Rho GTP酶結合蛋白2基因表達與卵巢癌的預后關系及機制分析

黃丹　周航　鄭建清

【摘要】 目的：探討卵巢癌組織Rho GTP酶結合蛋白2（RHPN2）表達變化與卵巢癌預后的關系。方法：用Kaplan-Meier plotter數據庫分析卵巢癌組織和正常組織中RHPN2基因表達的差異，并分析不同RHPN2基因表達狀態下卵巢癌的總生存差異，探索RHPN2基因表達的預后價值。

結果：Kaplan-Meier plotter數據庫包含了1 653個病例樣本。數據分析結果顯示正常卵巢組織中RHPN2基因低表達，卵巢癌組織中RHPN2基因高表達。根據預設的截斷值，308例為高表達組，347例患者為低表達。RHPN2基因低表達組卵巢癌中位總生存時間為52.03個月，高表達組為35.53個月，差異有統計學意義[風險比（HR）=1.47，95%CI（1.2，1.8），P=0.001]。結論：RHPN2基因高表達是降低卵巢癌總生存的不良預后因素。

【關鍵詞】 卵巢癌; RHPN2; Kaplan Meier plotter數據庫; 生存分析; 預后因素

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.19.069 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2019）19-0-02

Relationship between Expression of Rho GTPase-binding Protein 2 Gene and Prognosis of Ovarian Cancer and Its Mechanism/HUANG Dan，ZHOU Hang，ZHENG Jianqing.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（19）：-153

【Abstract】 Objective：To investigate the relationship between the expression of Rho GTPase binding protein 2（RHPN2） in ovarian cancer and its prognosis value.Method：The Kaplan-Meier plotter database was used to analyze the difference of RHPN2 gene expression in ovarian cancer tissues and normal tissues，and the total survival difference of ovarian cancer under different RHPN2 gene expression status was analyzed.The prognostic value of RHPN2 gene expression was explored.Result：The Kaplan-Meier plotter database contained 1 653 case samples.The results of data analysis showed that the RHPN2 gene was down-regulated in normal ovarian tissues，and the RHPN2 gene was highly expressed in ovarian cancer tissues.According to the preset cut-off value，308 cases were included in high expression group and 347 cases in low expression group.The median survival time of ovarian cancer in the low expression group of RHPN2 gene was 52.03 months，and that in the high expression group was 35.53 months，the difference was statistically significant[hazard ratio（HR）=1.47，95%CI（1.2，1.8），P=0.001].Conclusion：High expression of RHPN2 gene is a poor prognostic factor for reducing the overall survival of ovarian cancer.

【Key words】 Ovarian cancer; RHPN2; Kaplan-Meier plotter database; Survival analysis; Prognostic factors

First-authors address：Affiliated Hospital of Zunyi Medical College，Zunyi 563003，China

卵巢癌（ovarian cancer，OC）是最常見的婦科惡性腫瘤之一，在女性生殖器官惡性腫瘤中，卵巢癌的發病率占第三位，僅次于宮頸癌及子宮內膜癌，但由于早期診斷困難和化療耐藥，且易發生腹腔種植轉移或累及腸道等，卵巢癌的死亡率居第一位，其五年生存率僅為30%左右[1]。45%～60%的病理確診為卵巢癌的患者最終將死于卵巢癌[2-3]。卵巢癌的病因尚不十分明確，可能與遺傳因素、內分泌因素等有關，近年來研究發現，卵巢癌的發生、發展與多種基因的突變、失活、表達異常有關。Rho GTP酶結合蛋白2（Rho GTPase binding protein 2，RHPN2）基因，即rhophilin2，定位于染色體19q12-13，是一種RhoA結合蛋白，但其生物學功能仍然模糊不清[4]。目前關于RHPN2功能的研究較少，而且尚無RHPN2與卵巢癌關系的報道，更不清楚RHPN2基因與卵巢癌預后的關系。本研究利用Kaplan-Meier Plotter數據庫分析卵巢癌組織RHPN2基因表達變化及其與卵巢癌預后的關系，并探索RHPN2基因在腫瘤生物學行為中的機制，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本文的數據分析是基于網絡數據庫進行的大數據分析，數據來源于Kaplan-Meier在線數據庫（http：//kmplot.com/analysis）。目前該Kaplan-Meier數據庫提供了1 648例卵巢癌患者的基因表達結果和生存資料，其中有655例患者提供了RHPN2基因的長期隨訪資料。使用者可以利用該數據庫實現目的基因表達水平與腫瘤患者的總生存（OS）和無進展生存（PFS）的相關性分析[5]。

1.2 方法

卵巢癌組織RHPN2基因表達變化與卵巢癌預后關系數據分析的設定條件，（1）腫瘤類型：Ovarian Cancer;（2）目的基因：RHPN2，基因官方代碼為：227196_at（Affy ID）;（3）基因表達分組條件：系統自行選擇最佳截斷值;其他設定為數據庫默認設定。

