兒童呼吸系統感染性疾病中淋巴細胞亞群的改變及臨床價值*

呂曉艷，肖賀欣，王 言，朱長吉，王 瑩

(吉林大學第二醫院檢驗科，吉林長春 130021)

感染性疾病是兒童發病率最高的一類疾病，其中以呼吸系統感染性疾病發病率最高，占兒科門診總數60%以上，肺炎患兒占兒科住院患者的60%居首位，嚴重威脅兒童健康[1]。兒童呼吸道感染性疾病主要由細菌、病毒或支原體等病原體入侵呼吸道引起，其發生、發展和預后均與患兒機體免疫功能密切相關。由流式細胞術檢測的淋巴細胞亞群分析已廣泛應用于臨床，在免疫功能評估方面起到不可或缺的作用。淋巴細胞亞群是機體免疫防御體系中的重要組成部分，可反映機體細胞免疫和體液免疫水平，其變化與感染性疾病類型和程度有關[2-3]。因此淋巴細胞亞群的檢測對判斷患兒病情、指導臨床治療以及判斷預后等方面都有極為重要的意義。本研究回顧性調查了兒童呼吸系統感染性疾病外周血淋巴細胞亞群的變化，并探討了CD4+/ CD8+T細胞比值(T4/T8)在兒童呼吸系統感染性疾病中的輔助診斷價值，為其臨床應用提供理論依據和數據支持。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取吉林大學第二醫院2018年1-10月兒童呼吸系統感染性疾病患者121例作為感染組，納入標準：(1)結合臨床癥狀以及影像學、病原體分離、血常規、血清學檢測結果進行分析，符合 《兒科學》[4]上呼吸道感染、支氣管炎、毛細支氣管炎、肺炎診斷標準;(2)研究前兩周內未使用任何免疫調節藥物;(3)病歷資料完善，診斷明確。排除標準：(1)自身免疫疾病或免疫缺陷病;(2)合并其他部位感染；(3)心肝腎功能嚴重異常;(4)過敏性體質和家族史;(5)嚴重營養不良患兒。年齡范圍為0～13歲，平均年齡5.8歲，其中男68例、女53例，包括上呼吸道感染36例，支氣管炎33例，毛細支氣管炎14例，肺炎38例。再選擇同期健康體檢兒童19例作為對照組，其中男9例、女10例，平均年齡5.2歲。比較感染組與對照組患兒年齡、性別等一般資料，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究屬于回顧性研究，經醫院倫理委員會批準，符合醫學倫理要求。

1.2儀器與試劑

1.2.1淋巴細胞亞群分析 采用美國貝克曼公司 CytoFLEX 流式細胞儀。抗體為美國貝克曼公司四色鼠抗人單克隆流式抗體(CD45/CD4/CD8/CD3和CD45/CD19/CD56/CD3)。溶血素、鞘液、清洗液均采用貝克曼公司原裝配套試劑。

1.2.2WBC計數 采用Sysmex公司的 XN-2000全血細胞計數儀檢測WBC絕對計數。試劑均采用Sysmex原裝配套試劑。質量控制采用常規室內質控方法。

1.2.3C反應蛋白(CRP)檢測 采用免疫散射比濁法檢測CRP水平，所用儀器和試劑為美國貝克曼公司Immage800全自動分析儀及原廠配套試劑。質量控制采用常規室內質控方法。

1.3方法 回顧性觀察和記錄納入的呼吸系統感染性疾病患兒、體檢健康兒童一般資料及血常規、CRP、細菌培養、鑒定、病原菌分布狀況和淋巴細胞亞群檢測結果。淋巴細胞亞群的檢測：清晨抽取研究對象2 mL外周血置于肝素抗凝真空管中，要求在48 h內進行淋巴細胞亞群檢測。取流式上樣管，分別向試管中加入抗體10 μL，再加入肝素抗凝血100 μL，避光孵育20 min后加入溶血劑500 μL，孵育20 min后加溶血劑10 min，離心、洗滌、定容后立即上機，流式細胞術進行淋巴細胞亞群檢測，4 h內檢測完畢。

