血清對氧磷酶1水平在甲胎蛋白陰性原發性肝癌中的診斷價值

朱波 吳君榮 舒宏 黃昭東 梁藝華 趙惠柳

[摘要] 目的 探討對氧磷酶1（PON1）對甲胎蛋白陰性原發性肝癌（AFP-PHC）的診斷價值及界值。 方法 收集2015年1～12月廣西醫科大學附屬腫瘤醫院住院的60例AFP陰性肝硬化（AFP-LC）患者（AFP-LC組）和46例AFP-PHC患者（AFP-PHC組）的血清，用電化學發光免疫分析法檢測所有納入對象血清AFP水平，酶聯免疫法檢測PON1水平。 結果 AFP-PHC組血清PON1水平明顯低于AFP-LC組，差異有統計學意義（P < 0.05），PON1水平診斷AFP-PHC的受試者工作特征曲線下最大面積為0.768，當PON1水平<234.31 pg/mL，診斷AFP-PHC的敏感性為71.7%，特異性為73.9%。血清PON1水平與AFP-PHC患者肝功能分級、病理分化程度、有無癌栓及乙型肝炎表面抗原是否陽性均無關（P > 0.05）。 結論 血清PON1水平對診斷AFP-PHC具有一定的效能。

[關鍵詞] 對氧磷酶1;肝硬化;原發性肝癌;甲胎蛋白

[中圖分類號] R735.7? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）07（a）-0156-04

Diagnostic value of serum oxaphosphatase 1 level in α-fetoprotein negative primary liver cancer

ZHU Bo? ?WU Junrong? ?SHU Hong? ?HUANG Zhaodong? ?LIANG Yihua? ?ZHAO Huiliu

Clinical Laboratory， the Affiliated Cancer Hospital of Guangxi Medical University， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Nanning? ?530021， China

[Abstract] Objective To evaluate the diagnostic value and the threshold value of paraoxonase 1 （PON1） in α-fetoprotein negative primary liver cancer （AFP-PHC）. Methods From January to December 2015， serum samples of 60 AFP negative cirrhosis patients （AFP-LC group） and 46 AFP-PHC patients （AFP-PHC group） hospitalized in the Affiliated Cancer Hospital of Guangxi Medical University were collected. The serum AFP levels of all included subjects were detected by electrochemoluminescence immunoassay， and PON1 levels were detected by enzyme-linked immunoassay. Results The serum PON1 level in the AFP-PHC group was significantly lower than that in the AFP-LC group， and the difference was statistically significant （P < 0.05）， the maximum area under the subject operating characteristic curve for diagnosis of AFP-PHC by PON1 level was 0.768. When PON1 level < 234.31 pg/mL， the sensitivity and specificity of the diagnosis of AFP-PHC were 71.7% and 73.9% respectively. There was no correlation between serum PON1 level and liver function grade， pathological differentiation degree， tumor thrombus or positive hepatitis B surface antigen in patients with AFP-PHC （P > 0.05）. Conclusion Serum PON1 level is effective is diagnosing AFP-PHC.

[Key words] Paraoxonase 1; Liver cirrhosis; Primary hepatic carcinoma; α-fetoprotein

原發性肝癌（primary hepatic carcinoma，PHC）簡稱肝癌，是指在肝細胞或肝內膽管上皮細胞發生的惡性腫瘤，是我國常見的惡性腫瘤之一。全世界平均每年約有25萬人死于肝癌，而我國約占其中的45%[1]。我國是肝炎大國，也是原發性肝癌的高發區，在腫瘤相關死亡率中位居第二，僅次于肺癌[2]。

甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）測定，是診斷原發性肝癌的特異性標志物，但一部分原發性肝癌AFP是陰性表達。而物理診斷目前無法做到早期診斷[3]。因此，探索對原發性肝癌，特別是對AFP陰性的原發性肝癌有診斷價值的標志物，具有非常重要的臨床意義。

