胞及NK細胞水平的變化與其預后的關系分析

陳雅彬 張江

(中國人民解放軍新疆軍區總醫院血液科，新疆 烏魯木齊 830000)

AL是一種起源于造血組織并于骨髓以及相關造血組織惡性增殖的高度異質性惡性克隆性疾病[1]，臨床較為常見的并發癥為貧血，其發病機制較為復雜，通常是由于紅系在受到高水平的炎癥因子的影響，合成受到抑制，同時，白血病細胞的惡性增殖也會一定程度降低紅系細胞的生成，且放療化療、鐵吸收利用障礙、紅細胞壽命縮短、紅細胞生成素功能受到影響等均可能引發貧血的發生[2]，AL患者發生貧血會嚴重影響患者的生活質量。研究顯示，Hepcidin主要由肝臟合成，可以通過對巨噬細胞釋放鐵和十二指腸吸收鐵的作用進行調控，來維持機體相關細胞中鐵元素的穩定，其在貧血的發病過程中起著重要的作用，因此，Hepcidin是AL患者預后不良的重要指標[3]。臨床最新研究結果顯示，AL患者的機體免疫功能與疾病的發生以及進展過程關系密切，并且細胞免疫相比而言在整個過程中占據更為重要的地位[4]。而Treg細胞及NK細胞又在機體細胞免疫調節過程中起著重要的作用，其中Treg細胞是一種可以限制過度免疫或者不適當免疫的一致性T細胞；NK細胞是一種可以殺死介質、識別靶細胞并參與自身免疫性疾病以及超敏反應的重要免疫細胞[5]。故本文探討AL患者血清Hepcidin、Treg細胞及NK細胞水平的變化與其預后的關系，為AL患者的臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析我院2016年6月至2017年12月收治的110例AL患者的臨床資料，分別納入初診組92例和移植組18例，初診組中男53例，女39例；年齡20～65歲，平均(31.84±7.96)歲；予化學藥物治療。移植組中男10例，女8例；年齡21～64歲，平均(32.45±7.85)歲。另選取同期健康體檢者60名為對照組，其中男36名，女24名；年齡20～60歲；平均(32.13±8.65)歲。三組受試者在年齡、性別等一般資料方面差異不顯著，具有可比性(P>0.05)。

1.2診斷標準 參考《血液病診斷及療效標準》中關于急性白血病的診斷標準[6]，(1)體征：肝脾及淋巴結腫大，胸骨壓痛，皮膚出血斑點；(2)臨床癥狀：周身出現不同程度的乏力酸痛，顯著性出血以及進行性貧血，急驟高熱；(3)實驗室指標：患者的白細胞總數顯著減少或增多，可出現幼稚或者原始細胞；骨髓細胞中原始細胞量不少于非紅系細胞的20%，核紅細胞不高于全部核細胞的50%，即可診斷AL。

1.3納入和排除標準 納入標準：(1)符合上述AL的診斷標準者；(2)本實驗經本院醫學倫理委員會批準；(3)患者及家屬同意并積極配合本次實驗，簽署知情協議書。排除標準：(1)近期進行激素、鐵劑以及免疫抑制劑類藥物治療者；(2)移植物與宿主相容性不良者；(3)慢性感染、炎癥以及炎癥反應；(4)合并有惡性腫瘤、肝硬化、冠心病、高血脂以及糖尿病等消耗性疾病者；(5)由其他疾病引起的貧血者；(6)新進或者活動性出血；(7)臨床資料不全者。

1.4方法 于患者入組時以及隨訪6個月時，抽取其5 mL清晨空腹靜脈血，同時抽取對照組體檢者空腹靜脈血5 mL，加入35 μL 10%的乙二胺四乙酸抗凝，通過離心機[Ortho BioVue；強生(上海)醫療器材有限公司]在4 ℃、離心半徑為10.5 cm、轉速3 000 r/min條件下，離心10 min，分離得到血清，冰箱-75 ℃條件下保存待測。采用酶聯免疫吸附對血清Hepcidin水平進行測定，試劑盒購于上海斯信生物科技有限公司，操作方法嚴格按照說明書執行。采用流式細胞儀(BD FACSCalibur 342976型，碧迪醫療器械有限公司)對其血清Treg細胞及NK細胞水平進行測定。

1.5急性白血病的療效評定標準 參考1987年全國白血病化學治療討論會中制定的關于急性白血病的療效評定標準[7]，完全緩解(CR)：(1)生活狀態基本接近正常，無白血病所致的體征和癥狀；(2)血象中外周血中沒有白血病細胞，血小板不少于1011/L，中性粒細胞的絕對值不少于1.5×109/L，兒童或者女性的血紅蛋白不少于90 g/L，男性血紅蛋白不少于100 g/L；(3)骨髓象中巨噬細胞和紅細胞基本正常，原粒細胞Ⅱ型+Ⅰ型(幼淋+原淋或幼單+原單)不超過5%。滿足上述3項即為CR。部分緩解(PR)：骨髓象中原粒細胞Ⅱ型+Ⅰ型(幼淋+原淋或幼單+原單)處于5%～20%之間，或者血象、臨床滿足上述1項者，即為PR。未緩解(NR)：臨床、血象以及骨髓象3項均未達到上述標準者，即為NR。緩解率=(完全緩解+部分緩解)/總數×100%。