2 結果

2.1兒童常見呼吸系統感染性疾病外周血淋巴細胞亞群的比較 與對照組比較，感染組總 T 細胞(CD3+)百分比差異無統計學意義(P>0.05)； CD4+T細胞 (CD3+CD4+)、T4 /T8、NK 細 胞(CD3-CD16+CD56+)百分比降低，CD8+T細胞百分比(CD3+CD8+)增高，差異有統計學意義(P<0.05)。與對照組比較，感染組B 細胞(CD3-CD19+)百分比差異無統計學意義(P>0.05)。見圖1。根據臨床診斷結果將感染組分為4組：上呼吸道感染組，支氣管炎組，毛細支氣管炎組、肺炎組。與對照組比較，毛細支氣管炎組、肺炎組CD3+T細胞百分比增高，差異有統計學意義(P<0.05)，而上呼吸道感染組及支氣管炎組CD3+T細胞百分比差異無統計學意義(P>0.05)。4個疾病組與對照組比較，CD4+T細胞均有不同程度的降低，而CD8+T細胞百分比均增高，差異均有統計學意義(P<0.05)。肺炎組B細胞百分比高于對照組(P<0.05)，其余3個疾病組與對照組比較差異均無統計學意義(P>0.05)。NK細胞百分比在支氣管炎、毛細支氣管炎、及肺炎組均明顯降低。見表1。

表1 兒童呼吸道感染性疾病各組外周血淋巴細胞亞群結果(%)

注：與對照組比較，*P<0.05；與上呼吸道感染組比較，#P<0.05；與支氣管炎組比較，△P<0.05；與毛細支氣管炎組比較，&P<0.05

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

2.2CRP、WBC與T4/T8比值3項指標的水平比較及ROC曲線分析 與對照組相比，兒童呼吸系統感染組CRP、WBC值明顯增高，T4/T8比值顯著降低，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表2。繪制3項指標用于兒童呼吸系統感染性疾病的ROC曲線， CRP、WBC、T4/T8比值曲線下面積分別為0.754、0.759、0.696，當CRP的cut-off值為2.20 mg/L時，靈敏度、特異度分別為74.8,55.6；當WBC的cut-off值為6.85×109/L時，靈敏度、特異度分別為66.5%、61.1%；當T4/T8的cut-off值為1.47時，靈敏度、特異度分別為77.8%,51.6%。見圖2、表3。

表2 CRP、WBC、T4/T8比值3項指標檢測水平的比較

注：與對照組比較，*P<0.05

圖3 3項指標用于兒童呼吸系統感染性疾病的ROC曲線

表3 CRP、WBC、T4/T8比值診斷兒童呼吸系統感染性疾病ROC曲線參數

3 討論

感染性疾病是兒童發病率最高的一類疾病，往往具有起病較急、發展快、病情重等特點，是導致兒童死亡的主要原因之一，其中以呼吸道感染性疾病發病率最高。幼兒由于其呼吸道系統解剖生理特點以及機體免疫特點,極易發生呼吸系統感染性疾病。因此，加強兒童呼吸道感染性疾病研究是很有必要的。感染性疾病是各種病原體感染引起的，宿主免疫功能是影響患兒疾病發生、病情發展以及預后的重要因素。外周血淋巴細胞亞群的測定可以實時反映機體免疫功能狀態，從而幫助臨床判斷感染類型以及全面、早期地評估患兒病情，對提高臨床療效、改善預后尤為重要[5]。

人體的免疫系統主要承擔著免疫防護、免疫穩定以及免疫監視的作用，對外源性抗原物質如細菌、病毒等病原體的入侵，以及體內出現的異常細胞如腫瘤細胞、胞內微生物感染細胞等，能及時產生免疫應答予以殺滅，維護機體內環境的穩態。人體免疫功能主要靠免疫細胞 T 細胞、 B 細胞以及自然殺傷NK細胞，以及免疫球蛋白等炎性介質執行[6-7]。其中T細胞是機體免疫應答的重要參與者，執行細胞免疫功能。CD4+T細胞和CD8+T細胞是T淋巴細胞中功能相異的兩個亞群，其中CD4+T細胞主要為輔助性T細胞(Th)，通過分泌細胞因子和表達膜分子發揮效應功能，起著參與細胞免疫應答，輔助B細胞產生調理性和中和性抗體的作用。CD8+T細胞主要為細胞毒性T細胞(Tc)，通過釋放毒性蛋白和導致細胞凋亡殺傷靶細胞。二者形成T細胞網絡，通過細胞間的直接接觸或通過釋放細胞因子，導致或抑制免疫效應，從而雙向調控機體獲得性免疫應答。B淋巴細胞則能通過產生分泌各種免疫球蛋白和抗體，從而介導體液免疫應答[8]。NK細胞是機體抗感染、抗腫瘤的第一道防線，發揮介導病原體感染細胞的細胞毒作用[9-10]。