對氧磷酶（paraoxonase，PON）基因家族有PON1、PON2和PON3三個成員[4]。PON1主要由肝臟合成，它能夠水解有機磷，肝細胞合成PON1后，一部分被分泌入循環系統，并與高密度脂蛋白中的載脂蛋白A1緊密結合，另一部分儲存于肝細胞微粒體中[5]。

PON1水平在與脂類代謝有關的疾病，如冠心病、糖尿病、微血管病變等疾病的研究中有較多的報道[6]。最近報道[7]PON1水平是肝慢性損傷的靈敏指標，并且隨著肝硬化患者肝臟損傷程度的增加，血清PON1水平明顯降低。當肝細胞受損嚴重時，PON1水平下降也越明顯。本文對PON1水平在甲胎蛋白陰性原發性肝癌（AFP-PHC）中的診斷價值進行研究，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究的對象均來自于2015年1～12月廣西醫科大學附屬腫瘤醫院住院的患者，其中AFP陰性肝硬化（AFP-LC）患者60例（AFP-LC組），AFP-PHC患者46例（AFP-PHC組），LC患者符合2000年中華醫學會修訂的病毒性肝炎防治方案中肝硬化的診斷標準[8]，PHC患者符合中國2011年版原發性肝癌診斷標準[9]。本研究已獲得醫院醫學倫理委員會批準。AFP-PHC患者肝臟病理分化程度以低分化為主（41%），其次為高分化（33%）和中分化（26%）;70%的AFP-PHC患者存在癌栓。兩組基線資料比較，差異無統計學意義（P > 0.05），具有可比性。見表1。

1.2 方法

采用電化學發光免疫分析法檢測所有研究對象血清AFP水平，檢測儀器為德國羅氏E601及配套試劑。采用酶聯免疫法檢測血清PON1水平，試劑盒由RD公司提供，所有操作均依據試劑盒操作說明書進行，結合酶標儀比色，測定血清樣本PON1水平。

1.3 統計學方法

采用SPSS 19.0對所得數據進行統計學分析，計量資料采用均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗;計數資料采用百分率表示，多樣本組間比較采用χ2檢驗。以受試者工作特征曲線（ROC）評價血清PON1水平對AFP-PHC的診斷價值及界值，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清PON1水平比較

兩組患者血清PON1水平分別為（203.36±80.85）pg/mL和（327.49±181.66）pg/mL，兩組PON1水平比較，差異有統計學意義（P < 0.05）。

2.2 兩組血清PON1水平ROC曲線分析

ROC曲線分析結果顯示，曲線下最大面積為0.769，標準誤為0.046，95%置信區間（95%CI）：0.679～0.858，P < 0.05。以尤登指數最大值來確定臨界值（尤登指數=敏感性+特異性-1），當尤登指數最大值為0.456時，PON1水平臨界值為234.31 pg/mL，對應的敏感性為71.7%，特異性為73.9%。見圖1。

2.3 AFP-PHC患者血清PON1水平與臨床資料分析

不同Child-Pugh分級、分化程度、癌栓、HBsAg情況的AFP-PHC患者血清PON1水平比較，差異均無統計學意義（P > 0.05）。見表2。

3 討論

PON1是PON基因家族的成員之一，主要由肝臟合成，存在于血漿的高密度脂蛋白中。Camps等[10]報道，慢性肝病患者血清中PON1水平明顯降低，同時發現患者血清PON1水平降低越明顯，肝臟損傷程度也越嚴重，提示血清PON1水平與肝臟損傷程度具有較大的相關性。同時，Mackness等[11]通過對慢性肝病患者血清PON1水平研究也得出類似的結果。其發生機制為：肝臟受到損傷越嚴重，肝細胞合成PON1含量越少，另外肝臟合成的高密度脂蛋白減少，PON1未能與高密度脂蛋白中的載脂蛋白A1充分結合而影響其活性的檢測[12]。而肝硬化、肝癌卻是慢性肝損傷肝病的一個發展階段，損傷越嚴重，PON1水平也會越低。PON1基因多態性與冠心病[13]、動脈粥樣硬化[14]具有相關性;但對于PON1基因多態性與原發性肝癌的發生、發展等方面的研究相對較少[15]，由于納入的病例數少且研究的多態性位點有限，結論有待進一步研究。