2 結 果

2.1初診組患者臨床療效分析 初診患者在治療過程中，有2例患者死亡和8例患者放棄治療，其余82例患者。經過誘導治療后64例緩解，緩解率為69.57%。見表1。

表1 初診組患者臨床療效分析[n(%)]

2.2三組血清鐵調素、Treg細胞及NK細胞水平變化 初診組和移植組患者的血清鐵調素、Treg細胞水平均高于對照組，血清NK細胞水平低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 三組血清鐵調素、Treg細胞及NK細胞水平變化比較

注：與對照組相比，*P<0.05；與初診組相比，#P<0.05。

2.3緩解和未緩解患者血清鐵調素、Treg細胞及NK細胞水平的變化 緩解者的血清鐵調素、Treg細胞水平低于未緩解者，NK細胞水平明顯高于未緩解者(P<0.05)。見表3。

表3 緩解和未緩解患者血清鐵調素、Treg細胞及NK細胞水平的變化

2.4AL患者血清鐵調素、Treg細胞及NK細胞水平與其預后緩解情況相關性分析 AL患者的預后緩解情況與血清鐵調素、Treg細胞水平呈現正相關，與NK細胞水平呈現負相關(P<0.05)。見表4。

表4 AL患者血清鐵調素、Treg細胞及NK細胞水平與其預后緩解情況相關性分析

3 討 論

AL患者通常處于以細胞免疫紊亂為主要表現的免疫功能紊亂狀態，另外，隨著臨床免疫學研究的深入，有學者認為繼發性免疫缺陷引發的免疫功能紊亂，對AL患者的預后轉歸影響較大[8]。Treg細胞具有抗自身反應以及維持外周耐受監控的作用，然而AL患者體內的Treg細胞受到免疫功能損傷的影響，會將病變形成的白血病細胞誤認為人體正常的組織細胞，從而抑制機體內部存在的特異性抗腫瘤T細胞對于白血病細胞的清除過程，且嚴重影響了免疫治療的效果[9]。本文結果顯示，AL患者的血清Treg細胞水平明顯高于對照組，提示AL患者的抗腫瘤免疫受到了一定程度的抑制。另外，研究顯示，當機體外周血中的Treg細胞水平相對較高時，在一定程度上可以導致腫瘤細胞發生逃逸現象，進而降低自身的免疫能力，從而影響白血病的治療效果[10]，而本資料中未緩解組患者的Treg細胞水平明顯高于緩解組患者，這也證實了其之間的相關性。

血清Hepcidin是調節機體鐵釋放和吸收的主要因子，在體內鐵平衡的維持過程中起著重要作用，其可以與諸如肝細胞、上皮細胞、巨噬細胞等鐵輸出細胞表面的轉運蛋白進行特異性結合來調節血清鐵濃度[11]。血清Hepcidin水平受到內毒素脂多糖、細菌感染、白細胞介素以及機體鐵濃度的影響。研究顯示，當AL患者體內的Hepcidin水平相對較高時，會促使相關細胞膜表面的特異性結合蛋白發生降解，從而造成機體輸出的鐵量減少，進而負反饋調節體內的鐵代謝，減少體內的鐵含量，最終導致貧血的形成[12]。另外血清內的鐵含量降低到一定閾值也會負反饋調節血清Hepcidin，當患者體內的循環鐵量降低時，會對肝細胞分泌Hepcidin產生抑制作用，當體內循環鐵量增加時，會促進肝臟細胞合成分泌Hepcidin，Hepcidin進入血液中后，又進一步降低血清鐵含量[13]。故而AL患者的血清Hepcidin水平高于對照組，且其與預后緩解情況呈現正相關。正常情況下，NK細胞含有一個大顆粒的淋巴細胞，可以在不受刺激的情況下對某些腫瘤細胞產生溶解效果，并對處于幼稚狀態的病原體受體基因進行識別，同時不需要引物以及片段細胞進行輔助誘導。NK細胞作為效應細胞，具有顯著的免疫調節和細胞毒功能，可以對機體感染以及腫瘤產生適應性的免疫反應，是對感染以及轉化細胞進行快速殺傷的首要防線。其作為免疫調節細胞可以限制和防止適應性免疫反應，也可以對機體T細胞極化以及DC細胞成熟產生協助作用，進行高效地殺傷腫瘤細胞[14]。本資料結果顯示，AL患者的NK細胞功能受到抑制，降低了其抗腫瘤效果，且預后未緩解患者的NK細胞功能抑制狀態更為嚴重，這與R Handgretinger等[15]的研究結果相一致。

綜上所述，AL患者預后緩解情況與血清鐵調素、Treg細胞水平呈現正相關，與NK細胞水平呈現負相關，血清鐵調素Treg細胞及NK細胞水平檢測對AL患者的預后判斷具有一定的臨床應用價值。