TLR4 基因rs1927914的多態性與缺血性腦卒中易感性的Meta分析*

劉遠興，王士中，劉險輝，謝運泉，易宏淦

(梅州市人民醫院，廣東梅州 514031)

腦卒中是成人身體殘疾的主要原因，發病率呈逐年上升趨勢，給國家帶來巨大經濟和社會負擔，尤其是中低收入國家[1-2]。其中，缺血性腦卒中占所有腦卒中的80%[3]，其中包括隱源性、間隙性和血栓栓塞性腦卒中，并且通常在腦部的血液供應中斷時發生[4]。缺血性腦卒中發病機制復雜，多由遺傳和環境因素共同作用致病，其腦缺血后所致的炎性反應是腦組織受損的重要病理生理機制之一。近年來，由于Toll樣受體(TLR)家族作為一組跨膜受體介導的炎癥信號通路的激活而被廣泛關注。其中，TLR4在缺血性卒中的發生、發展和繼發性腦損傷中起重要作用，TLR4基因的多態性的表達與缺血性腦卒中也受到密切關注。目前，不同研究對于TLR4基因rs1927914多態性與缺血性腦卒中易感性的關聯性存在爭議。本文通過對研究文獻進行Meta分析評估TLR4基因rs1927914多態性與缺血性腦卒中的易感性，期望為缺血性腦卒中發病的遺傳易感性提供循證學依據。

1 材料與方法

1.1資料來源 檢索PubMed、ISI、EMBASE、Cochrane、CBM、CNKI、學術會議資料和學位論文等數據庫，全面收集2001年1月至2017年2月發表的有關TLR4基因多態性與缺血性腦卒中易感性的病例對照和隊列研究文獻，檢索詞包括：“toll-like receptor 4”“TLR4 genepolymorphism”“TLR4”“rs 1927914”“Ischemic stroke”“Clots”。

1.2文獻納入標準排除標準 納入標準：(1)文獻通過病史和體征、影像學檢查、實驗室檢查、疾病診斷和病因分型等診斷納入已確診缺血性腦卒中的疾病患者；(2)文獻為隊列研究和病例對照研究；(3)文獻包括T等位基因和缺血性腦卒中的關聯性以及TLR4 rs 1927914基因多態性與缺血性腦卒中易感性相關的關系數據，同時包括以上數據的OR值和95%CI以提供進一步統計計算；(4)單一數據來自同一個種族、同一個時期；(5)患者選擇方式為連續性病例或某種抽樣方式，對一般資料沒有嚴格的限制。排除標準：(1)納入的缺血性腦卒中患者同時合并其他系統疾病；(2)隊列研究沒有提供詳細信息的病例研究；(3)同一數據來源于不同種族人群或不同時期的；(4)病例報道；(5)重復報道。

1.3數據提取和質量評估 兩位作者獨立完成文章數據的提取。應用Cochrane風險因素評估(Cochrane risk of bias tool)對RCT研究進行質量評估，而回顧性文章的質量評估則用修改后的Newcastle-Ottawa量表，Newcastle-Ottawa量表包括選擇、可比性和結局三個部分，總分是9分。RCT文獻和得分高于7分的回顧性研究被認為是高質量文章，4～7分的為中質量文獻。所有的數據均由兩個樣本收集員進行收集評估，如果兩個人出現分歧，則共同商議并聯合第三位收集員進行確認。提取的基本信息包括作者姓名、每組患者人數、患者年齡、納入患者所在國家、隨訪及每組之間是否配平等。

1.4敏感性分析和亞組分析 排除不符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律文獻，進行敏感性分析，以確定Meta分析的穩定性。文獻中的患者種族不同將文獻分為歐美人口組及亞洲人口組來進行亞組分析，以確定異質性來源。

1.5統計學處理 Stata 12.0軟件作為本研究統計分析的軟件。應用顯性模式(TT+TCvs. CC)、隱性模型(TTvs. TC+CC)和共顯性模型(Tvs. C)分別對缺血性腦卒中的基因型和等位基因進行比較，計算等位基因T的OR值及基因頻率；對資料進行異質性檢驗(采用Q檢驗和I2檢驗對納入研究間的異質性進行檢驗，若P<0.10或I2≥50%， 表明各研究間異質性較大)，若各研究結果間的同質性較好，則采用固定效應模型進行數據合并，若各研究結果間具有異質性，采用校正后的隨機效應模型進行數據合并。

2 結果

2.1研究一般特點 在數據庫中一共檢索到2 157篇相關文獻，其中有501篇為重復文獻，通過閱讀標題與摘要后初步排除了1 553篇文獻，通過全文數據庫找到剩余的103篇文獻的全文，仔細閱讀后，最后可以納入此次Meta分析的文獻有13篇[6-18]。所有13個研究均為病例對照研究，其中有9篇文章納入國外患者，另外4篇文章納入患者為中國人群。一般情況見表1。每篇文章中所出現的TLR4rs 1927914基因多態性基因型分布見表2所示，共有13項與缺血性腦卒中TLR4基因rs 1927914位點多態性研究符合納入該項研究的條件[6-18]。

2.2Meta分析結果 Meta分析結果顯示，顯性模型：OR=1.384，95%CI1.062～1.804，P=0.016，共顯性模型：OR=1.232，95%CI1.002～1.515，P=0.048，隱性模型：OR=1.246，95%CI0.912～1.703，P=0.168，見表3。