本研究通過檢測兩組患者血清PON1水平并進行比較分析，采用ROC曲線分析鑒別AFP-LC和AFP-PHC的PON1水平臨界濃度，得出ROC曲線下最大面積為0.769，提示血清PON1水平對區別AFP-LC和AFP-PHC具有一定價值和準確性，當PON1水平<234.31 pg/mL，PON1水平診斷AFP-PHC的敏感性為71.7%，特異性為73.9%。根據相關學者[16]的報道，PON1水平區分AFP-LC和AFP-PHC的特異性和敏感性分析為58.7%和86.7%，具有一定的準確性（ROC曲線下面積為0.676，P < 0.05），且PON1水平在AFP-LC和AFP-PHC中濃度差異顯著，提示PON1水平在AFP-LC和AFP-PHC中表達有明顯變化，AFP-PHC組PON1水平明顯低于AFP-LC組，該差異與同位素標記相對和絕對定量驗證結果一致。本研究結果顯示特異性優于上述文獻，而敏感性稍低，經過比較發現，主要原因是本研究ROC曲線下最大面積大于上述文獻，故而引起PON1水平在鑒別AFP-LC和AFP-PHC時存在敏感性和特異性的差異，但本研究結果具有更高的鑒別準確性;另外一個原因可能是本研究每組的樣本量均多于上述文獻所納入的每組樣本量，故本研究的結論更具有說服力[17]。但本研究得出血清PON1水平在鑒別AFP-LC和AFP-PHC的敏感性和特異性尚不夠高，故還需后續實驗深入研究。

AFP-LC組血清抗凝血酶-Ⅲ（AT-Ⅲ）水平明顯低于AFP-PHC組，AT-Ⅲ/PON1水平比值在鑒別AFP-LC和AFP-PHC具有更高的準確性，說明單一腫瘤標志物，無論是AFP、PON1水平還是其他標志的變化，在診斷或者否定是罹患肝癌上具有局限性，這對以后的實驗研究也提出了新的思考與方向。

有學者報道[18]，LC組PON1水平顯著低于健康對照組，并隨肝硬化程度加重而下降，PON1水平在LC患者Child-Pugh中，A級>B級>C級，且各分級之間PON1水平差異有統計學意義，說明PON1水平與Child-Pugh分級具有相關性，可反應肝硬化的嚴重程度。PHC的肝臟損傷程度更甚于肝硬化，PON1水平應更低。另外癌癥的發生過程中，氧化應激是一個重要的病原學因素。PON1是人體內源性清除系統之一，PON1水平下降、清除率降低，癌癥的發生率越高。而在本研究中也得出了明確的結論：肝癌組PON1水平明顯低于肝硬化組。但據相關學者報道，PON1水平與肺癌[19]、乳腺癌[20]、胃腸道惡性腫瘤[21-22]的風險性有一定的負相關性，和本研究PON1水平變化相似，提示單獨應用PON1水平來進行肝癌檢測的可行性較低。然而，經過研究探討，認為PON1水平對于肝癌，尤其是AFP陰性的原發性肝癌的診斷，在聯合其他檢測手段應用下還是具有一定的可行性，也能為臨床提供更準確的診斷依據。

綜上所述，本研究結果提示PON1水平對鑒別AFP-LC和AFP-PHC具有一定的可行性。在今后該課題的進一步研究中，可以進一步的擴大樣本的數量及范圍，同時仍需探索其與其他標志物聯合檢測，以便實現早期診斷AFP-PHC的目標。

[參考文獻]

[1]? Mackness B，Durrington PN，Mackness MI. Human serum paraoxonase [J]. General Pharmacology，1998，31（3）：329-336.

[2]? van Himbergen TM，van Tits LJ，Roest M，et al. The story of PON1：how an organophosphate-hydrolysing enzyme is becoming a player in cardiovascular medicine [J]. Neth J Med，2006，64（2）：34-38.