1.3 觀察指標

主要觀察指標為RHPN2表達結果、不同RHPN2表達下卵巢癌患者的總生存（OS）。

1.4 統計學處理

利用KM plotter在線數據庫通過R語言直接獲得Kaplan-Meier生存曲線圖，該生存曲線同時提供主要計算結果，包括組間風險比（HR）及其95%置信區間（95%CI）和相應P值。總生存時間以中位生存時間提供，單位為個月，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 數據檢索結果

共檢出5個正常組織樣本和1 648個卵巢癌組織樣本。正常組織RHPN2基因中位表達105（表達范圍80～192），顯著低于癌組織的中位表達1 606（表達范圍20～20 059），差異有統計學意義（P=0.001）。共有655例帶有RHPN2基因檢測結果的卵巢癌患者具有長期隨訪結果。納入分析的卵巢癌組織中RHPN2基因表達的截斷值為1 704，根據預設的截斷值，308例為高表達組，347例患者為低表達。

2.2 總生存結果

RHPN2基因低表達組卵巢癌中位總生存時間為52.03個月，高表達組為35.53個月，RHPN2基因高表達組預后顯著差于低表達組，差異有統計學意義[HR=1.47，95%CI（1.2，1.8），P=0.001]，總生存曲線見圖1。

3 討論

在本文中，筆者旨在探索人類Rhophilin-2基因的預后價值。Rhophilin-2是一種在人體內普遍表達的Rho結合蛋白，是Rhophilin家族的新成員。 研究者首次在老鼠體內發現了一種可以和Rho蛋白GTP酶分子結合的蛋白，將其命名為RHPN1，而后在人體內也發現了一種與RHPN1高度同源，結構相似的Rho結合蛋白，將其命名為RHPN2，即Rhophilin-2。Rhophilin-2和Rhophilin-1的結構域結構具有49%的氨基酸同源性。Rhophilin-1和Rhophilin-2的Rho結合結構域內的氨基酸相似性也與它們觀察到的RhoA結合特性相關。研究實驗發現，Rhophilin-1和Rhophilin-2與GDP和GTP結合的RhoA結合，但不與其他相關的GTP酶如Rac1或RhoE結合。此外，Rhophilin-2的Rho結合位點中的雙點突變有效地阻斷了與GDP-和GTP-結合的RhoA的結合[6]。Danussi等[7]通過Multi-Reg技術鑒定了RHPN2，證實rhophilin-2是一種具有間充質特征的新型驅動基因。試驗隨訪確定RHPN2促進神經干細胞（neural stem cells，NSC）的間充質轉化，并增加不同神經膠質瘤細胞模型中腫瘤細胞的遷移和侵襲。重要的是，RHPN2擴增和過表達顯著降低膠質瘤患者存活率，研究支持這種蛋白質參與惡性膠質瘤的侵襲性的特征[7]。目前，研究者多種惡性腫瘤，包括惡性腦膠質瘤[7]、乳腺癌[8]、結直腸癌[9]、肺癌[10]中發現RHPN2有不同程度的高表達。然而在卵巢中仍然很少見到與Rhpn2相關的研究報道[11]。

筆者利用Kaplan-Meier在線數據庫，獲得了大樣本數據資料，結果發現，正常組織RHPN2基因中位表達105（表達范圍80～192），顯著低于癌組織的中位表達1 606（表達范圍20～20 059），差異有統計學意義（P=0.001）。與蔡圣蕓[11]的研究結果相似，其通過提取卵巢癌細胞的總RNA進行RT-PCR試驗，檢測RHPN2的表達情況，結果顯示，在卵巢癌臨床樣本中，陽性率為45.83%（11/24），表達水平顯著高于癌旁組織的20.83%（5/24），差異有統計學意義（P<0.05）[11]。此外，筆者發現，RHPN2基因低表達組卵巢癌中位總生存時間為52.03個月，高表達組為35.53個月;差異有統計學意義[HR=1.47，95%CI（1.2，1.8），P=0.001]。從生存曲線圖可以看出，RHPN2基因高表達預后顯著差于低表達。而這個結論與何嘉曦等[10-12]的發現相似，RHPN2高表達者比RHPN2低表達或表達陰性者生存期和無瘤生存期均明顯延長，提示RHPN2基因表達水平的高低可預測卵巢癌患者的預后。

綜合上述文獻資料和筆者的研究結果，認為RHPN2基因高表達是降低卵巢癌總生存的不良預后因素之一，但是否可以作為卵巢癌預后的獨立影響因素，還需要進一步的研究證實。

參考文獻

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[11]蔡圣蕓.卵巢癌預后相關新基因的鑒定及其功能研究[D].上海：第二軍醫大學，2016.

[12] Barger C J，Zhang W，Sharma A，et al.Expression of the POTE gene family in human ovarian cancer[J].Sci Rep，2018，8（1）：17136.

（收稿日期：2019-02-26） （本文編輯：郎序瑩）