表1 被納入13篇文獻的基本信息

注：NA表示該項無數據

表2 TLR4rs 1927914基因多態性基因型分布

表3 Meta分析TLR4 rs 1927914位點T等位基因多態性與缺血性腦卒中之間的關系

注：顯性模式=TT+TCvs.CC；隱性模型=TTvs.TC+CC；共顯性模型=Tvs.C

2.3異質性和敏感性分析 研究來源的異質性和敏感分析如表3所示，經過排除不符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律文獻，異質性有所減小；TLR4 rs 1927914的T等位基因遺傳多態性和缺血性腦卒中顯性模型(OR=1.653，95%CI1.416～1.930，P=0.000)和共顯性模型(OR=1.525，95%CI1.350～1.723，P=0.000)與之前Meta分析結果一致，說明本Meta分析結果穩定。

2.4TLR4 rs 1927914(TT+TCvs. CC)多態性與缺血性腦卒中易感性相關的亞組分析 結果顯示：歐美人口中T等位基因和缺血性腦卒中的患病風險具有顯著關聯性(顯性模型：OR=1.201，95%CI1.080～1.322，P=0.021；共顯性模型：OR=1.248， 95%CI1.002～1.494，P=0.043)，但在亞洲人口中TLR4基因的rs1927914位點與缺血性腦卒中的關聯性未見顯著差異(顯性模型：OR=0.667，95%CI0.547～0.787，P=0.608；隱形模型：OR=1.152，95%CI1.029～1.275，P=0.061；共顯性模型：OR=0.725，95%CI0.546～0.97，P=0.153)。見表4。同時進行亞組分析后，亞組中的異質性(I2)均有所降低，可見人口因素是造成異質性的一個因素。

表4 亞組分析TLR4 rs 1927914位點T等位基因多態性與缺血性腦卒中之間的關系

注：顯性模式=TT+TCvs. CC；隱性模型=TTvs.TC+CC；共顯性模型=Tvs.C

3 討論

目前的大量研究提示缺血性腦卒中的患病率在種族間有很大的差異，有成家族和種族聚集的趨勢。多項研究認為缺血性腦卒中具有基因遺傳性，家族人員患病風險有顯著增高的表現，雖然缺血性腦卒中也與環境因素有關，但是遺傳基因所占的因素亦不容忽視，已有研究結果表明遺傳因素在該病中起著至關重要的作用，但仍有爭議，如現有研究中，GU等[5]報道TLR4基因rs1927914與男性缺血性腦卒中易感性有關;然而，XU X等認為rs1927914與缺血性腦卒中無關。

目前，多重易感性研究已經證明相關基因會增加缺血性腦卒中的風險，目前明確的相關基因包括血管緊張素轉換酶(ACE)，亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)，絲氨酸蛋白酶抑制肽1(SERPINE1)，載脂蛋白E(APOE)[6]，細胞色素P4502C19(CYP2C19)和血小板衍生生長因子D(PDGF-D)，以及染色體12p13[16]。但對于TLR4基因特別是rs1927914片段多態性是否與缺血性腦卒中有關目前尚難定論。TLR基因全長216.86 kb，位于9q11.7是一種Ⅰ類跨膜蛋白，由胞外域、跨膜結構域和細胞內TIR結構域組成。 TLR4通過細胞外富含亮氨酸的重復序列的胞外結構域識別和綁定各種配體,激活TRIF信號通路，促進各種炎癥因子釋放[19-20]。

多項研究證實TLR4在動脈粥樣硬化的多個病理階段都發揮重要作用[18]。目前研究發現TLR4的3個單核苷酸多態性(SNP))位點(rs1927914、rs1927911、rs2149356)與冠心病、動脈粥樣斑塊鈣化及血脂水平有關，是造成缺血性腦卒中的重要危險因素[19]。較多研究已證實TLR4基因位點rs1927911、rs2149356與缺血性腦卒中存在風險相關性[19,21]。在TLR4基因變異與缺血性腦卒中發病風險相關的研究，有學者進行了一項連鎖不平衡分析，對缺血性腦卒中患者與健康人群的染色體基因對比研究發現TLR4基因的rs 1927914位點與缺血性腦卒中的關聯程度較強。通過納入分析13篇文獻研究繼續深入探討位點上的等位基因型，其中9篇文獻納入患者為國外人口，其中有4篇文獻認為攜帶TLR4基因的rs 1927914位點上的T等位基因是缺血性腦卒中的危險因素，但另外5篇文獻研究表明TLR4基因的rs 1927914位點上的T等位基因不是缺血性腦卒中的危險因素。同時，有4篇文獻納入患者為中國人群，結果一致認為TLR4基因rs 1927914位點上的T等位基因不是缺血性腦卒中的危險因素。本課題組整合13篇文獻后的Meta分析發現：TLR4基因rs 1927914位點上的T等位基因確實是缺血性腦卒中的危險因素，并且在亞組中進一步證明，不同人種中TLR4基因rs 1927914位點上的T等位基因對缺血性腦卒中的易感性不同，歐美人種T等位基因高時，更易出現缺血性腦卒中，但對于亞洲人口這一結論尚缺乏有效證據。

4 結論

在歐美人口中TLR4基因rs 1927914位點上的T等位基因很可能與缺血性腦卒中的易感性相關，但對于亞洲人口易感相關性尚缺乏有效證據。當然，此次Meta分析也存在一些不足：首先入選文獻的地區病例數之間以及對照組之間的種族不同，國內文獻華南區域的數據偏少，對照匹配之間存在一定的同質性差異，所以在分析中還需要把握此方面系統誤差，本研究分析從一定程度上給缺血性腦卒中基因學研究提供了有價值的參考依據。鑒于此，筆者認為缺血性腦卒中的基因型的檢測結果存在因種族不同導致的差異。