本研究檢測了121例常見嬰幼兒呼吸道感染性疾病淋巴細胞亞群變化情況，分析了各指標與疾病的相關性，結果提示，與健康兒童相比，呼吸道感染組總T細胞百分比并沒有明顯改變,但CD4+T細胞百分比顯著降低，CD8+T細胞明顯增高，導致T4/T8比值顯著降低。B細胞比例略有升高，提示呼吸道感染組兒童普遍存在細胞免疫功能低下，體液免疫功能相對增強現象，個別感染嚴重患兒甚至出現免疫功能紊亂。上呼吸道感染、支氣管炎、毛細支氣管炎、肺炎組比較，以肺炎組改變尤為明顯，T4/T8水平降至0.9±0.4(P<0.01)，出現倒置現象，說明該組患兒細胞免疫功能低下尤為明顯，提示兒童呼吸系統感染性疾病細胞免疫功能紊亂程度與患兒病情嚴重程度有一定相關性。有報道亦提出總T細胞、T4細胞百分比、T4/T8、NK細胞百分比與下呼吸道感染性病情呈負相關，與T8細胞、B細胞百分比呈正相關[11]，這與本研究結果基本是一致的。

另外，與對照組比較，支氣管炎、毛細支氣管炎及肺炎組NK細胞百分比顯著降低。NK細胞在機體發揮著非特異性固有免疫的功能，可不依賴抗體、補體和預先致敏作用即可快速殺傷靶細胞，并與單核細胞、粒細胞等協同起到抗感染作用[11]。該結果提示患兒機體固有免疫功能受到影響，病原體快速清除能力受到抑制，這可能和患兒易反復發生感染有關。因此監測NK細胞水平有助于掌握患兒病情，指導臨床治療。

本研究還探討了T4/T8比值在兒科呼吸系統感染性疾病的診斷效率和價值。目前兒童傳統呼吸道感染性疾病采用WBC、CRP、降鈣素原等指標來進行粗略判斷[13-14]。更為準確的血培養和病原學鑒定時間較長，不適合門診和急診患者。因此，探求新型、有臨床價值的檢測指標是有必要的。在淋巴細胞亞群報告中，T4/T8比值是反映淋巴細胞功能強弱的一個較為簡單和明確的指標。CD4+和CD8+T細胞在感染進程中發揮著正、負調節作用，形成T細胞網絡，雙向調控免疫應答。大多病原微生物感染不同程度上將引起。CD4+T淋巴細胞數量上的降低，或者CD8+T細胞反應性增高，二者均可導致T4/T8比值降低甚至倒置[15-18]。繪制T4/T8比值用于兒童呼吸系統感染性疾病的ROC曲線，并與臨床常用指標CRP、WBC比較，考察其診斷價值。結果顯示，CRP、WBC、T4/T8比值曲線下面積分別為0.754、0.759、0.696，表明三者對兒童感染性疾病均有一定診斷價值。與CRP、WBC相比，T4/T8比值曲線下面積略低，但靈敏度較高，當T4/T8的cut-off值為1.47時，靈敏度為77.8%，略高于WBC和CRP。基于上述研究結果可知，T4/T8指標的檢測對兒童呼吸系統感染性疾病有良好的診斷價值。但由于本文并未對感染性疾病病原體進行分類，針對于不同的感染類型，T4/T8比值的診斷效率有待進一步驗證。

4 結論

兒童呼吸系統感染性疾病患者普遍存在免疫功能受損現象，天然免疫受到抑制，而特異性免疫調節功能下降，甚至紊亂。加強淋巴細胞亞群檢測有助于判斷病情，指導臨床治療以及評估預后。針對于免疫功能較低，反復發生感染的患兒，適當進行免疫調節治療，對患兒病情的康復，提高治療效果可能有一定的價值。另外，血清T4/T8比值是一個有較高臨床應用價值的指標，可與CRP水平及WBC聯合檢測，作為診斷兒童感染性疾病的臨床常規檢查指標。