[3]? Akk？覦z H，Kuran S，Akg？觟llü E，et al. Effect of PON1 gene polymorphisms in Turkish patients with hepatocellular carcinoma [J]. Meta Gene，2013，1：93-101.

[4]? Mackness M，Mackness B. Targeting paraoxonase-1 in atherosclerosis [J]. Expert Opin Ther Targets，2013，17（7）：829-837.

[5]? Gaál K，Tarr T，Lrincz H，et al. High-density lipopoprotein antioxidant capacity，subpopulation distribution and paraoxonase-1 activity in patients with systemic lupus erythematosus [J]. Lipids Health Dis，2016，15：60.

[6]? 吳曾繁，吳劍勝，胡雪松，等.PON1基因多態性和冠心病關系的研究進展[J].醫學綜述，2010，16（3）：321-324.

[7]? 陰文麗，潘國忠.對氧磷酶1（PON1）及其基因多態性與動脈粥樣硬化的關系[J].中國心血管病研究，2014，12（1）：67-69.

[8]? 中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會·肝病學分會.病毒性肝炎防治方案[J].肝臟，2000，6（1）：65-67.

[9]? 中華人民共和國衛生部.原發性肝癌診療規范（2011年版）[J].腫瘤學雜志，2011，16（10）：929-946.

[10]? Camps J，Marsillach J，Joven J. Measurement of serum paraoxonase-1 activity in the evaluation of liver function [J]. World J Gastroenterol 2009，15（16）：1929-1933.

[11]? Mackness B，Quarck R，Verreth W，et al. Human paraoxonase-1 overexpression inhibits atherosclerosis in a mouse model of metabolic syndrome [J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol，2006，26（7）：545-550.

[12]? Tavori H，Aviram M，Khatib S，et al. Human carotid lesion linoleic acid hydroperoxide inhibits paraoxonase 1 （PON1） activity via reaction with PON1 free sulfhydryl cysteine 284 [J]. Free Radic Biol Med，2011，50（1）：148-156.

[13]? 舒宏.乙肝病毒相關肝病血清分子標志物的篩選、驗證和診斷價值[D].上海：復旦大學，2011.

[14]? Devarajan A，Shih D，Reddy ST. Inflammation，infection，cancer and all that the role of paraoxonases [J]. Adv Exp Med Biol，2014，8（24）：33-41.

[15]? 蔣興亮，張曉嵐，周京國，等.血漿對氧磷酯酶1活性與肝硬化Child-Pugh分級的關系[J].國際檢驗醫學雜志，2008，29（10）：880-882.

[16]? Zhou C，Cao J，Shang L，et al. Reduced paraoxonase 1 activity as a marker for severe coronary artery disease [J]. Dis Markers，2013，35（2）：97-103.

[17]? Gugliucci A. Activation of paraoxonase 1 is associated with HDL remodeling ex vivo [J]. Clin Chim Acta，2014，4（29）：38-45.

[18]? Gaidukov L，Tawfik DS. High affinity，stability，and lactonase activity of serum paraoxonase PON1 anchored on HDL with ApoA-I [J]. Biochemistry，2005，44（35）：843-854.

[19]? Elkiran ET，Mar N，Aygen B，et al. Serum paraoxonase and arylesterase activities in patients with lung cancer in a Turkish population [J]. BMC Cancer，2007，7：48-54.

[20]? Stevens VL，Rodriguez C，Pavluck AL，et al. Association of polymorphisms in the paraononase 1 gene with breast cancer incidence in the CPS-Ⅱ Nutrition Cohort [J]. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2006，15（6）：1226-1228.

[21]? Akcay MN，Yilmaz I，Polat MF，et al. Serum paraoxonase levels in gastric cancer [J]. Hepato-gastroenterology，2003，50（2）：ccxxv-ccxxvii.

[22]? Leviev I，Deakin S，James RW. Decreased stability of the M54 isoform of paraoxonase as a contributory factor to variations in human serum paraoxonase concentrations [J]. J Lipid Res，2001，42（4）：528-535.